Les longs acides nucléiques / séquences transgéniques en thérapie cellulaire et thérapie génique présentent une longueur comprise entre 1 000 et plus de 10 000 nucléotides. La confirmation de leur identité et de leur pureté est essentielle pour garantir l’innocuité et l’efficacité de ces nouvelles modalités. Associés à la détection optique et/ou à la spectrométrie de masse, les systèmes et colonnes de chromatographie de Waters offrent de puissantes fonctions pour confirmer les propriétés physicochimiques de ces acides nucléiques et du médicament une fois ceux-ci encapsidés dans des nanoparticules lipidiques (NPL), des vecteurs viraux (p. ex. de type VAA) ou des pseudo-particules virales (PPV) servant à l’administration de cellules.
Webinaire à la demande : analyse par LC/MS des attributs CQA de produits thérapeutiques à base d’ARN
Les systèmes LC et LC/MS de Waters offrent des performances de séparation et une sensibilité de pointe pour l’analyse des acides nucléiques.
Les colonnes et les systèmes MaxPeak Premier éliminent le caractère imprévisible des pertes d’analytes en raison d’interactions métalliques, qui peuvent être particulièrement accentuées sur des acides nucléiques à charge négative.
Réalisez des analyses biopharmaceutiques par LC/MS de routine dans chaque laboratoire avec le système LC/MS BioAccord de Waters, qui allie la fiabilité des données en masse exacte et le logiciel waters_connect pour analyser des données et créer des rapports conformément aux exigences réglementaires.
Accélérez la caractérisation des acides nucléiques avec le système de paillasse haute performance HRMS Xevo G3 Q-Tof et transposez ces connaissances en tests de suivi efficaces, offrant des résultats qualitatifs et quantitatif exacts avec le partage des données sur les réseaux waters_connect.
Mesurez simultanément la taille, la masse moléculaire, la distribution et la morphologie en associant le détecteur flexible DAWN de Wyatt à des systèmes LC de Waters, dont le système Arc Premier, applicables aux acides nucléiques, aux NPL et aux protéines conjuguées.
Séparation d’un étalon d’oligonucléotides d’ARN de synthèse oligo(A) de 100 nt (chromatogramme noir), d’ARNm de l’EPO digéré par la RNase T1 (chromatogramme bleu) et d’ARNm de la Fluc-bêta digéré par la RNase T1 (chromatogramme rouge) par LC IP-RP à l’aide d’une colonne ACQUITY Premier Oligonucleotide BEH 300 Å 1,7 µm. Le pic le plus abondant au sein de la série de pics concernant la queue poly(A) d’ARNm de l’EPO correspond à une espèce de 124 nt de long. Le pic le plus abondant au sein du groupe de pics concernant la queue poly(A) d’ARNm de la Fluc-bêta correspond à une espèce de 128 nt de long.
Effet de la température sur le profil chromatographique (sélectivité) et la contamination croisée. Colonne : colonne Gen-Pak FAX 100 x 4,6 mm, 2,5 µm, phase mobile A : TRIS 25 mM, pH= 7,6, phase mobile B : TRIS 25 mM, pH 7,6 + 2 M de NaBr, F=0,6 mL/min, gradient : 12-35 % de B en 15 min (gradient en pente douce), tampon de solvant modulateur : phase mobile B. Injection d’encadrement : 1 µL de pré-tampon de modulateur + 2 µL d’échantillon + 1 µL de post-tampon de modulateur. Température : ambiante (à gauche), 35 °C (au milieu) et 45 °C (à droite).
(A) Les produits de digestion aux positions 623 à 631 (ACAUCCUCGp) et 551 à 559 (UCACCAUCGp) sont prédits et attribués au même pic de temps de rétention dans le courant ionique total selon Gaye et al. Il est impossible de déterminer la bonne attribution avec des informations de masse intacte. (B) Les données MSE d’une même injection peuvent être utilisées pour élucider la séquence correcte pour cette attribution. Grâce à l’application waters_connect CONFIRM Sequence, les ions fragments à haute énergie sont prédits pour chaque séquence et mis en correspondance avec les groupes d’isotopes des données brutes intégrées via un algorithme spécialement conçu. Le logiciel présente les ions fragments confirmés sur une carte de points, ce qui permet d’évaluer rapidement la couverture des séquences.
Effet du pH et de la température sur la séparation des isoformes plasmidiques du ΦX174.
