Colonnes et consommables pour la purification des oligonucléotides

Colonnes et consommables pour la purification des oligonucléotides

Découvrez comment les colonnes et consommables de Waters pour la préparation des oligonucléotides en laboratoire peuvent vous aider à réaliser directement des purifications exceptionnelles avec un rendement élevé et à haute cadence. Doté d’une tolérance au pH et à la température inégalée dans le secteur, chaque lot de sorbant est soumis à un contrôle qualité et sélectionné à l’aide d’étalons d’oligonucléotides fabriqués par Waters, afin de garantir la performance et la reproductibilité interlots.

Découvrez comment les colonnes et consommables de Waters pour la préparation des oligonucléotides en laboratoire peuvent vous aider à réaliser directement des purifications exceptionnelles avec un rendement élevé et à haute cadence. Doté d’une tolérance au pH et à la température inégalée dans le secteur, chaque lot de sorbant est soumis à un contrôle qualité et sélectionné à l’aide d’étalons d’oligonucléotides fabriqués par Waters, afin de garantir la performance et la reproductibilité interlots.
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Robustes et pratiques, les workflows analytiques de Waters pour la caractérisation et le suivi des oligonucléotides de synthèse garantissent la compréhension des procédés et la qualité des produits
Learn how to achieve high performance oligonucleotide preparative chromatography by utilizing XBridge Oligonucleotide OBD Prep Columns and efficient method optimization considerations

Présentation

Pour garantir la fonctionnalité, la sécurité et l’efficacité des oligonucléotides dans les applications pharmaceutiques et diagnostiques, il est essentiel de les purifier complètement des impuretés produites au cours de la synthèse. En raison de leur nature polyanionique, il est difficile d’isoler les oligonucléotides avec une sélectivité et une résolution élevées. Dans ce domaine, la chromatographie en phase inverse avec appariement d’ions (IP-RP) s’est imposée comme la technique privilégiée.

Les colonnes testées par lot et offrant une grande stabilité vis-à-vis du pH et de la température ainsi que des niveaux contrôlés d’interactions secondaires permettent d’éliminer rapidement les goulots d’étranglement et de gagner un temps précieux. Les colonnes XBridge Oligonucleotide BEH C18 Optimal Bed Density (OBD) de Waters constituent les colonnes préparatives idéales, car elles offrent des performances assurées, permettent une transposition d’échelle cohérente et assurent une purification à haut rendement de divers oligonucléotides ayant subi des modifications chimiques complexes.

  • Testées par lots et certifiées par contrôle qualité, les chimies BEH C18 pour oligonucléotides permettent une mise à l’échelle prévisible et une purification cohérente sur différents diamètres de colonne.
  • La technologie de particules de silice hybride BEH C18 confère aux colonnes une stabilité inégalée vis-à-vis du pH et de la température, ainsi qu’une résolution et une durée de vie exceptionnelles.
  • La technologie MaxPeak Premier HPS (High Performance Surfaces) (disponible sur les colonnes de 10 mm de diamètre interne) apporte une solution supplémentaire à l’adsorption non spécifique pour une sensibilité, une reproductibilité et une productivité maximales.
  • Une gamme d’étalons analytiques de haute qualité, traçables par lots, facilite les tests d’aptitude du système, le développement de méthodes et le dépannage.
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Remplissage Optimum Bed Density, pour une densité de lit optimale

Remplissage Optimum Bed Density, pour une densité de lit optimale

Pour les colonnes préparatives ayant un rapport longueur/diamètre plus faible, le remplissage de la suspension à haute pression avec de petites particules ne permet souvent pas d’obtenir la densité de lit recherchée sur une colonne analytique de qualité. Une compression axiale excessive à l’entrée peut entraîner une dégradation des particules, la formation de canaux et une réduction de la perméabilité du lit. Grâce à leur conception novatrice, les colonnes OBD présentent des atouts indéniables, notamment une durée de vie plus longue, une efficacité accrue, une meilleure forme des pics et une contre-pression plus faible.

Technologie MaxPeak HPS sur les colonnes de 10 mm de diamètre interne

Technologie MaxPeak HPS sur les colonnes de 10 mm de diamètre interne

Comme tous les acides nucléiques, les oligonucléotides sont polyanioniques (chargés négativement) et s’adsorbent donc facilement sur la surface d’oxyde métallique des colonnes en acier inoxydable. Les colonnes XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 OBD de Waters sont fabriquées à partir de composants traités pour présenter une chimie de surface inerte hybride organique/inorganique à base de silice qui réduit considérablement l’adsorption non spécifique (ANS) des acides nucléiques. Elles offrent ainsi un rendement accru et une meilleure reproductibilité pour certains composés qui doivent être isolés d’une substance médicamenteuse en vue d’une étude plus approfondie. Les colonnes XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 OBD ne nécessitent ni passivation ni conditionnement des échantillons. Vous pouvez ainsi entreprendre vos collectes de fractions sans délai. 

Colonnes pour oligonucléotides testées par lots et sélectionnées avec particules BEH C18 130 et 300 Å de 2,5 et 5 µm

Colonnes pour oligonucléotides testées par lots et sélectionnées avec particules BEH C18 130 et 300 Å de 2,5 et 5 µm

La technologie de particules hybrides à ponts éthane (BEH) certifiée par lots de Waters garantit des performances, une reproductibilité et une mise à l’échelle optimales pour la purification d’oligonucléotides. Le recours à des températures et à des pH élevés est une stratégie courante pour limiter les interactions secondaires lors de la séparation et de la purification des oligonucléotides. Or, la technologie de particules BEH tolère des conditions extrêmes comme un pH basique, une température élevée et la présence d’additifs généralement nécessaires pour analyser les oligonucléotides.

Testées par lots et certifiées par contrôle qualité, les colonnes préparatives XBridge OBD pour oligonucléotides fournissent une assurance supplémentaire pour la reproductibilité, facilitent le transfert de méthodes et répondent aux besoins émergents en purification pour les siRNA, OAS et réactifs oligonucléotidiques standard et chimiquement diversifiés. Chaque lot de sorbant Oligonucleotide BEH C18 est soumis à un contrôle qualité et sélectionné à l’aide de l’étalon MassPrep pour oligonucléotides de Waters et d’une évaluation rigoureuse de la résolution et de la traînée des pics obtenue à partir d’une séparation IP-RP à l’acétate de triéthylammonium. Ces phases rigoureusement contrôlées sont disponibles dans des granulométries de 2,5 et 5 µm et dans des tailles de pores de 130 et 300 Å. Les spécialistes disposent ainsi d’un large éventail d’options polyvalentes pour purifier divers produits de synthèse.

Excellente durée de vie des colonnes

Excellente durée de vie des colonnes

Garnies de particules de silice hybride C18 BEH (particules hybrides à ponts éthane) de Waters, les colonnes préparatives XBridge et XBridge Premier Oligonucleotide OBD font preuve d’une longévité remarquable dans des conditions de pH et de température élevés, tout en conservant une performance chromatographique exceptionnelle. Bien entretenues, les colonnes Oligonucleotide BEH C18 peuvent dépasser les 1 000 injections sans perdre de leur efficacité ou de leur capacité de rétention. 

Une capacité de charge prévisible

Une capacité de charge prévisible

La capacité de charge dépend de nombreux critères lors de purifications préparatives. L’efficacité de la colonne, la taille des pores, la granulométrie et les paramètres de la méthode sont autant de facteurs déterminants. Les colonnes à pores plus larges favorisent le transfert de masse et permettent d’obtenir des pics plus fins pour les analytes les plus gros. Toutefois, en raison de leur surface réduite, elles peuvent présenter une capacité de charge plus faible. Les colonnes préparatives XBridge Oligonucleotide OBD de Waters sont disponibles en différentes tailles de pores et dans une large gamme de diamètres internes permettant une transposition d’échelle prévisible et une meilleure capacité de charge.

Des fractions d’une grande pureté avec des rendements plus élevés

Des fractions d’une grande pureté avec des rendements plus élevés

La pureté et la qualité de l’isolement des oligonucléotides sont essentielles pour minimiser les problèmes de sécurité et d’efficacité liés aux impuretés non désirées dans les études toxicologiques. Hautement efficaces, les colonnes préparatives XBridge Oligonucleotide OBD 2,5 µm permettent de séparer plus facilement les impuretés précoces et coéluées tout en conservant le profil chromatographique et un rendement élevé.

« Les colonnes OBD XBridge Oligonucleotide BEH 300 Å C18 5 µm de Waters se sont montrées particulièrement efficaces pour éliminer les impuretés à élution précoce. »

— Amy Howie, directrice de la qualité des produits et de l’approvisionnement, Oligo Factory, Inc.

— Amy Howie, directrice de la qualité des produits et de l’approvisionnement, Oligo Factory, Inc.

Oligo Factory est un CMO majeur spécialisé dans les oligonucléotides personnalisés pour les travaux de découverte en phase avancée, les études cliniques, le diagnostic et la recherche. Sa mission est de fournir des oligonucléotides de haute qualité et rentables, tout en offrant un service flexible et sur mesure à chacun de ses clients. Elle collabore avec Waters Corporation pour optimiser la purification des molécules d’ARNsg essentielles à la recherche et à l’utilisation clinique de l’édition de gènes CRISPR. 

Spirale de molécules d’ADN

Solutions

Stabilité des particules grâce à la protection MaxPeak HPS

Stabilité des particules grâce à la protection MaxPeak HPS
Colonnes préparatives XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 OBD 130 Å et 300 Å, 5 µm

Les groupes phosphodiester des oligonucléotides peuvent adsorber les métaux utilisés dans la fabrication des colonnes classiques. L’utilisation de matériaux à faible adsorption peut améliorer la finesse des pics en minimisant la chélation, ce qui conduit à une rétention plus fiable et à des paramètres chromatographiques plus cohérents. L’intérieur des colonnes préparatives XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 OBD 130 Å et 300 Å 5 µm est recouvert d’un revêtement MaxPeak HPS déposé en phase vapeur pour améliorer la finesse des pics et le rendement. Elles sont disponibles avec un diamètre interne de 10 mm et des longueurs de 50, 100 et 150 mm.

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Performances et stabilité des particules pour le développement de méthodes

Performances et stabilité des particules pour le développement de méthodes
Colonnes préparatives XBridge Oligonucleotide BEH C18 OBD

Testées par lots et certifiées par contrôle qualité, les colonnes préparatives XBridge Oligonucleotide OBD sont disponibles dans une large gamme de diamètres et de longueurs, offrant des options de purification en laboratoire à la fois prévisibles et flexibles pour une transposition d’échelle directe. Les formats suivants sont disponibles :

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Formulations d’oligonucléotides et d’acides nucléiques de haute pureté pour mesurer les performances.

Formulations d’oligonucléotides et d’acides nucléiques de haute pureté pour mesurer les performances.

Étalons d’oligonucléotides/d’acides nucléiques pour mesurer les performances

Étalons d’oligonucléotides/d’acides nucléiques pour mesurer les performances
Étalons d’oligonucléotides et d’acides nucléiques

Waters propose une gamme d’étalons analytiques de haute qualité, traçables par lots, qui viennent compléter ses colonnes de phase inverse pour oligonucléotides afin de faciliter les tests d’aptitude du système, le développement de méthodes et le dépannage. Cette gamme comprend l’étalon d’oligonucléotides MassPREP de Waters, qui contient une échelle d’oligodT de 15 à 35-mères permettant de procéder au contrôle qualité de toutes les colonnes Waters pour oligonucléotides, un étalon d’ADNsb de 20-mères pour l’analyse comparative de la fragmentation LC-MS/MS et l’analyse de séquences, un oligonucléotide antisens (OAS) fortement modifié et conjugué à un lipide, des échelles d’ADNsb et d’ADNdb, et bien plus encore.

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Protéger et prolonger la durée de vie des colonnes analytiques.

Protéger et prolonger la durée de vie des colonnes analytiques.

Colonne de garde préparative pour une durée de vie allongée

Colonne de garde préparative pour une durée de vie allongée
Colonne de garde préparative XBridge Oligonucleotide BEH C18

Les colonnes préparatives XBridge Oligonucleotide BEH C18 OBD sont disponibles avec des colonnes de garde. Contenant le même sorbant, les cartouches de protection peuvent être utilisées pour empêcher la contamination et l’encrassement des colonnes préparatives afin d’en prolonger la durée de vie. Placer ce bloc de garde avant la colonne de préparation allongera la durée de vie de la colonne et réduira les coûts de purification.

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Applications

Les groupes phosphodiester des oligonucléotides peuvent adsorber les métaux présents dans le corps de la colonne et les frittés. Caractérisé par une adsorption faible, le matériau MaxPeak High Performance Surface peut améliorer la finesse des pics en minimisant la chélation, ce qui conduit à une rétention plus fiable et à des paramètres chromatographiques plus cohérents. L’intérieur des colonnes préparatives XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 OBD est recouvert d’un revêtement MaxPeak HPS déposé en phase vapeur pour améliorer la finesse des pics et le rendement.

Les groupes phosphodiester des oligonucléotides peuvent adsorber les métaux présents dans le corps de la colonne et les frittés. Caractérisé par une adsorption faible, le matériau MaxPeak High Performance Surface peut améliorer la finesse des pics en minimisant la chélation, ce qui conduit à une rétention plus fiable et à des paramètres chromatographiques plus cohérents. L’intérieur des colonnes préparatives XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 OBD est recouvert d’un revêtement MaxPeak HPS déposé en phase vapeur pour améliorer la finesse des pics et le rendement.

Notes d’application

Notes d’application

Une des difficultés de la purification des oligonucléotides en laboratoire réside dans l’isolement des impuretés qui peuvent être proches des molécules cibles. Pour les purifications en laboratoire, on évite généralement les granulométries faibles en raison de la pression élevée qu’elles peuvent engendrer. Testées par lots, les colonnes préparatives XBridge Oligonucleotide BEH C18 OBD 2,5 µm de Waters assurent des performances exceptionnelles pour l’isolation à basse pression de l’ARNsg, du siRNA et des oligoconjugués CRISPR complexes. Les paramètres de purification optimisés avec un gradient ciblé et une phase mobile sans HFIP permettent une purification très efficace, à haut débit, sans risque et rentable.

Une des difficultés de la purification des oligonucléotides en laboratoire réside dans l’isolement des impuretés qui peuvent être proches des molécules cibles. Pour les purifications en laboratoire, on évite généralement les granulométries faibles en raison de la pression élevée qu’elles peuvent engendrer. Testées par lots, les colonnes préparatives XBridge Oligonucleotide BEH C18 OBD 2,5 µm de Waters assurent des performances exceptionnelles pour l’isolation à basse pression de l’ARNsg, du siRNA et des oligoconjugués CRISPR complexes. Les paramètres de purification optimisés avec un gradient ciblé et une phase mobile sans HFIP permettent une purification très efficace, à haut débit, sans risque et rentable.

Notes d’application

Notes d’application

La technologie CRISPR joue un rôle essentiel dans l’édition de gènes. Cette technologie se basant sur un ARN simple guide (ARNsg), la pureté de cette molécule est essentielle pour renforcer l’exactitude et la précision des traitements. Les colonnes HPLC traditionnelles de 8 à 20 µm disponibles sur le marché ne permettent pas de répondre aux besoins d’innocuité et d’exactitude, car elles ne disposent pas du pouvoir de résolution nécessaire pour isoler les impuretés des séquences cibles. 

Testées par lots, les nouvelles colonnes XBridge Oligonucleotide BEH C18, 300 Å, 5 µm offrent de meilleures performances de séparation et un mécanisme de rétention plus efficace pour les acides nucléiques de plus grande taille, tels que l’ARNsg et les applications apparentées. La granulométrie réduite et la taille optimisée des pores à 300 Å permettent d’atteindre des niveaux de pureté inédits en un seul passage, ce qui est indispensable pour les applications CRISPR de haute précision.

La technologie CRISPR joue un rôle essentiel dans l’édition de gènes. Cette technologie se basant sur un ARN simple guide (ARNsg), la pureté de cette molécule est essentielle pour renforcer l’exactitude et la précision des traitements. Les colonnes HPLC traditionnelles de 8 à 20 µm disponibles sur le marché ne permettent pas de répondre aux besoins d’innocuité et d’exactitude, car elles ne disposent pas du pouvoir de résolution nécessaire pour isoler les impuretés des séquences cibles. 

Testées par lots, les nouvelles colonnes XBridge Oligonucleotide BEH C18, 300 Å, 5 µm offrent de meilleures performances de séparation et un mécanisme de rétention plus efficace pour les acides nucléiques de plus grande taille, tels que l’ARNsg et les applications apparentées. La granulométrie réduite et la taille optimisée des pores à 300 Å permettent d’atteindre des niveaux de pureté inédits en un seul passage, ce qui est indispensable pour les applications CRISPR de haute précision.

Notes d’application

Notes d’application

Les données parlent d’elles-mêmes

Les données parlent d’elles-mêmes
Détermination de la pureté des fractions pour une purification de 25 mg à l’aide d’une nouvelle colonne préparative XBridge Oligonucleotide BEH C18 OBD, 130 Å, 2,5 µm.
(A) Comparaison des chromatogrammes obtenus pour le phosphate d’hydrocortisone à l’aide de colonnes ACQUITY UPLC BEH C18, 130 Å, 1,7 µm, 2,1 x 50 mm, MaxPeak Premier (en noir) et classique (en gris). La charge massique était de 2 ng. Les séparations en gradient d’acétonitrile ont été réalisées avec une phase mobile aqueuse de formiate d’ammonium 10 mM (pH 3,0), un débit de 0,5 mL/min et une température de 30 °C. Les pics ont été détectés à l’aide d’un détecteur PDA, le canal 246 nm étant affiché. (B) Tracé logarithmique de la surface des pics en fonction de la charge massique pour le phosphate d’hydrocortisone séparé à l’aide d’une colonne MaxPeak Premier (en noir) et d’une colonne standard (en gris), avec une charge massique comprise entre 2 et 200 ng.

Ressources

  • Livre blanc

Colonnes HPLC à faible adsorption dotées de la technologie MaxPeak HPS

Colonnes HPLC à faible adsorption dotées de la technologie MaxPeak HPS
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