Modes de séparation
Trouvez la chimie adaptée à vos besoins en termes de chromatographie
Chromatographie en phase inverse
La chromatographie en phase inverse est de loin la technique de séparation par chromatographie liquide (LC) la plus couramment utilisée en laboratoire. C’est pourquoi Waters propose une vaste sélection de produits de colonne en phase inverse.
Dans sa forme la plus simple, la chromatographie en phase inverse comprend une phase mobile polaire, généralement un mélange d’eau ou de tampon avec des solvants polaires tels que le méthanol, l’acétonitrile ou le tétrahydrofurane, et une phase stationnaire non polaire telle qu’un hydrocarbure à chaîne longue greffé à un support hybride ou en silice. Ces dernières années, d’importants efforts de recherche et de développement ont été déployés dans le domaine des milieux de séparation en vue d’améliorer l’efficacité des colonnes et la stabilité du pH, et de fournir des sélectivités alternatives.
Les chimies de colonne innovantes de Waters peuvent être classées en trois catégories :
- Hybride – Conçues pour une stabilité maximale du pH, il s’agit des options les plus flexibles pour le développement de méthodes. Disponible dans les gammes XBridge, ACQUITY BEH et XTerra. Plage de pH : 1–12.
- Silice – Traditionnellement, il s’agit du support en phase inverse le plus couramment utilisé. Les produits SunFire et Symmetry sont synthétisés à partir de matières premières dans l’usine de Waters à Taunton et sont conçus pour une capacité de charge maximale. Plage de pH : 2–7.
- Spécifique à des applications données – Présentes notamment dans les colonnes Atlantis, ces chimies sont conçues pour cibler une application spécifique et offrent une meilleure rétention des molécules polaires.
Chromatographie en phase normale
Avant le développement des phases greffées en phase inverse, la chromatographie en phase normale était la technique de séparation la plus répandue. Elle repose sur l’interaction d’analytes avec des groupes fonctionnels polaires à la surface de la phase stationnaire, exacerbée lorsque la phase mobile se compose de solvant non polaire.
La chromatographie en phase normale est une technique très efficace, car elle permet d’utiliser une grande variété de solvants pour affiner la sélectivité d’une séparation. Toutefois, nombre de chromatographistes s’en sont détournés en raison de sa complexité. Dans certaines circonstances, elle peut demander un temps d’équilibrage long et causer des problèmes de reproductibilité, ce qui est en grande partie dû à la sensibilité de la technique face à de faibles concentrations de contaminants polaires dans la phase mobile. Si ces problèmes sont maîtrisés, la technique donne généralement de meilleurs chromatogrammes que les méthodes en phase inverse en raison de la faible viscosité des solvants couramment utilisés.
Les colonnes en phase normale sont disponibles dans les gammes de produits SunFire, Nova-Pak et Spherisorb.
HILIC (Chromatographie à interaction hydrophile)
La chromatographie à interaction hydrophile ne date pas d’hier, mais le terme HILIC n’est entré dans l’usage courant que récemment. Elle est adaptée aux composés très polaires tels que les métabolites polaires, les glucides ou les peptides.
La chromatographie en mode HILIC peut être considérée comme une extension de la chromatographie en phase normale aux phases mobiles aqueuses. Les phases mobiles utilisées sont des mélanges d’eau ou de tampon (< 40 %) avec des solvants organiques. Les phases stationnaires sont des adsorbants polaires très hydrophiles tels que la silice, les phases à greffage polaires, à polymères polaires et à échange d’ions. Le dénominateur commun de toutes ces phases stationnaires est qu’elles peuvent facilement adsorber l’eau, d’où leur qualification d’« hydrophiles ».
Les méthodes en gradient employées en mode HILIC sont à l’exact opposé de celles utilisées en phase inverse. On commencera par une composition à forte teneur en solvant organique, typiquement 95 %, pour évoluer progressivement vers une composition plus aqueuse. C’est pourquoi on commence à la qualifier de « phase inverse inverse ».
Cette technique gagne en popularité et suscite de plus en plus l’intérêt des chercheurs qui développent de nouvelles chimies de colonne.
Les colonnes HILIC de Waters sont actuellement disponibles dans les gammes de produits Atlantis, CORTECS, XBridge et ACQUITY.
Chromatographie en phase inverse
La chromatographie en phase inverse est de loin la technique de séparation par chromatographie liquide (LC) la plus couramment utilisée en laboratoire. C’est pourquoi Waters propose une vaste sélection de produits de colonne en phase inverse.
La chromatographie en phase inverse implique une phase mobile polaire, généralement un mélange d’eau ou de tampon aqueux et de solvants non polaires tels que le méthanol, l’acétonitrile ou le tétrahydrofurane. La phase stationnaire n’est pas polaire et est créée dans certains cas par le greffage d’une fonction hydrocarbure à chaîne longue à un support de particules de silice, superficiellement poreuses, polymériques ou hybrides. Ces dernières années, d’importants efforts de recherche et de développement ont été déployés dans le domaine des milieux de séparation en phase inverse en vue d’améliorer l’efficacité des colonnes et la stabilité du pH, et de fournir des sélectivités alternatives.
Les chimies de colonne innovantes de Waters peuvent être classées en quatre catégories :
- Hybride – Conçues pour une stabilité maximale du pH, il s’agit des options les plus flexibles pour le développement de méthodes. Plage de pH : 1-12.
- Silice – Traditionnellement, il s’agit du support en phase inverse le plus couramment utilisé. Ces produits sont synthétisés à partir de matières premières dans l’usine de Waters à Taunton et sont conçus pour une capacité de charge maximale. Plage de pH : 2-7.
- Particules superficiellement poreuses – Conçues pour maximiser l’efficacité de la colonne en réduisant les sources potentielles de dispersion de la colonne. Disponibles dans des granulométries de 1,6 et 2,7 µm, compatibles avec tous les systèmes LC.
- Spécifique à des applications données – Conçues pour cibler une application spécifique pour une meilleure rétention des molécules polaires.
Marques de colonnes associées
Particules hybrides
Silice
Particules superficiellement poreuses
Spécifique à des applications données
Chromatographie en phase normale
La chromatographie en phase normale peut être considérée comme l’opposé de la chromatographie en phase inverse. Elle repose sur l’interaction d’analytes à groupements fonctionnels polaires avec la surface polaire de la phase stationnaire. La phase mobile à élution forte pour la chromatographie en phase normale est polaire. La rétention maximale est donc obtenue avec des solvants non polaires.
La chromatographie en phase normale est une technique très efficace, car elle permet d’utiliser une grande variété de solvants pour affiner la sélectivité d’une séparation. Toutefois, nombre de chromatographistes s’en sont détournés en raison de sa complexité. Dans certaines circonstances, elle peut demander un temps d’équilibrage long et causer des problèmes de reproductibilité, ce qui est en grande partie dû à la sensibilité de la technique face à de faibles concentrations de contaminants polaires dans la phase mobile. Si ces problèmes sont maîtrisés, la technique donne généralement de meilleurs chromatogrammes que les méthodes en phase inverse en raison de la faible viscosité des solvants couramment utilisés.
Marques de colonnes associées
HILIC (Chromatographie à interaction hydrophile)
La chromatographie à interaction hydrophile ne date pas d’hier, mais le terme HILIC n’est entré dans l’usage courant que récemment. La chromatographie en mode HILIC est une variante de la chromatographie en phase normale, dans laquelle les analytes les mieux retenus sont des composés très polaires tels que les métabolites polaires, les glucides ou les peptides.
Les phases mobiles utilisées sont des mélanges d’eau ou de tampon (< 40 %) avec des solvants organiques. Les phases stationnaires sont très hydrophiles et se composent de silice nue, de phases à greffage polaires, polymériques polaires, zwitterioniques et à échange d’ions. Le dénominateur commun de toutes ces phases stationnaires est qu’elles peuvent facilement adsorber une couche d’eau à la surface des particules pour favoriser l’échange d’analytes. La rétention est entraînée par la répartition des analytes entre l’eau immobilisée plus tard en surface et la phase mobile. Les méthodes en gradient employées en mode HILIC sont à l’exact opposé de celles utilisées en phase inverse. On commencera par une composition à forte teneur en solvant organique, typiquement 95 %, pour évoluer progressivement vers une composition plus aqueuse. C’est pourquoi on commence à la qualifier de « phase inverse inverse ».
Cette technique gagne en popularité et suscite de plus en plus l’intérêt des chercheurs qui développent de nouvelles chimies de colonne.
Marques de colonnes associées
Chromatographie par échange d’ions
Pour réaliser des séparations par chromatographie d’échange d’ions (IEX), on utilise généralement un gradient de sels, de pH ou une combinaison des deux pour obtenir une élution des protéines par ordre croissant de charges. La séparation est réalisée à l’aide d’un échangeur anionique ou cationique en fonction du type de protéine et du pH de la phase mobile. Par ailleurs, la durée du gradient, la composition et le pH du tampon, le débit et la température de la colonne sont autant de facteurs importants pour obtenir les séparations voulues.
