¿Qué tienen en común las grandes vacaciones y el bioanálisis de péptidos?

Ian Edwards

Tiempo de lectura: 5 minutos
Rendimiento del quant de ACQUITY UPLC I-Class PLUS y Xevo TQ-XS de pramlintida utilizando QuanRecovery MaxPeak HPS.

Para empezar, nadie quiere unas vacaciones desastrosas, y lo mismo ocurre con un ensayo de bioanálisis. ¿Qué hace que unas vacaciones sean estupendas? ¿Un agente de reservas que le entienda, un tránsito puntual, una habitación con vistas a un tiro de piedra de la playa, un personal amable y una buena cocina?

Saber que estás en buenas manos y que no dejas nada al azar en cada uno de los pasos del camino es una gran tranquilidad.

Elegir una agencia de viajes de confianza es un poco como invertir en una solución completa de bioanálisis de péptidos y proteínas.

A menudo, los bioanalistas evalúan la sensibilidad, la exactitud y la precisión de los datos de un espectrómetro de masas de triple cuadrupolo de alto rendimiento como marcador del rendimiento del ensayo, pero ¿cuántas veces se pasa por alto la influencia de una buena manipulación, preparación y separación de las muestras?

Como se mencionó en la parte 1 de esta serie de blogs "¿Adónde fue mi muestra?", ignorar la unión no específica puede ser catastrófico para la recuperación de muestras de péptidos y proteínas, siendo el peor escenario la pérdida total de la muestra. ¿Quién quiere perder su muestra incluso antes de inyectarla? En la segunda parte de la serie "Muestras perdidas en el contenedor: Non-specific Binding and the Impact of Blocking Agents", Moon destacó que los métodos tradicionales para mitigar la unión inespecífica (adición de proteína portadora, agentes de bloqueo y modificación de las condiciones de la solución...) no son, por lo general, un enfoque único y menos que ideal.

Por eso hemos desarrollado viales y placas QuanRecovery con superficies de alto rendimiento (HPS) MaxPeak, para que sean compatibles con la LC-MS posterior. Las HPS MaxPeak son tecnologías nuevas e innovadoras diseñadas para aumentar la recuperación de analitos, la sensibilidad y la reproducibilidad al minimizar las interacciones analito/superficie que pueden provocar pérdidas de muestras.

Figura 1. % de recuperación de pramlintida utilizando QuanRecovery con MaxPeak (HPS) o polipropileno estándar.

En la nota de aplicación de Caitlin Dunning "Development of a SPE LC-MS/MS Method Utilizing QuanRecovery Sample Plates with MaxPeak High Performance Surfaces for the Bioanalytical Quantification of Pramlintide from Serum"En este artículo mostramos el impacto del uso de una placa de polipropileno estándar en la recuperación de muestras para el análisis de un péptido hidrofóbico difícil: la pramlintida (Figura 1).

Eso es la manipulación de la muestra, pero ¿qué pasa con la preparación de la muestra? Ese péptido de interés no viene solo. A menudo necesitamos un método de preparación de muestras altamente selectivo que pueda aislar el objetivo de otras especies relacionadas en la matriz de la muestra. Pero, ¿por dónde empezamos?

Ahí es donde el Oasis µElution Peptide Separation Technology (PST) Method Development Plate resulta útil para optimizar el método de preparación de la muestra para obtener la máxima selectividad y recuperación. Normalmente, un sorbente de extracción en fase sólida (SPE) de modo mixto, de la familia de sorbentes Oasis SPE, es la mejor manera de limpiar y concentrar la muestra (Figura 2). Emplean tanto un mecanismo de intercambio iónico como de retención en fase inversa, que proporcionan modos ortogonales de aislamiento y limpieza del analito. ¡Brillante!

Figura 2. A. Cribado de múltiples sorbentes SPE (Oasis MAX y WCX) utilizando la placa de desarrollo de métodos µElution PST de Waters para evaluar rápidamente la recuperación y los efectos de la matriz para el pramlintida. B. Con un protocolo optimizado, la recuperación de pramlintida aumentó al 75%.

La placa de 96 pocillos Oasis permite eluir las muestras en un pequeño volumen, eliminando la necesidad de secado y reconstitución, pero como Kim nos recordó en la parte 3 de esta serie de blogs, "Preparación de la muestra antes de la cuantificación de péptidos y proteínas por LC-MS", las muestras pueden seguir perdiéndose durante el almacenamiento en el automuestreador. Ahora llega, QuanRecovery 96 well-plates with MaxPeak HPS!

Así que espero que esté convencido de que la manipulación y la preparación de las muestras son importantes. ¿Qué pasa con la separación en LC? ¿Su péptido es polar, hidrofóbico o de mayor tamaño? La combinación de las propiedades fisicoquímicas de su péptido con la columna adecuada de nuestra gama de tecnologías de columnas de bioanálisis de péptidos puede garantizar picos nítidos y separaciones óptimas (Figura 3).

Química de columnas para la separación de péptidos
Figura 3. Química de la columna para la separación de péptidos.

 

En la nota de aplicación de Caitlin, para obtener el mejor rendimiento cuantitativo utilizando la tecnología líder de ACQUITY UPLC I-Class PLUS y Xevo TQ-XS LC-MS, era importante utilizar nuestra solución completa para lograr la máxima sensibilidad, exactitud y precisión:

  • QuanRecovery, placas para muestras compatibles con LC-MS con superficies de alto rendimiento MaxPeak que mitigan la unión no específica
  • Las placas de desarrollo de métodos de la tecnología de separación de péptidos Oasis µElution facilitaron el cribado rápido de sorbentes SPE
  • La columna ACQUITY UPLC Peptide CSH proporcionó una selectividad mejorada, alta sensibilidad y anchos de pico estrechos
  • Tecnología LC-MS líder en su clase, ACQUITY UPLC I-Class PLUS y Xevo TQ-XS, para una máxima sensibilidad, exactitud y precisión
Rendimiento del quant de ACQUITY UPLC I-Class PLUS y Xevo TQ-XS de pramlintida utilizando QuanRecovery MaxPeak HPS.
Figura 4. Rendimiento cuantitativo de ACQUITY UPLC I-Class PLUS y Xevo TQ-XS para pramlintida de suero utilizando QuanRecovery MaxPeak HPS.

El tiempo y los recursos son preciosos. También lo es la muestra y la obtención de resultados de calidad. ¿Por qué perder la oportunidad de alcanzar los límites de detección debido a una manipulación y preparación de la muestra comprometida? No arriesgaría sus vacaciones por una pésima agencia de viajes, así que por qué arriesgarse a que un lote de muestras falle y no se cumplan las promesas.

¿Por qué no aprovechar la solución completa de Waters para el bioanálisis de péptidos y obtener el mejor rendimiento cuantitativo de LC-MS? Pasar del análisis de moléculas pequeñas al de moléculas grandes puede ser un reto. Hemos creado algunos recursos educativos impresionantes para aumentar su competencia en el bioanálisis de grandes moléculas con la tarjeta de referencia de bioanálisis de péptidos de Oasis, que puede descargarse gratuitamente, y el campamento de entrenamiento de bioanálisis de péptidos y proteínas, que puede verse gratuitamente.

Para más información, visite el Centro de Conocimiento de DMPK y Bioanálisis: waters.com/DMPK o póngase en contacto con su especialista local en química.

Recursos adicionales:

Soluciones de bioanálisis de péptidos de Waters: