Bei den Gentherapien auf Basis viraler Vektoren handelt es sich um große Arzneimittelformulierungen, die aus Protein- und Nukleinsäurekomponenten mit über 200.000 Atomen bestehen. Die Flüssigkeitschromatographie (LC) von Waters in Kombination mit optischer Detektion (UV, MALS) und Massenspektrometrie (MS) ermöglicht die genaue Charakterisierung und Quantifizierung dieser heterogenen Strukturen und ihrer Eigenschaften, sowohl auf Komponenten- als auch auf intakter Ebene. Zu den Routinemessungen gehören Virustiter, Aggregat-/Verunreinigungsanalysen, virale Proteinverhältnisse, Peptid-Mapping und Modifikationsanalysen, Verkapselungseffizienz und Genomintegrität.
Webinar: Kleinpartikel-SEC-Säulen mit niedriger Adsorption zur schnellen und effizienten Charakterisierung von AAV mittels SEC-MALS
Mit MaxPeak Premier Säulen und Systemen wird die Unvorhersehbarkeit von Analytverlusten aufgrund von Metallwechselwirkungen beseitigt, die bei biologischen Molekülen besonders stark sein können.
Ermöglichen Sie biopharmazeutische LC-MS-Analysen in jedem GxP-Labor mit dem BioAccord LC-MS-System von Waters, das hohe MS-Auflösung und die waters_connect Software für Compliance-konforme Datenanalyse und Reporterstellung beinhaltet.
Beschleunigen Sie die Charakterisierung viraler Vektoren mit dem Xevo G3 QTof Hochleistungs-HRMS-Benchtop-System, das präzise qualitative und quantitative Ergebnisse liefert.
Messen Sie die virale Vektoraggregation, den Genom- und Capsid-Titer sowie das Leer/Voll-Verhältnis mit den DAWN und ultraDAWN MALS-Detektoren von Wyatt mit UV- und RI-Erkennung nach LC- oder FFF-Trennung ganz exakt.
a) Überlagertes Massenspektrum von AAV8, vergrößert auf den Massenbereich von 2,5–6 MDa mit 100 % leerem und vollem Capsid, behandelt mit 30-minütigen Inkubationen bei 4, 22, 35 und 50 °C. b) Ladungsspektrum von AAV8, vergrößert auf den Massenbereich von 2,5–6 MDa, mit 100 % leerem und vollem Capsid, behandelt mit 30-minütigen Inkubationen bei 4, 22, 35 und 50 °C.
Volle (blau) und leere (rot) Titer, bestimmt durch RT-MALS während der Elution (34 – 48 Minuten) und des Strippings (> 48 Minuten) im linearen Gradienten. Die Ionenstärke des Puffers wird durch die gestrichelte schwarze Linie dargestellt.
Vergrößerte Ansicht eines AAV2-Chromatogramms, das mit Edelstahlhardware (Partikel aus 4,6 x 150 mm und 5-µm, rote Kurve) gegenüber hHPS-Hardware (XBridge Premier GTx BEH SEC Säule mit 450 Å, 2,5 µm 4,6 x 150 mm, schwarze Kurve) erhalten wurde. Die Trennungen wurden mit einer mobilen Phase durchgeführt, die einen Puffer mit Standard-Ionenstärke (10 mM Phosphat pH 7,4 + 200 mM KCl) enthielt.
Die relative Quantifizierung der VP-Proteine wurde mittels optischer Detektion gemessen, einschließlich (A) UV und (B) Fluoreszenz (FLR). Die Peakanmerkung zeigt die Zuordnung und die berechnete relative Abundanz der erkannten Komponenten. Bei FLR-Detektion ist das S/R von VP3 fast fünfmal höher als das S/R bei der UV-Detektion mit einer 10-fach höheren Massenladung, was auf eine etwa 50-fache Verbesserung der Empfindlichkeit schließen lässt.
