Em parceria com a Trajan, a Waters transformou um processo analítico altamente manual em um sistema integrado e automatizado com nosso sistema HDX-MS, que utiliza separações por UPLC de alta pressão em nano a microescala, robótica de manuseio de amostras e espectrometria de massas com mobilidade iônica de alta resolução para análise aprofundada de estudos da estrutura de proteínas, incluindo:
O sistema completo da Waters disponível no mercado para estudos de HDX-MS combina nosso Sistema ACQUITY UPLC M-Class com tecnologia HDX com um espectrômetro de massas da Waters, como o SELECT SERIES Cyclic IMS, robótica da Trajan e um software específico a aplicações de HDX, o DynamX.
A MS (Espectrometria de massas) de troca de hidrogênio/deutério (HDX, Hydrogen Deuterium Exchange) funciona em muitas aplicações, incluindo o entendimento de como a terapêutica de moléculas pequenas se liga a alvos de proteína e a realização de mapeamento de epítopos. Com essa tecnologia, o deutério em uma solução substitui o hidrogênio de amida na estrutura de uma biomolécula, e a MS mede essas mudanças.
O hidrogênio de amida na estrutura de uma biomolécula troca com deutério em solução a taxas diferentes, parcialmente dependentes da conformação. A MS pode medir essas mudanças e, assim, pressupor o grau de atividade em vários sítios. Esses locais podem ser identificados e mapeados para a sequência primária, o que facilita a visualização e revela informações sobre a estrutura das proteínas. O enovelamento e a dinâmica relativos podem ser determinados a partir das diferentes taxas de absorção em diversos locais.
Com o UPLC-MSE, seu laboratório pode gerar um conjunto de dados abrangente, medindo todos os peptídeos sem desvios pela intensidade do sinal de peptídeos. Esse é um recurso importante para estudos de HDX, em que as principais informações podem ser encontradas em peptídeos de baixa intensidade.
O HDX-MS abre novas portas na dinâmica de biomoléculas fornecendo informações sobre a absorção relativa de deutério de diferentes conformações de uma proteína ou localizações dentro de uma proteína. Desenvolvimentos recentes tornaram o HDX com espectrometria de massas uma ferramenta mais acessível para estudar a dinâmica da estrutura de ordem superior (HOS, Higher Order Structure) de bioterapêuticos. As tendências regulatórias e do setor estão claramente indo em direção a uma ênfase na conformação e nas relações entre as biomoléculas, tornando o HDX uma ferramenta-chave que está sendo rapidamente adotada em mais áreas de análise bioterapêutica.
Caracterização de biossimilares
Aproveite as separações por UPLC e a Espectrometria de Massas de alta resolução (HRMS, High-Resolution Mass Spectrometry) para identificar com segurança as alterações na conformação de proteínas com o Sistema ACQUITY UPLC M-Class com tecnologia HDX.
Maximize as informações das amostras para seus analitos, desde a caracterização detalhada até a quantificação exata com o Xevo G3 QTof, que proporciona total confiança em seus resultados.
Desenvolvido por meio de colaboração focada, o SELECT SERIES Cyclic IMS combina a inovadora separação por mobilidade iônica cíclica com espectrometria de massas de tempo de voo de alto desempenho de última geração, permitindo que os pesquisadores líderes desbloqueiem o potencial da descoberta científica.
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Retenção de deutério para quatro peptídeos a partir de peptídeos trípticos de enolase de levedura.
Estrutura cristalina de CaM (Calmodulina) codificada por cores para representar a absorção de deutério. (A) CaM (Calmodulina) na forma apo e (B) CaM na forma holo na marcação de deutério aos 10 s foram comparadas. Uma diferença significativa na absorção de deutério foi observada na região destacada em que a conformação foi alterada devido à ligação de cálcio.
Uma absorção diferente de deutério do mesmo peptídeo foi encontrada em CaM (Calmodulina) na forma apo e holo. Na marcação aos 10 minutos, este peptídeo (FKEASLF, 12-19) mostrou uma absorção de deutério maior na forma apo (painel da esquerda) do que na forma holo (painel da direita).
Comparação da perda de deutério a partir de bradicinina e angiotensina II totalmente deuteradas em A) várias temperaturas de digestão, B) tempos de espera de têmpera e C) taxa de fluxo de digestão/dessalinização. A perda de deutério causada pela fonte do espectrômetro de massas é destacada com uma borda preta em 5B. Perfis isotópicos semelhantes foram encontrados em ambos os peptídeos sob pressão normal e alta pressão (5D). A alta pressão causou uma perda de deutério um pouco maior (< 5%).
