Solution d’analyse des acides aminés par UPLC

Pour en savoir plus sur la composition de la solution d’analyse des acides aminés UPLC (AAA) de Waters: solution d’application de bout en bout validée pour l'analyse des acides aminés. L'analyse UPLC permet d'obtenir une meilleure résolution et sensibilité que les méthodes existantes. Son séparateur amélioré garantit que l'analyse donne des résultats qualitatifs et quantitatifs exacts et exacts, et que la méthode est exceptionnellement robuste. Cette méthode, basée sur une méthode bien connue et largement utilisée de dérivation des colonnes AccQ • Tag, permet d'obtenir ces avantages en un temps d'analyse plus court que celui obtenu précédemment. Les dérivés sont séparés à l'aide du Système ACQUITY Ultra Performance LC (UPLC) de Waters pour une résolution et une sensibilité optimales. Le pilotage du système, l’acquisition des données, le traitement des données et la souplesse des rapports sont assurés dans le logiciel Empower. La solution intégrée d’application totale garantit la réussite des analyses.

L'analyse des acides aminés est exigée dans plusieurs domaines de recherche différents. Elle est également un outil essentiel dans diverses activités d'analyse de produits. Ces applications imposent des exigences différentes à la méthode analytique car les acides aminés jouent un rôle différent. 

Les acides aminés sont les composants de base des protéines. Pour cette raison, des analyses qualitatives et quantitatives de la composition en acides aminés d’échantillons hydrolysés de protéines ou de peptides purs sont utilisées pour identifier le matériel et mesurer directement sa concentration. 

Les acides aminés sont également des intermédiaires de multiples façons métaboliques et n'impliquent pas directement de protéines. Les acides aminés sont donc mesurés en tant qu'éléments des études physiologiques et nutritionnelles. Ceci s’est avéré particulièrement important dans le suivi de la croissance des cellules en cultures, comme celui utilisé dans la fabrication de produits biopharmaceutiques. Des considérations similaires conduisent à l'analyse des aliments et des denrées alimentaires pour garantir que les besoins nutritionnels sont satisfaits. Ces applications applicatives diverses bénéficieront toutes d’une amélioration des méthodes relatives aux acides aminés.

Une solution système complète d’analyse des acides aminés a été récemment développée. Cette solution permet d’obtenir une résolution et une sensibilité accrues, toutes obtenues en un temps d’analyse plus court que par les méthodes précédentes. Son amélioration de la séparation, assure que l'analyse donne des résultats qualitatifs et quantitatifs exacts et exacts, et que la méthode est exceptionnellement robuste. 

Cette solution d'application est basée sur la chimie bien connue et largement utilisée de dérivation de la précolonne AccQ • Tag de Waters. Les dérivés sont séparés à l'aide du Système ACQUITY UltraPerformance LC (UPLC) de Waters pour une résolution et une sensibilité optimales. Le pilotage du système, l’acquisition des données, le traitement des données et la souplesse des rapports sont assurés dans le logiciel Empower. La solution intégrée d’application totale garantit la réussite des analyses.

Résultats et discussion

En fin de compte, une nouvelle méthode utilisant les acides aminés doit fournir la bonne réponse. Une robustesse accrue, de préférence avec des tâches et des temps d'analyse réduits, sont également les caractéristiques souhaitées d'un système de laboratoire performant. Ces besoins sont satisfaits en combinant les produits chimiques d’analyse des acides aminés AccQ • Tag Ultra avec la technologie de séparation éprouvée du Système ACQUITY UPLC; La solution applicative d'analyse des acides aminés UPLC de Waters est utilisée conjointement. 

L’analyse d’un étalon d’hydrolysat est illustrée à la Figure 1. Les ami-noacides sont dérivés à l’aide du AccQ • Fluor Ultra Reagent (référence: 186003836) (6-aminoquinolyl-N-hydroxysuccinimidyl carbamate). Les acides aminés primaires et secondaires réagissent par simple dérivation par lots. Les échantillons sont stables pendant plusieurs jours. Aucune préparation spéciale d’échantillon n’est nécessaire, et la réaction se déroulant dans une solution largement aqueuse, elle est très tolérante vis-à-vis des sels tampons et des autres composants de l’échantillon. L’excès de réactif s’hydrolyse naturellement et le sous-produit est éliminé par chromatographie des dérivés. Aucune manipulation ou extraction spéciale n'est requise.

Les dérivés sont séparés sur une colonne AccQ. Les éluants emballés sont soumis à un test de contrôle qualité (CQ) portant sur les séparations d'acides aminés. Ils sont fournis sous forme de concentrés nécessitant uniquement une dilution avec de l'eau avant utilisation. L'instrument est le Système ACQUITY UPLC avec détection UV à 260 nm.null

La résolution des acides aminés est de 1,6 ou supérieure pour garantir une quantification exacte. La reproductibilité du temps de rétention est de l’ordre des centièmes de minutes, beaucoup plus petit qu’une largeur de pic, pour garantir l’identification sans équivoque des acides aminés. La détection est linéaire, sur plus de trois ordres de grandeur, pour permettre une analyse quantitative des échantillons ayant des rapports disparates d'acides aminés avec une marge suffisante pour des échantillons de concentration différente. La sensibilité de la méthode présente un rapport signal / bruit suffisant à quantifier au niveau de 50 femtomoles sur colonne.

La méthode peut être utilisée avec succès dans de nombreuses applications. La méthode standard représentée sur la figure 1 peut également résoudre les dérivés de la cystéine couramment utilisés dans l'analyse de la structure de la protéine. Les produits de l’oxydation de l’acide performique qui font partie de l’évaluation de la qualité nutritionnelle des denrées et aliments pour animaux sont également bien séparés. 

Pour le suivi de la composition des supports pendant la croissance des cellules en culture, des acides aminés supplémentaires doivent être résolus. Ceci nécessite une dilution différente du Concentré Éluant A AccQ • Tag Ultra et une température de séparation plus élevée. Le chromatogramme utilisé pour le suivi des supports de croissance des cellules est représenté sur la figure 2.

Ces résultats décrivent la nouvelle solution d’analyse des acides aminés UPLC, ou APS, de Waters, qui comprend des chimies spécifiques aux applications, les technologies LC, MS et technologie UltraPerformance innovantes, une documentation, une documentation et une assistance pour fournir les réponses dont vous avez besoin concernant les acides aminés. acides gras, à chaque fois. L’utilisation des produits chimiques de dérivation et de séparation pré-testés et la résolution élevée fournie par le Système ACQUITY UPLC. 

Cette approche analytique intégrée permet d'obtenir des résultats qualitatifs et quantitatifs exacts et précis dans un large éventail d'applications, notamment les hydrolysats de protéines et de peptides, le suivi des supports de culture cellulaire et la mesure de la valeur nutritionnelle des aliments et des denrées alimentaires.