Kits e colunas de bioconjugados

Kits e colunas de bioconjugados

Conte com a Waters como sua solução de fonte única para colunas e kits de bioconjugados e conjugados droga-anticorpo (Antibody Drug Conjugates, ADCs) em aplicações de descoberta, desenvolvimento e fabricação.

Conte com a Waters como sua solução de fonte única para colunas e kits de bioconjugados e conjugados droga-anticorpo (Antibody Drug Conjugates, ADCs) em aplicações de descoberta, desenvolvimento e fabricação.

Colunas BioResolve para análise de proteína intacta, caracterização, monitoramento e CQ de variantes de carga de mAbs e ADCs.
Colunas BioResolve para análise de proteína intacta, caracterização, monitoramento e CQ de variantes de carga de mAbs e ADCs.

Visão geral

À medida que organizações biofarmacêuticas exploram a utilização de bioconjugados e ADCs (conjugados droga-anticorpo) como uma classe de tratamento contra o câncer, desafios significativos são encontrados na análise de suas estruturas complexas e heterogêneas. A Waters fornece soluções para esses desafios analíticos únicos facilitando a avaliação de muitos atributos críticos de qualidade (CQAs, Critical Quality Attributes) importantes, incluindo a determinação de relações droga-anticorpo (DAR, Drug-to-Antibody Ratios), mesmo em níveis baixos, utilizando colunas de cromatografia de fase reversa (RP, Reversed Phase) ou de interação hidrofóbica (HIC, Hydrophobic Interaction Chromatography), agregação e fragmentação utilizando colunas de exclusão por tamanho (SEC, Size Exclusion), e sítios de conjugação utilizando os Kits de digestão tríptica de proteínas PeptideWorks para mapeamento de peptídeos, entre outros.

Nossas opções abrangentes de coluna incluem:

  • Colunas de fase reversa
  • Colunas de HIC
  • Colunas de SEC
  • Colunas de troca iônica
  • Colunas de glicoproteínas

Independentemente de estar analisando ADCs (conjugados droga-anticorpo) conjugados com lisina buscando minimizar as interações secundárias entre os ADCs e o hardware de coluna, ou para superar outros desafios de qualidade dos dados, a Waters tem a tecnologia de coluna certa para realizar suas biosseparações de forma consistente e confiável.



Redução de interações hidrofóbicas não desejadas com as Superfícies de alto desempenho (HPS) MaxPeak Premier

Redução de interações hidrofóbicas não desejadas com as Superfícies de alto desempenho (HPS) MaxPeak Premier

As Colunas Waters MaxPeak Premier permitem que os cientistas tenham mais controle sobre suas separações cromatográficas com a inclusão da tecnologia das Superfícies de alto desempenho (HPS, High Performance Surfaces) MaxPeak. Por exemplo, quando a separação de proteínas ocorre por tamanho em solução, podem ocorrer interações secundárias, causando perda de amostra, picos mais amplos e quantificação inexata de agregados. A tecnologia de Superfícies de alto desempenho MaxPeak foi desenvolvida utilizando partículas de SEC híbridas com pontes de etileno (BEH, Ethylene Bridged Hybrid) com ligação de óxido de polietileno (PEO, Polyethylene Oxide) com terminação hidróxi de alta cobertura e são excepcionalmente bioinertes para oferecer mais exatidão dos dados. Eles minimizam as interações hidrofóbicas que causam interações secundárias, proporcionando um formato de pico excelente e quantificação consistente.

Disponíveis em 1,7 µm (Colunas ACQUITY Premier), 2,5 µm (Colunas XBridge Premier e XSelect Premier) e Colunas BioResolve Premier selecionadas, formatos e tamanhos de partículas ≤ 3 µm ganham o desempenho cromatográfico, a flexibilidade e a garantia esperados das tecnologias de partícula confiáveis da Waters.

Soluções


Colunas de fase reversa para determinação de DAR e distribuição de medicamentos

Colunas de fase reversa para determinação de DAR e distribuição de medicamentos

As Colunas de fase reversa para bioconjugados e conjugados droga-anticorpo com HPS MaxPeak, como as Colunas ACQUITY e XBridge Premier BEH C4 para proteínas, foram projetadas exclusivamente para minimizar as interações secundárias entre ADCs (conjugados droga-anticorpo) e o hardware da coluna, além de serem ideais para a análise de ADCs conjugados com lisina. Ao contrário dos ADCs (conjugados droga-anticorpo) conjugados com cisteína, as ligações de dissulfeto dentro da cadeia que mantêm as ligações entre as cadeias pesadas e leves do mAb para os ADCs conjugados com lisina são intactas. Portanto, a cromatografia de fase reversa é ideal para a análise de ADCs conjugados com lisina quando a química do ligante não é instável em pH ácido. Além disso, a Waters oferece Colunas de fase reversa com tecnologia de partícula de núcleo sólido, como a polifenil BioResolve RP mAb para análise de proteínas intactas e de subunidades para determinar a localização de fármacos ligados no nível de domínio. 

  • Reversed-Phase Analysis

Cromatografia de interação hidrofóbica (HIC) para determinação de DAR

Cromatografia de interação hidrofóbica (HIC) para determinação de DAR

As Colunas de HIC Waters Protein-Pak Hi Res com partículas não porosas contêm uma baixa densidade de ligantes de butila para uma resolução excepcional em menos tempo em comparação com a utilização de muitas opções de HIC porosas tradicionais, garantindo um desempenho consistente entre lotes por meio de testes de controle de qualidade com padrões definidos de proteína.

  • HIC Analysis

Obtenha uma exatidão de agregação consistente com as colunas de SEC

Obtenha uma exatidão de agregação consistente com as colunas de SEC

Elimine a necessidade de criar várias fases móveis de eluente por SEC com diferentes proteínas utilizando um método de plataforma com solução salina tamponada com fosfato (ou seja, PBS, Phosphate Buffered Saline) para obter dados de agregados, monômeros e fragmentados consistentemente exatos com as Colunas de SEC da Waters. Além disso, para bioconjugados que podem ser hidrofóbicos criando interações secundárias indesejadas, não há necessidade de adicionar solvente orgânico com as Colunas de SEC MaxPeak Premier para proteínas e suas partículas de BEH ligadas por PEO (óxido de polietileno).

  • SEC Analysis

Caracterize e monitore variantes de carga com cromatografia de troca catiônica

Caracterize e monitore variantes de carga com cromatografia de troca catiônica

Meça com precisão os perfis de variantes de carga de ADCs (conjugados droga-anticorpo) ligados à cisteína e lisina com a Coluna BioResolve SCX mAb e os Concentrados de tampão de pH BioResolve CX para gradientes de sal ou pH com interações secundárias mínimas na detecção óptica. Para percepções estruturais com espectrometria de massas na troca iônica, nossos tampões compatíveis com MS e os Concentrados de tampão de pH IonHance CX-MS, tornam o IEX-MS on-line uma realidade com tampões voláteis e de alta pureza, ideais para espectrometria de massas.

  • Charged Variant Analysis
  • Cation-Exchange Chromatography

Meça a conjugação de oligonucleotídeos com colunas de troca aniônica

Meça a conjugação de oligonucleotídeos com colunas de troca aniônica

Os conjugados oligonucleotídeos-anticorpos (AOCs, Antibody Oligonucleotide Conjugates) são normalmente utilizados no diagnóstico de proteínas, além de ser uma opção terapêutica promissora para a terapia celular direcionada. A carga negativa líquida de um AOC se expande a cada sítio de conjugação adicional, resultando no aumento da retenção em uma resina de troca aniônica. A Coluna GenPak FAX contém um sorvente de troca aniônica fraca que exibe capacidade de retenção controlada e uma seletividade única para amostras de proteínas e oligonucleotídeos. Um trabalho recente de aplicação demonstra que a AEX pode ser associada ao MALS para gerar informações de peso molecular absoluto.

  • AEX OIigonucleotide Conjugate Analysis

Localize com precisão glicanos dentro de uma estrutura de proteína com colunas para glicoproteínas

Localize com precisão glicanos dentro de uma estrutura de proteína com colunas para glicoproteínas

A cromatografia de interação hidrofílica (HILIC, Hydrophillic Interaction Chromatography) tem sido amplamente utilizada para separar pequenos compostos polares, embora sua aplicação a grandes biomoléculas, exceto glicanos livres, tenha sido surpreendentemente pouco explorada. Com as Colunas de poros largos para glicoproteínas da Waters, agora é possível utilizar o modo HILIC para coletar informações antes inacessíveis de proteínas intactas (com ou sem glicosilação), fragmentos de proteínas e glicanos complexos livres.

  • Hydrophillic Interaction Chromatography (HILIC)
  • Released Glycans

Rotina de trabalho de digestão de proteínas rápida, automatizável e robusta

Rotina de trabalho de digestão de proteínas rápida, automatizável e robusta

Os Kits de digestão tríptica de proteínas PeptideWorks da Waters para rotinas de trabalho manuais ou automatizadas fornecem ao seu laboratório mapas de peptídeos reprodutíveis e de alta eficiência em menos de 2,5 horas, 4 vezes mais rápido do que a média dos métodos caseiros. Obtenha digestões de 30 minutos com uma relação enzima:peptídeo de 1:5, redução de 78% em clivagens perdidas e uma redução de 98% em picos de autólise contaminados. O PeptideWorks é ideal para determinação do sítio de conjugação de drogas, caracterização estrutural de proteínas, identificação de proteínas e monitoramento de modificações de proteínas, incluindo modificações pós-traducionais.

  • Peptides
  • Peptide Mapping
  • Protein Digestion

A análise de glicanos acabou de ficar mais fácil e sensível

A análise de glicanos acabou de ficar mais fácil e sensível

Repense uma forma simplificada, rápida e altamente sensível de traçar o perfil de N-glicanos em ADCs (conjugados droga-anticorpo) com o Kit GlycoWorks. Obtenha um desempenho espectrométrico de massas e fluorescente sem precedentes para análise de N-glicanos livres, maximizando a produtividade com uma solução que é automatizável no Robô de pipetagem Waters Andrew+. Com apenas 3 etapas simples em somente 30 minutos, o Kit GlycoWorks RapiFluor-MS para N-glicanos reduz o preparo complexo e demorado de amostras.

  • n-glycan analysis
  • glycosylation

Elimine a complexidade da quantificação de proteínas

Elimine a complexidade da quantificação de proteínas

Simplifique e acelere a digestão de proteínas com os Kits de digestão ProteinWorks eXpress. Reagentes rastreáveis em lote e pré-medidos e protocolos padronizados para quantificação exata, precisa e sensível por LC-MS de proteínas, incluindo ADCs (conjugados droga-anticorpo), em plasma e soro. Obtenha um desempenho e uma flexibilidade incomparáveis para uma digestão de proteínas reprodutível com kits otimizados para várias rotinas de trabalho, incluindo bioanálise de proteínas/metabolismo de fármacos e farmacocinética.

  • Proteins
  • Protein bioanalysis

Reduza o custo de análises de SEC sem comprometimento

Reduza o custo de análises de SEC sem comprometimento

A utilização das Pré-colunas de SEC MaxPeak Premier de 250 Å para proteínas disponíveis e econômicas ajuda a prolongar a vida útil da coluna de SEC analítica sem degradar a resolução desejada dos componentes separados ou comprometer as separações de variantes de tamanho necessárias.  

  • SEC Columns
  • Proteins

Aplicações

Simplifique a aquisição, o processamento e a geração de relatórios de dados para análise de ADCs (conjugados droga-anticorpo) por LC-UV ou LC-MS. Para saber mais, veja estas notas de aplicação

Simplifique a aquisição, o processamento e a geração de relatórios de dados para análise de ADCs (conjugados droga-anticorpo) por LC-UV ou LC-MS. Para saber mais, veja estas notas de aplicação


A determinação confiável e reprodutível de DAR com base na distribuição de carga de drogas em ADCs (conjugados droga-anticorpo) conjugados com cisteína através de áreas de pico é obtida de forma consistente com a Coluna de cromatografia de interação hidrofóbica (HIC, Hydrophobic-Interaction Chromatography) Protein-Pak Hi Res utilizando detecção óptica. Para saber mais, veja estas notas de aplicação.

A determinação confiável e reprodutível de DAR com base na distribuição de carga de drogas em ADCs (conjugados droga-anticorpo) conjugados com cisteína através de áreas de pico é obtida de forma consistente com a Coluna de cromatografia de interação hidrofóbica (HIC, Hydrophobic-Interaction Chromatography) Protein-Pak Hi Res utilizando detecção óptica. Para saber mais, veja estas notas de aplicação.


A cromatografia de exclusão por tamanho (SEC, Size-Exclusion Chromatography) determina agregados de peptídeos e proteínas, monômeros e fragmentos em pesquisa, desenvolvimento e fabricação de ADCs (conjugados droga-anticorpo) com pesos moleculares de 100000 a 650000 daltons. Mantenha uma alta produtividade na caracterização de ADCs (conjugados droga-anticorpo) com nossas Colunas de SEC baseadas em BEH que são submetidas a controle de qualidade com Padrões de peptídeos e proteínas MassPrep para consistência de separação em toda a rotina de trabalho de SEC-MS. Para saber mais, veja estas notas de aplicação.

A cromatografia de exclusão por tamanho (SEC, Size-Exclusion Chromatography) determina agregados de peptídeos e proteínas, monômeros e fragmentos em pesquisa, desenvolvimento e fabricação de ADCs (conjugados droga-anticorpo) com pesos moleculares de 100000 a 650000 daltons. Mantenha uma alta produtividade na caracterização de ADCs (conjugados droga-anticorpo) com nossas Colunas de SEC baseadas em BEH que são submetidas a controle de qualidade com Padrões de peptídeos e proteínas MassPrep para consistência de separação em toda a rotina de trabalho de SEC-MS. Para saber mais, veja estas notas de aplicação.


A análise de variantes de carga para ADCs (conjugados droga-anticorpo) ligados a lisina e cisteína com mecanismos de eluição de gradiente de sal e pH é possível regularmente com as Colunas Waters SCX. Essas colunas resistentes à corrosão contêm partículas não porosas à base de polímero adicionadas com uma rede rigorosamente otimizada multicomponente de ligantes de ácido sulfônico com carga negativa — para separações reprodutíveis, de alta resolução e baseadas em carga de mAbs e outras proteínas em aplicações LC e LC-MS. Para saber mais, veja estas notas de aplicação.

A análise de variantes de carga para ADCs (conjugados droga-anticorpo) ligados a lisina e cisteína com mecanismos de eluição de gradiente de sal e pH é possível regularmente com as Colunas Waters SCX. Essas colunas resistentes à corrosão contêm partículas não porosas à base de polímero adicionadas com uma rede rigorosamente otimizada multicomponente de ligantes de ácido sulfônico com carga negativa — para separações reprodutíveis, de alta resolução e baseadas em carga de mAbs e outras proteínas em aplicações LC e LC-MS. Para saber mais, veja estas notas de aplicação.


A separação de glicoproteínas intactas, fragmentos de glicoproteínas e glicopeptídeos pode ser um desafio. As colunas de HILIC podem produzir maior recuperação de subunidades de mAb e ADCs (conjugados droga-anticorpo) particularmente difíceis em comparação com métodos comuns de RPLC, mantendo uma boa separação. A HILIC de subunidades de mAb também pode ser utilizada para avaliar perfis de N-glicosilação. Com as Colunas de HILIC da Waters, cada lote de material de BEH amida para glicoproteínas de 300 Å e 1,7 µm é testado por controle de qualidade com o Padrão de teste de desempenho da Waters para glicoproteínas para consistência entre lotes. Para saber mais, veja estas notas de aplicação.

A separação de glicoproteínas intactas, fragmentos de glicoproteínas e glicopeptídeos pode ser um desafio. As colunas de HILIC podem produzir maior recuperação de subunidades de mAb e ADCs (conjugados droga-anticorpo) particularmente difíceis em comparação com métodos comuns de RPLC, mantendo uma boa separação. A HILIC de subunidades de mAb também pode ser utilizada para avaliar perfis de N-glicosilação. Com as Colunas de HILIC da Waters, cada lote de material de BEH amida para glicoproteínas de 300 Å e 1,7 µm é testado por controle de qualidade com o Padrão de teste de desempenho da Waters para glicoproteínas para consistência entre lotes. Para saber mais, veja estas notas de aplicação.




Os dados falam por si

Os dados falam por si
Espectros de massa intacta deconvoluídos para ADCs (conjugados droga-anticorpo) conjugados com cisteína a partir de SEC-LC-MS nativa após desglicosilação. A distribuição de medicamentos foi comparada para três amostras diferentes de ADCs (conjugados droga-anticorpo) conjugado com cisteína com o aumento da carga de medicamentos. 
Perfil de variante de carga de um conjugado droga-anticorpo descontinuado e ligado à cisteína da Pfizer obtido com cromatografia de troca iônica. (A) Cromatogramas UV obtidos com um método de gradiente de sal de MES de 20 mM (pH 5,4) e um aumento linear da concentração de cloreto de sódio de 140 a 220 mM em 30 minutos a 0,80 mL/min em uma Coluna BioResolve SCX mAb de 4,6 x 100 mm. Cromatogramas UV obtidos com métodos de gradiente de pH em uma Coluna BioResolve SCX mAb de 4,6 x 50 mm, utilizando Concentrados de pH BioResolve CX e fases móveis sem (B), com 5% (C) ou com 10% de acetonitrila (D) e um aumento linear da porcentagem de fase móvel B de 0 a 100% em 30 minutos a 1,00 mL/min. (E) Sobreposição de cromatogramas UV obtidos com métodos de gradiente de pH em uma Coluna BioResolve SCX mAb de 4,6 x 50 mm, utilizando Concentrados de pH BioResolve CX e fases móveis sem, com 5% e com 10% de acetonitrila. A detecção UV foi a 280 nm.
Cromatografia de interação hidrofílica de um mAb em relação a seu ADC (conjugado droga-anticorpo). Os números representam quantos ligantes/cargas estão presentes no conjugado, em que a e b significam isômeros posicionais. *Indica produtos de hidrólise de carga/ligante. #Indica oxidação em nível de traço. A glicosilação é marcada de acordo com a notação de Oxford. F indica fucose, A2 representa que as estruturas são biantenárias e G significa galactose (FA2 = G0F, FA2G1 = G1F e FA2G2 = G2F).
AEX-MALS de uma amostra de AOC conforme obtida com uma Coluna Waters Gen-Pak FAX. Um cromatograma UV de 280 nm é mostrado com a massa molar sobreposta. Os limites de pico são indicados pelas linhas tracejadas verticais.
Comparação do mapeamento de peptídeos (cromatogramas UV) de um trastuzumabe conjugado e não conjugado
Parte superior: Digestão tríptica de biossimilar de trastuzumabe.
Parte inferior: Trastuzumabe entansina (Kadcyla), digestão tríptica de conjugado droga-anticorpo.
Ambas as digestões trípticas utilizaram o Kit de digestão tríptica de proteínas PeptideWorks e o Kit de Tripsina RapiZyme com injeção de 100 µL (aproximadamente 10 µg) em uma Coluna XSelect Premier CSH C18 para peptídeos de 2,5 µm, 2,1 x 150 mm. Picos adicionais observados no cromatograma de Kadcyla (parte inferior) em comparação com trastuzumabe não conjugado (parte superior). 
Comparação do desempenho de interações secundárias hidrofóbicas utilizando o ADC (conjugado droga-anticorpo) ado-trastuzumabe entansina. Após o aumento da concentração orgânica, o grau de alteração observado para a Coluna de SEC XBridge Premier de 250 Å e 2,5 µm para proteínas é novamente insignificante, com formato de pico excelente de 0 a 15% de MeCN. As interações secundárias hidrofóbicas foram em grande parte mitigadas por meio da utilização da ligação de material de retenção de óxido de polietileno (PEO, Polyethylene Oxide) com terminação hidróxi de alta cobertura.
Análise de ADC (conjugado droga-anticorpo) conjugado com cisteína utilizando HIC. A distribuição de medicamentos foi determinada para três amostras diferentes de ADC (conjugado droga-anticorpo) conjugado com cisteína com o aumento da carga de medicamentos.

Webinars e recursos



  • Reimpressão de artigo

Definição de perfis de LC-MS de alta sensibilidade de conjugados droga-anticorpo com pareamento iônico de ácido difluoroacético

Definição de perfis de LC-MS de alta sensibilidade de conjugados droga-anticorpo com pareamento iônico de ácido difluoroacético
  • Cartaz

Aprimoramento da definição de perfis em nível de subunidade de mAbs e ADCs (conjugados droga-anticorpo) com ácido difluoroacético de qualidade de MS

Aprimoramento da definição de perfis em nível de subunidade de mAbs e ADCs (conjugados droga-anticorpo) com ácido difluoroacético de qualidade de MS

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