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Points forts du webinaire | Simplifier le transfert des méthodes : De nouveaux outils pour reproduire vos méthodes établies sur un système ACQUITY Arc

Je suis le Dr Paula Hong, scientifique principale chez Waters Corporation. J'ai récemment organisé un webinaire sur les caractéristiques des instruments qui peuvent avoir un impact sur le transfert des méthodes établies en phase inverse sur les systèmes HPLC et UHPLC. Ces facteurs comprennent le volume de séjour, la dispersion extra-colonne et le préchauffage de la phase mobile ou le contrôle de la température. Nous avons également discuté des moyens d'évaluer votre instrument et de nouveaux outils pour faciliter le transfert des méthodes HPLC établies des générations précédentes d'équipements LC vers les systèmes UHPLC modernes.

Si vous l'avez manqué, Regardez le webinaire à la demande.

Nous avons eu beaucoup de bonnes questions. Voici quelques-uns des points saillants de notre séance de questions-réponses :

1. Quelles sont les suggestions pour l'utilisation de colonnes HPLC (300 x 7,8 mm) sur un système à faible dispersion comme le système UPLC H-Class ?

Pour les systèmes à faible dispersion en général, les colonnes HPLC peuvent nécessiter des tubes de plus grand diamètre de l'injecteur à la colonne et de la colonne au détecteur pour réduire la contre-pression et atténuer les effets des solvants forts. Plus précisément, le système ACQUITY UPLC de classe H peut accueillir des colonnes plus grandes grâce à un compartiment de colonne de 30 cm. Ce compartiment de colonne existe en plusieurs configurations, avec un préchauffage actif ou passif. Pour les colonnes HPLC et les débits plus élevés, la configuration avec préchauffage passif peut être plus appropriée car elle dispose d'une tubulure id plus grande. Cela permet de réduire les effets des solvants forts et de diminuer la contre-pression.

2. Recommandez-vous l'échange de solvant lorsque vous êtes dans un solvant fort ?

Oui, - comme nous l'avons vu précédemment, lorsque de forts effets de solvant sont observés, une solution consiste à faire correspondre le diluant de l'échantillon aux conditions initiales de la phase mobile. Cependant, vous pouvez également ajouter du volume entre l'injecteur et la colonne pour améliorer le mélange et réduire les effets de solvant forts. Cela peut inclure l'ajout d'un morceau de tube ou d'un filtre de colonne. En outre, la mise à l'échelle de votre méthode, et avec elle le volume d'injection, sur une configuration de colonne plus petite réduit également les effets de solvant forts.

3. Pourriez-vous commenter l'effet du chauffage pré-colonne sur la résolution et l'efficacité de ces différentes variantes de colonnes/systèmes ?

Le préchauffage du solvant est important pour assurer un contrôle adéquat de la température. Un mauvais contrôle de la température peut entraîner des effets de décalage thermique ou une perte d'efficacité d'une séparation. Cependant, le préchauffage peut être affecté par le débit en raison du temps de séjour dans le préchauffeur. De nombreux instruments disposent d'un préchauffage actif et/ou passif. Tant que le contrôle de la température de la phase mobile est adéquat, les deux peuvent fournir des performances chromatographiques similaires.

4. Vous avez mentionné la réduction du volume de la cellule d'écoulement. Cela réduit-il l'intensité du signal ?

Non, pas en soi. En fait, si le volume de la cellule d'écoulement était réduit, et que tout le reste restait constant, la dispersion extra-colonne serait plus faible. Il en résulterait une largeur de pic plus petite et une hauteur de pic plus grande pour augmenter la sensibilité. Cependant, il existe d'autres facteurs. Nous savons que l'absorbance UV est basée sur la loi de Beer, qui est dérivée du coefficient d'extinction molaire, de la longueur du trajet et de la concentration. Une cellule d'écoulement de plus faible volume peut également avoir une longueur de trajet différente. Les deux contribueront à l'absorbance. Par exemple, nous avons constaté que le passage d'une cellule d'écoulement analytique avec un trajet de 10 mm à une cellule d'écoulement microbore avec un trajet de 8 mm n'a pas modifié la sensibilité. Bien que la cellule à faible dispersion ait produit des pics plus nets et une meilleure résolution, la longueur du trajet plus courte a annulé toute augmentation de la sensibilité.

5. Dois-je mettre une cale isocratique dans ma méthode ?

Comme nous ne savons jamais si nous transférons dans un système avec un volume de séjour plus grand ou plus petit, il est logique d'ajouter un maintien isocratique dans notre méthode. Dans ce cas, nous pouvons simplement modifier la durée de cette retenue pour tenir compte des différences de volume de séjour entre les systèmes.

6. Dois-je mesurer le volume de séjour de mon système ?

Cela dépend. La plupart des fabricants indiquent les valeurs de volume de séjour dans les spécifications de l'instrument. Cela vous donne un bon point de départ. Même si vous ne disposez pas d'une valeur générale, vous pouvez tester votre méthode et y apporter des ajustements mineurs (ou majeurs) en fonction des temps de rétention. Si vous avez encore des difficultés, la mesure du volume de rétention peut vous aider à comprendre les performances de votre système.

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Vous pouvez également en savoir plus sur les Eaux Portefeuille LC et le nouveau Système ACQUITY Arc sur le site web de Waters.