Cómo detectar el fipronil en los huevos: consejos para los laboratorios de detección de plaguicidas

Simon Hird

Tiempo de lectura: 6 minutos

Tanto si se utiliza LC-MS/MS como GC-MS/MS para analizar los plaguicidas en los huevos, la clave del éxito de la cuantificación es la limpieza de la muestra

A finales de julio de 2017 se retiraron millones de huevos de las estanterías de los supermercados en más de una docena de países europeos -y hasta Hong Kong y Corea del Sur- tras descubrirse que algunos estaban contaminados con el insecticida fipronil.

El 20 de julio de 2017, una notificación de funcionarios belgas a través del portal RASFF de la UE alertaba de que se había encontrado fipronil en huevos producidos por algunas granjas de los Países Bajos en concentraciones de entre 0,0031 y 1,2 mg/kg.

La Agencia de Normas Alimentarias del Reino Unido (FSA) dijo que 700.000 huevos importados a Gran Bretaña se habían visto afectados, según el análisis de la BBC sobre la crisis de contaminación por pesticidas. El episodio, que supuso el cierre de 180 granjas para realizar más pruebas, se convirtió en la mayor retirada de huevos de Europa. El escándalo puede golpear duramente a los agricultores holandeses, dado que entre el 60 y el 70 por ciento de los huevos holandeses se exportan a países como Alemania, que en 2016 recibió unos 5.000 millones de huevos de Holanda.

Y ese no ha sido el final de esta alarma de seguridad alimentaria basada en pesticidas: El 12 de junio de 2018, Alemania retiró 73.000 huevos holandeses contaminados después de que se detectaran residuos de fipronil por encima de los límites de la UE en huevos procedentes de una granja ecológica.

¿Qué es el fipronil?

El fipronil es un insecticida de la clase de los fenilpirazoles que se utiliza como plaguicida para proteger las semillas de los insectos; para el control profesional de plagas para combatir la infestación de insectos como las cucarachas; así como en medicina veterinaria para combatir las pulgas, los ácaros y las garrapatas en perros y gatos. El fipronil es muy tóxico y no está autorizado para su uso como medicamento veterinario, biocida o plaguicida en torno a los animales productores de alimentos. Por lo tanto, nunca debería haber llegado a un gallinero.

La Organización Mundial de la Salud (OMS) afirma que el fipronil es "moderadamente tóxico" para las personas si se consume en grandes cantidades, y puede tener efectos peligrosos en los riñones, el hígado y las glándulas tiroideas. También puede provocar náuseas, vómitos, dolor abdominal, mareos y ataques epilépticos, aunque sus efectos son reversibles.

Los laboratorios de análisis de alimentos necesitan métodos sensibles para detectar el fipronil

Las autoridades de seguridad alimentaria y la industria de la alimentación están "luchando" para evaluar la magnitud del problema. Se está llevando a cabo un control adicional de los huevos en busca de residuos de fipronil para garantizar la protección de los consumidores. También hay interés en analizar los ovoproductos y la carne de las aves de corral ponedoras.

Con el fin de controlar el abuso de fipronil y la seguridad alimentaria, los laboratorios que evalúan los huevos importados en busca de plaguicidas necesitan un método analítico sencillo, sensible y fiable para determinar la presencia de residuos de fipronil en el pollo, el huevo y el músculo.

La definición de residuo para el fipronil en los huevos es la suma del fipronil parental y del metabolito fipronil sulfona. Su límite máximo de residuos (LMR) por defecto es de 0,005 mg/kg.

El fipronil y la fipronil sulfona pueden detectarse y cuantificarse mediante cromatografía líquida o gaseosa emparejada con espectrometría de masas de triple cuadrupolo, LC-MS/MS o GC-MS/MS.

Para garantizar el éxito del análisis, se aplica una etapa de preparación de la muestra mediante extracción en fase sólida (SPE), utilizando:

  • DisQuE dispersive SPE para la extracción de plaguicidas multirresiduos QuEChERS de forma sencilla y directa, utilizando los métodos AOAC o CEN.
  • Oasis PRiME HLB SPE en modo pass-through, para una eliminación cómoda y eficaz de las grasas y los fosfolípidos después de su extracción de pesticidas multirresiduos QuEChERS.

 

Un instrumento GC conectado a un espectrómetro de masas Xevo TQ-S micro triple quad que utiliza una fuente de ionización APGC. (c/o Primoris Belgium)

El reto del análisis del fipronil: La gestión de los efectos de la matriz

El fipronil y la fipronil sulfona pueden determinarse mediante LC-MS/MS con ionización por electrospray (EI) en modo de iones negativos. Sin embargo, los efectos de matriz de los coextractores coeluyentes pueden suprimir la señal de espectrometría de masas, reduciendo la sensibilidad del método.

Una alternativa es utilizar la cromatografía de gases. Waters ofrece un atmospheric pressure GC (APGC) ionization source que puede utilizarse con la GC como entrada a un espectrómetro de masas de triple cuadrupolo para la cuantificación a nivel de trazas. La APGC ofrece una ionización "suave", lo que significa que se observa una menor fragmentación para muchos compuestos en comparación con técnicas como la EI. Una fragmentación reducida puede proporcionar una mayor sensibilidad y especificidad, simplificando así la selección de iones precursores en los análisis MS/MS.

La ventaja de utilizar APGC para la GC-MS/MS en lugar de EI es que el fipronil retiene la mayor parte de la corriente iónica en un único ion precursor, [M+H]+ a m/z 437, en lugar de tener que seleccionar un ion precursor de entre los diversos iones de fragmento observados utilizando EI (por ejemplo, m/z 367 en Le Faouder et al. 2007). El uso de la técnica de ionización suave de APGC combinada con la MS/MS mejora la sensibilidad.

Aunque existen efectos de matriz asociados a la GC-MS/MS, éstos se relacionan con la mitigación del impacto de los sitios activos en el revestimiento de la GC más que con la supresión de iones. Laboratorios como Primoris Belgium han observado límites de detección más bajos al utilizar APGC-MS/MS en comparación con LC-MS/MS.

De hecho, las técnicas analíticas son complementarias, por lo que los positivos sospechosos determinados con una técnica pueden confirmarse con la otra para obtener una mayor confianza en los resultados.

Un ejemplo de cromatograma de fipronil y fipronil sulfona a 0,010 mg/kg (10 ppb) en huevo (dilución x 10, 1 ppb en frasco) en huevo conseguido utilizando una fuente APGC con el Xevo TQ-S micro mass spectrometer se muestra en los cromatogramas siguientes. Los datos son cortesía de Primoris Belgium, con acreditación ISO17025 para el análisis de fipronil en alimentos de origen animal.

Fipronil y fipronil sulfona a 0,010 mg/kg (10 ppb) en el huevo (dilución x 10, 1 ppb en el vial) en el huevo conseguido utilizando una fuente APGC con el espectrómetro de masas Xevo TQ-S micro. (c/o Primoris Belgium.)

Nuevo método de limpieza de muestras QuEChERS para el fipronil

El equipo científico de Waters también ha developed and validated a new method utilizando Oasis PRiME HLB para la extracción en fase sólida para asegurar la eliminación de fosfolípidos. Tras el paso de preparación de la muestra, mostramos los resultados del análisis UPLC-MS/MS con el Xevo TQ-XS para la cuantificación de alta resolución de fipronil y su metabolito fipronil sulfona, en huevos que cumple los criterios SANTE (SANTE/11945/2015). El método puede transferirse a otros espectrómetros de masas Waters Xevo.

Cromatogramas que muestran los perfiles de fosfolípidos del análisis de extractos QuEChERS (DisQuE) de huevo, antes y después de la limpieza con Oasis PRiME HLB, con al menos el 95% eliminado.

 

 

 

Recursos adicionales:

Tecnologías clave:

 

Publicado originalmente en agosto de 2017. Post actualizado con la literatura actual.