En partenariat avec Trajan, Waters a entièrement intégré et automatisé un processus analytique jusqu’alors très manuel grâce à son système HDX/MS, qui utilise des séparations UPLC haute pression à nano- ou micro-débit, la robotique pour la manipulation des échantillons et la spectrométrie de masse à mobilité ionique haute résolution pour une analyse approfondie des structures protéiques, notamment :
Waters propose une solution complète pour les études HDX/MS qui combine notre système ACQUITY UPLC M-Class doté de la technologie HDX, un spectromètre de masse Waters tel que le SELECT SERIES Cyclic IMS, la robotique de Trajan et le logiciel DynamX, spécialisé dans les applications HDX.
La spectrométrie de masse à échange hydrogène-deutérium (HDX) est utilisée dans de nombreuses applications, notamment pour comprendre la manière dont les petites molécules thérapeutiques se lient aux cibles protéiques et pour établir une cartographie des épitopes. Cette technologie consiste à remplacer l’hydrogène des amides du squelette d’une biomolécule par du deutérium contenu dans une solution, puis à mesurer ces changements par spectrométrie de masse.
La vitesse à laquelle l’hydrogène amide du squelette d’une biomolécule est remplacé par le deutérium en solution varie en fonction de la conformation de la biomolécule. La spectrométrie de masse permet de mesurer ces changements et d’en déduire le degré d’activité au niveau de plusieurs sites. Ces sites peuvent ensuite être identifiés et mis en correspondance avec la séquence primaire afin de faciliter la visualisation et obtenir des informations sur la structure de la protéine. La dynamique et le repliement relatif peuvent être déterminés à partir des taux d’absorption observés à différents endroits.
Grâce à l’UPLC/MSE, votre laboratoire peut générer un jeu de données complet, en mesurant tous les peptides sans être biaisé par l’intensité du signal. Cette caractéristique est particulièrement importante pour les études HDX, où des peptides de faible intensité peuvent apporter des informations essentielles.
La technique HDX/MS ouvre de nouvelles perspectives sur la dynamique des biomolécules en fournissant des informations sur l’absorption relative du deutérium dans différentes conformations d’une protéine ou à différents endroits d’une protéine. De récentes avancées ont rendu cette technique plus accessible pour étudier la dynamique de la structure d’ordre supérieur des produits biothérapeutiques. Le secteur et la réglementation se tournent de plus en plus vers la conformation et les relations entre les biomolécules, faisant de l’HDX un outil essentiel rapidement adopté dans de nouveaux domaines de l’analyse biothérapeutique.
Caractérisation des médicaments biosimilaires
Optez pour le système ACQUITY UPLC M-Class avec technologie HDX et identifiez avec certitude les changements de conformation des protéines grâce à des séparations UPLC et à la spectrométrie de masse haute résolution (HRMS).
Avec le spectromètre de masse Xevo G3 Q-Tof, maximisez les informations sur les échantillons pour vos analytes et ayez une confiance totale dans vos résultats, depuis la caractérisation détaillée jusqu’à la quantification exacte.
Élaboré grâce à une collaboration ciblée, le système SELECT SERIES Cyclic IMS associe la technologie innovante de séparation par mobilité ionique cyclique aux performances de pointe de la spectrométrie de masse à temps de vol, offrant ainsi aux chercheurs le moyen d’élargir le champ de leurs recherches scientifiques.
Avec le spectromètre de masse SYNAPT XS, bénéficiez d’une flexibilité ultime et d’une plus grande liberté de choix analytiques pour accompagner la créativité scientifique et la réussite technique dans toutes les applications.
Rétention du deutérium pour quatre peptides provenant de peptides tryptiques d’énolase de levure.
Structure cristalline de CaM avec code couleur pour représenter l’absorption de deutérium. Comparaison de (A) apo-CaM et (B) holo-CaM avec un marquage au deutérium à 10 secondes. Une différence significative dans l’absorption de deutérium a été observée dans la région mise en évidence, où la conformation a été modifiée en raison de la liaison au calcium.
On a constaté une différence d’absorption de deutérium pour un même peptide dans apo-CaM et holo-CaM. Après 10 minutes de marquage, ce peptide (FKEASLF, 12-19) a montré une absorption de deutérium plus élevée dans l’apo-CaM (à gauche) que dans l’holo-CaM (à droite).
Comparaison de la perte de deutérium de la bradykinine et de l’angiotensine II entièrement deutérées à A) différentes températures de digestion, à B) différents temps de maintien après quench et à C) différents débits de digestion/dessalage. La perte de deutérium causée par la source du spectromètre de masse est mise en évidence par une bordure noire en 5B. Des profils isotopiques similaires ont été trouvés dans les deux peptides à pression normale et à haute pression (5D). La haute pression a entraîné une perte de deutérium légèrement plus élevée (<5 %).
