Modos de separação
Identificação de recheios para enfrentar todos os seus desafios cromatográficos
Cromatografia de fase reversa
A cromatografia de fase reversa é, de longe, a técnica de separação por cromatografia líquida mais popular empregada no laboratório atualmente, e sua popularidade é refletida pela grande seleção de produtos de coluna disponíveis na Waters hoje.
Em sua forma mais simples, a cromatografia de fase reversa compreende uma fase móvel polar, normalmente misturas de água ou tampão com solventes polares, como metanol, acetonitrila ou tetrahidrofurano, e uma fase estacionária apolar, como um hidrocarboneto de cadeia longa ligado a um suporte híbrido ou de sílica. Nos últimos anos, esforços significativos de pesquisa e desenvolvimento têm sido direcionados na área de meios de separação, com o objetivo de melhorar a eficiência da coluna, a estabilidade do pH e fornecer seletividades alternativas.
Os recheios de coluna modernos da Waters podem ser classificados em três categorias:
- Híbrido: criado para máxima estabilidade de pH, a fim de fornecer as opções de desenvolvimento de método mais flexíveis. Disponível nas marcas XBridge, ACQUITY BEH e XTerra; intervalo de pH entre 1 e 12.
- Sílica: historicamente o suporte de fase reversa mais comumente utilizado, os produtos SunFire e Symmetry são sintetizados a partir de matérias-primas na fábrica da Waters em Taunton e são projetados para capacidade máxima de carregamento; intervalo de pH entre 2 e 7.
- Específico à aplicação: criado para visar uma área de aplicação específica, como colunas Atlantis, para maior retenção de moléculas polares.
Cromatografia de fase normal
Antes do desenvolvimento de fases ligadas por fase reversa, a cromatografia de fase normal era a técnica de separação mais popular. Ela depende da interação de analitos com grupos funcionais polares na superfície da fase estacionária, que é mais forte quando solventes apolares são utilizados como fase móvel.
A cromatografia de fase normal é uma ferramenta de separação muito poderosa devido à ampla variedade de solventes disponíveis que podem ser utilizados para ajustar a seletividade de uma separação. No entanto, ela foi relegada por muitos cromatógrafos devido a algumas das complexidades envolvidas. Em algumas circunstâncias, podem ser encontrados longos tempos de equilíbrio ou problemas de reprodutibilidade, os quais se devem em grande parte à sensibilidade da técnica à presença de pequenas concentrações de contaminantes polares na fase móvel. Se esses problemas forem controlados, a técnica normalmente fornecerá cromatogramas superiores aos dos métodos de fase reversa, graças à baixa viscosidade dos solventes comumente utilizados.
As colunas de fase normal estão disponíveis nas famílias de produtos SunFire, Nova-Pak e Spherisorb.
Cromatografia de interação hidrofílica (Hydrophilic-Interaction Chromatography, HILIC)
A cromatografia de interação hidrofílica já é realizada há algum tempo, mas o termo HILIC só entrou em utilização comum recentemente. Os analitos são compostos muito polares, como metabólitos polares, carboidratos ou peptídeos.
A HILIC pode ser vista como uma extensão da cromatografia de fase normal no domínio das fases móveis aquosas. As fases móveis são misturas de água ou tampão (< 40%) com solventes orgânicos. As fases estacionárias são adsorventes polares muito hidrofílicos, como sílica, fases de ligação polar, preenchimentos poliméricos polares e trocadores de íons. O fator comum de todas essas fases estacionárias é que elas podem facilmente adsorver água, logo a categorização "hidrofílica".
Os métodos de gradiente empregados no modo HILIC são exatamente o oposto daqueles no modo de fase reversa. As condições iniciais incluirão alto teor de orgânico, em geral 95% movendo-se progressivamente para aquoso superior. Por esse motivo, o termo "fase reversa reversa" também está se tornando comum.
A técnica está ganhando popularidade e, por isso, é o assunto de cada vez mais pesquisas sobre preenchimentos de coluna.
Atualmente, as colunas HILIC da Waters estão disponíveis nas famílias de produtos Atlantis, CORTECS, XBridge e ACQUITY.
Cromatografia de fase reversa
A cromatografia de fase reversa é, de longe, a técnica de separação por cromatografia líquida mais popular empregada no laboratório atualmente, e sua popularidade é refletida pela grande seleção de produtos de coluna disponíveis na Waters hoje.
A cromatografia de fase reversa inclui uma fase móvel polar, normalmente misturas de água ou água tamponada misturada com mais solventes apolares, como metanol, acetonitrila ou tetrahidrofurano. Apolar, a fase estacionária é criada em alguns casos ligando funções de hidrocarboneto de cadeia longa a um suporte de partícula de sílica, núcleo sólido, polimérico ou híbrido. Nos últimos anos, trabalhos significativos de pesquisa e desenvolvimento, direcionados na área de meios de separação de fase reversa, visaram melhorar a eficiência da coluna, a estabilidade do pH e fornecer seletividades alternativas.
Os recheios de coluna modernos da Waters podem ser classificados em quatro categorias:
- Híbrido: criado para máxima estabilidade de pH, a fim de fornecer as opções de desenvolvimento de método mais flexíveis. Intervalo de pH entre 1 e 12.
- Sílica: historicamente o suporte de fase reversa mais comumente utilizado, esses produtos são sintetizados a partir de matérias-primas na fábrica da Waters em Taunton e são projetados para capacidade máxima de carregamento. Intervalo de pH entre 2 e 7.
- Núcleo sólido: partículas criadas para maximizar a eficiência da coluna, reduzindo as fontes de aditivos de dispersão da coluna. Disponível em tamanhos de partícula de 1,6 e 2,7 µm, compatíveis com todos os sistemas LC.
- Específico à aplicação: criado para visar uma área de aplicação específica para maior retenção de moléculas polares.
Marcas de coluna relacionadas
Híbrida
Sílica
Núcleo sólido
Específica à aplicação
Cromatografia de fase normal
A cromatografia de fase normal pode ser considerada o oposto da cromatografia de fase reversa. Ela depende da interação de analitos que têm grupos funcionais polares com a superfície polar da fase estacionária. A fase móvel de eluição forte para a cromatografia de fase normal é polar. Portanto, a retenção máxima é alcançada utilizando solventes apolares
A cromatografia de fase normal é uma ferramenta de separação muito poderosa devido à ampla variedade de solventes disponíveis que podem ser utilizados para ajustar a seletividade de uma separação. No entanto, ela foi relegada por muitos cromatógrafos devido a algumas das complexidades envolvidas. Em algumas circunstâncias, podem ser encontrados longos tempos de equilíbrio ou problemas de reprodutibilidade, os quais se devem em grande parte à sensibilidade da técnica à presença de pequenas concentrações de contaminantes polares na fase móvel. Se esses problemas forem controlados, a técnica normalmente fornecerá cromatogramas superiores aos dos métodos de fase reversa, graças à baixa viscosidade dos solventes comumente utilizados.
Marcas de coluna relacionadas
Cromatografia de interação hidrofílica (Hydrophilic-Interaction Chromatography, HILIC)
A cromatografia de interação hidrofílica já é realizada há algum tempo, mas o termo HILIC só entrou em utilização comum recentemente. A HILIC é uma variação da cromatografia de fase normal, em que os analitos com melhor retenção são compostos muito polares, como metabólitos polares, carboidratos ou peptídeos.
As fases móveis são misturas de água ou tampão (< 40%) com solventes orgânicos. As fases estacionárias são muito hidrofílicas e consistem em sílica nua, fases de ligação polar, preenchimentos poliméricos polares, dipolares e trocadores de íons. O fator comum de todas essas fases estacionárias é que elas podem facilmente adsorver uma camada de água na superfície das partículas para promover o particionamento. É o particionamento com a água imobilizada posteriormente na superfície e na fase móvel em massa que impulsiona a retenção. Os métodos de gradiente empregados no modo HILIC são exatamente o oposto daqueles no modo de fase reversa. As condições iniciais incluirão alto teor de orgânico, em geral 95% movendo-se progressivamente para aquoso superior. Por esse motivo, o termo "fase reversa reversa" também está se tornando comum.
A técnica está ganhando popularidade e, por isso, é o assunto de cada vez mais pesquisas sobre preenchimentos de coluna.
Marcas de coluna relacionadas
Cromatografia de troca iônica
As separações IEX são geralmente realizadas com a utilização de gradientes de aumento de sal, a alteração de pH ou aumentos de sal e alteração de pH simultâneos, com espécies de proteínas menos carregadas em eluição antes de moléculas com cargas mais elevadas. Com base no tipo de proteína e no pH de separação, seleciona-se um trocador aniônico ou catiônico para a separação. Além disso, a duração do gradiente, a composição e o pH do tampão, a taxa de fluxo e a temperatura de separação também desempenham papéis importantes na obtenção das separações de proteínas desejadas.
