应对灵敏度和样品损失的挑战

作为一个来自小分子领域的多肽和蛋白质定量的相对新人，我已经了解到我需要以不同的方式和更有创造性的思维来应对这些分子的挑战。 作为以检测灵敏度为目标的科学家，我们有时不得不采取额外的措施，以确保我们不仅能达到这一目标，而且还能确保我们开发的方法的可重复性和整体稳健性。 当我思考这一挑战时，我发现从样品的角度来思考工作流程是很有帮助的。

在 第一部分 在这个博客系列中，Caitlin Dunning强调了在样品处理过程中是多么容易丢失样品，并讨论了什么都不做的后果!

Moon Jung，在《中国的世界》一书中，讨论了非特异性结合，是造成样品损失的主要原因，以及使用传统方法，如阻断剂和载体蛋白，以减少样品损失的利弊。 第二部分讨论了非特异性结合--样品损失的主要原因，以及使用传统方法如阻断剂和载体蛋白来减少样品损失的利与弊。

在我们博客系列的第三部分中，我将解释为什么您选择的样品容器对于最大限度地减少非特异性结合和确保您不丢失您的珍贵样品是如此重要。这有点像为您的假期或度假选择合适的酒店房间!

是否有 "肽酒店 "这样的东西？ 如果有，我如何选择合适的酒店？

想象一下，你已经完成了艰苦的工作，准备好了你的样品。 它很好，很干净，很集中：没有麻烦的基质干扰和不友好的色谱柱/质谱仪污染物。现在，它将在LC-MS自动进样器中放置几个小时，甚至2-3天，如果周末有大的运行计划。

我应该担心样品损失吗？我是否会因为样品板或样品瓶中的非特异性结合而损失我的多肽？

仔细选择一个旨在减少非特异性结合的样品容器可以有所帮助。

我在哪里可以找到既具有低结合力优势，又在格式和用途上最适合LC-MS系统的自动进样器的样品容器？ 这样的容器今天还存在吗？ 我的意思是，随着可用的总样品量每天都在减少，一个设计成低残留样品量的小瓶或平板是必不可少的。

这使我想到了我的最后一个问题。 样品浓度对非特异性结合有影响吗？ 正如Caitlin Dunning在第一部分中提到的 "我的样品去哪儿了？" 非特异性结合不仅仅影响我们在低浓度下达到灵敏度目标的能力。 它还会导致变异性方面的问题。

当我们将一个标准的聚丙烯容器与一个为减少NSB而设计的高性能表面的容器进行比较时，我们看到对1纳克/毫升的胰高血糖素的敏感性有很大差别。 然而，当用100纳克/毫升的牛胰岛素做样品比较时，我们也看到了差异！这就是为什么我们在做样品比较的时候，会发现有很多人不愿意去做。 损失的速度可能会因样品在容器中放置的时间长短而不同，导致即使在较高的浓度下也会出现变化。

接受挑战

对多肽和蛋白质的定量需要仔细考虑，特别是与小分子分析相比。

• 选择旨在减少非特异性结合并为LC-MS自动进样器设计的样品容器可以确保我们所有的辛勤工作不会在数据收集前的最后几个小时丢失。
• 即使在较高的浓度下，样品容器也会对准确性和可重复性产生影响。

通过我们的PPQ训练营和其他资源，迎战这一挑战!

肽和蛋白质生物分析训练营

Oasis Peptide Bioanalysis Reference Cards

Oasis sample extraction product information

敬请关注伊恩-爱德华兹的系列博客 "伟大的假期和多肽生物分析有什么共同之处？

请查看本系列的其他博客。

我的样品去哪儿了？作者：Caitlin Dunning

丢失在容器中的样品。Moon Chul Jung的《非特异性结合和阻断剂的影响》。