最大限度地延长液氮柱的使用寿命。减少物理损坏的3个技巧

凯文-詹金斯

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让你的色谱技术保持最佳状态，意味着要踏踏实实地做好样品准备工作，保护好你的色谱柱!

在我之前的博客中，最大限度地提高液氮柱的寿命。3个减少化学腐蚀的提示中，我讨论了可以减少色谱柱寿命和性能的化学因素。通过正确的使用，许多与化学品有关的柱子寿命问题可以大大减少或消除。

事实上，正是色谱柱的物理退化迅速缩短了其使用寿命。色谱柱寿命的物理限制往往与被注射的样品、样品制备的质量以及LC系统的整体护理和维护成正比。在许多情况下，一旦颗粒或污染物积聚在柱子的顶部--损害是不可逆的。

以下三个提示将有助于减少物理污染物对色谱柱寿命的影响。

1.遵循常规的仪器维护计划

确保您的色谱系统处于正常工作状态是最大限度延长色谱柱寿命的第一步。常规维护应包括更换转子密封圈、更换针头、清洁溶剂通道和进行压力测试。(Need a service plan?)

常规的压力监测可以作为颗粒物在流路或柱子入口处积累的早期信号。在极端情况下，使用腐蚀性流动相的方法条件会使泵的密封性变差，脱落的微粒会迅速堵塞色谱柱入口。

不太明显的是钝针的影响。钝的针头，无论是由于长期使用还是由于不正确的设置而影响到小瓶，都不能干净地刺穿小瓶的隔膜。根据针头的设计，这可能会促进抽芯，使小块的隔膜进入流动相流中。

这种严重的颗粒积累有时可以通过反冲洗系统和柱子的入口来清除，以驱散这些物质。我建议遵循色谱柱制造商的指导方针，因为有些色谱柱由于其熔块设计，不能承受流动相流的逆转。

2.遵循良好的实验室实践和样品制备

最常见的色谱柱杀手是细菌污染。使用适当的流动相制备，并在使用前用0.45微米或0.2微米的膜过滤器过滤，可大大改善色谱柱的寿命，这在使用中性pH值的磷酸盐缓冲液时尤其重要。

在适当的条件下，细菌污染可以在第一次使用的几个小时内不可逆转地弄脏色谱柱。一旦细菌占据了系统，就很难清除，预防永远是避免此类问题的最佳方法。

作为一般做法，我们建议对水基入口管道进行常规冲洗，或用高比例的有机溶剂切换水流，以有效控制细菌生长，以免造成问题。

样品成分的累积也会导致保留的急剧变化并影响色谱柱的性能。遵循正确的样品制备程序，如 solid-phase extraction可以大大减少沉积在LC柱上的化学和沉淀颗粒物污染。

磷脂和蛋白质的去除是如何延长色谱柱寿命的很好例子。在许多情况下，沉淀的污染物不可逆转地与吸附剂床结合，使其无法去除。通常，当你试图清洗柱子时，任何沉淀在柱子入口处的蛋白质已经老化、变性，甚至可能交联，使它们无法溶解。有效的样品制备，在进样前去除有害的样品成分，可以大大减少这种类型的柱子恶化。

3.使用防护栏

延长色谱柱寿命的一个更有力的方法是使用保护柱而不是简单的柱前过滤器。保护柱是一个小型的预立柱（如 VanGuard 保护柱），作为牺牲性的吸收剂床，在出现问题时被替换。如果你的色谱柱问题的来源是流动相中的灰尘，或吸附了污染物，防护柱将简单地处理它们。

为了获得最佳性能，您应该使用包含与分析柱完全相同填料的保护柱。如果你选择的保护柱不包含与你的分析柱相同的填料，你会得到明显的峰值失真。此外，你无法预测这种保护柱对你的分析柱的保护程度。

此外，不要认为使用较大的颗粒尺寸会持续更长时间而使用。这是一个常见的误解。较大的颗粒预柱会由于预柱中的带状增宽而导致分离效果恶化。因此，最好是将保护柱的填料与分析柱的填料相匹配。这样既能对色谱柱进行最好的保护，又能使色谱峰的失真程度最小。

在这些关于最大限度地提高液相色谱柱寿命的提示中，我假设色谱柱是用于单一的检测或单一的程序中。在这些情况下，柱子的污染是相当可预测的。

如果你的实验室使用许多不同的HPLC程序，我总是建议你为每个程序专门配备一根柱子，包括保护柱。这就消除了柱子从一个测定到另一个测定的交叉污染，并使柱子的寿命可预测和可控制。

如果你的实验室没有任何标准检测，这就是一个没有意义的问题。即使在这种情况下，我也会把保护柱和分析柱放在一起，直到性能恶化需要更换保护柱。

 

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