Quantificação de UPLC-MS/MS altamente sensível e robusta das impurezas de nitrosamina nos medicamentos sartana e ranitidina

Este resumo de aplicações demonstra um método de quantificação de LC-MS/MS altamente sensível e robusto para seis impurezas de nitrosamina (NDMA, NDEA, NEIPA, NDIPA, NDBA e NMBA) em soluções contendo os medicamentos irbesartana, losartana, valsartana ("sartanas") e ranitidina.

Benefícios

O Espectrômetro de massas Xevo TQ-XS, acoplado a um ACQUITY UPLC I-Class PLUS System com uma Coluna HSS T3 para separação, permite uma quantificação altamente sensível das impurezas de nitrosamina em medicamentos ranitidina e sartana, obtendo LLOQs de 0,1 ng/mL.

Os compostos N-nitrosos são considerados como tendo um potencial cancerígeno extremamente alto, e vários medicamentos foram recolhidos devido à presença dessas impurezas.^1,2 Para garantir a segurança dos produtos farmacêuticos, devem ser tomadas medidas para entender a origem dessas impurezas e assegurar a remoção delas dos medicamentos finais. É possível encontrar informações sobre como avaliar e controlar essas impurezas cancerígenas na diretriz ICH M7 (R1).³

Neste artigo, apresentamos um método de LC-MS/MS altamente sensível e robusto para a quantificação simultânea de seis impurezas de nitrosamina (NDMA, NDEA, NEIPA, NDIPA, NDBA e NMBA). Esse método suporta 0,1 ng/mL de LLOQs (3 pg na coluna) com um intervalo dinâmico linear de 0,1 a 100 ng/mL.

Foram preparadas amostras padrão contendo as seis impurezas de nitrosamina e quatro medicamentos (ranitidina e "sartanas") a partir de uma solução estoque concentrada com 1 μg/mL de cada impureza de nitrosamina e aproximadamente 100 μg/mL de cada medicamento em 20% de metanol/80% de água. Os padrões de calibração (0,05-100 ng/mL) foram preparados em água por diluição em série a partir da solução de 1 μg/mL e colocados em um plate de coleta de amostras de 96 poços (PN 186005837). O plate foi vedado utilizando um tapete de selagem de 96 poços de silicone/PTFE pre-slit (PN 186006332). As condições de LC-MS são listadas na Tabela 1, e as transições de MRM específicas para as nitrosaminas e os medicamentos utilizados para análise são listadas na Tabela 2. A análise LC-MS/MS foi realizada com um espectrômetro de massas tandem quadrupolo Waters Xevo TQ-XS acoplado a um ACQUITY UPLC I-Class PLUS System. A separação cromatográfica das nitrosaminas e dos medicamentos foi obtida com uma Coluna ACQUITY HSS T3 com base em um método anterior.⁴ Devido ao recheio polar exclusivo, a Coluna ACQUITY HSS T3 proporcionou excelente retentividade para as nitrosaminas, em particular a retenção da nitrosamina mais polar, NDMA (Figura 1). O Xevo TQ-XS MS, incluindo uma inédita guia de íons StepWave e uma probe de APCI IonSABRE, melhorou a amostragem de íons na fonte, possibilitou uma transferência de íons eficiente e aprimorou a ionização. Os softwares de processamento cromatográfico e de dados MassLynx (v4.2) e TargetLynx XS foram utilizados para aquisição e quantificação de dados. As mesmas funções quantitativas também estão disponíveis no MassLynx Security, a solução pronta para conformidade da Waters. Esse desempenho de quantificação é destacado na Tabela 3, e o desempenho cromatográfico, que realça os LLOQs das seis impurezas de nitrosamina, é ilustrado na Figura 2. Com esse ensaio desenvolvido, LLOQs de 0,1 ng/mL foram obtidos com exatidões e RSDs ≤ 15%, demonstrando um método altamente sensível, exato e robusto para quantificação de impurezas de nitrosamina.

Um único método de UPLC-MS/MS foi desenvolvido com êxito para a quantificação exata, robusta e altamente sensível de seis impurezas de nitrosamina, obtendo LLOQs de 0,1 ng/mL com o ACQUITY UPLC I-Class PLUS e o espectrômetro de massas tandem quadrupolo Xevo TQ-XS. A Coluna ACQUITY HSS T3 proporcionou excelente retentividade e seletividade para as seis impurezas de nitrosamina. Esse método oferece um ponto de partida prático para quantificação de alta sensibilidade de nitrosaminas ou compostos similares.

1. https://www.uspharmacist.com/article/fda-update-on-recent-voluntary-arb-drug-recalls
   
2. https://www.fda.gov/newsevents/press-announcements/statement-alerting-patients-and-health-careprofessionals- ndma-found-samples-ranitidine 
3. ICH M7 R1, Assessment and Control of DNA Reactive (Mutagenic) Impurities in Pharmaceuticals to Limit Potential Carcinogenic Risk, International Conference on Harmonization, Março de 2018. 
4. Maziarz, M.; Naughton, S. Use of a proprietary polar column chemistry for the separation of nitrosamines in sartan and ranitidine drug substances. Resumo tecnológico da Waters. 720006738EN. 2020.