Pour garantir la fonctionnalité, la sécurité et l’efficacité des oligonucléotides dans les applications pharmaceutiques et diagnostiques, il est essentiel de les purifier complètement des impuretés produites au cours de la synthèse. En raison de leur nature polyanionique, il est difficile d’isoler les oligonucléotides avec une sélectivité et une résolution élevées. Dans ce domaine, la chromatographie en phase inverse avec appariement d’ions (IP-RP) s’est imposée comme la technique privilégiée.
Les colonnes testées par lot et offrant une grande stabilité vis-à-vis du pH et de la température ainsi que des niveaux contrôlés d’interactions secondaires permettent d’éliminer rapidement les goulots d’étranglement et de gagner un temps précieux. Les colonnes XBridge Oligonucleotide BEH C18 Optimal Bed Density (OBD) de Waters constituent les colonnes préparatives idéales, car elles offrent des performances assurées, permettent une transposition d’échelle cohérente et assurent une purification à haut rendement de divers oligonucléotides ayant subi des modifications chimiques complexes.
Pour les colonnes préparatives ayant un rapport longueur/diamètre plus faible, le remplissage de la suspension à haute pression avec de petites particules ne permet souvent pas d’obtenir la densité de lit recherchée sur une colonne analytique de qualité. Une compression axiale excessive à l’entrée peut entraîner une dégradation des particules, la formation de canaux et une réduction de la perméabilité du lit. Grâce à leur conception novatrice, les colonnes OBD présentent des atouts indéniables, notamment une durée de vie plus longue, une efficacité accrue, une meilleure forme des pics et une contre-pression plus faible.
Comme tous les acides nucléiques, les oligonucléotides sont polyanioniques (chargés négativement) et s’adsorbent donc facilement sur la surface d’oxyde métallique des colonnes en acier inoxydable. Les colonnes XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 OBD de Waters sont fabriquées à partir de composants traités pour présenter une chimie de surface inerte hybride organique/inorganique à base de silice qui réduit considérablement l’adsorption non spécifique (ANS) des acides nucléiques. Elles offrent ainsi un rendement accru et une meilleure reproductibilité pour certains composés qui doivent être isolés d’une substance médicamenteuse en vue d’une étude plus approfondie. Les colonnes XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 OBD ne nécessitent ni passivation ni conditionnement des échantillons. Vous pouvez ainsi entreprendre vos collectes de fractions sans délai.
La technologie de particules hybrides à ponts éthane (BEH) certifiée par lots de Waters garantit des performances, une reproductibilité et une mise à l’échelle optimales pour la purification d’oligonucléotides. Le recours à des températures et à des pH élevés est une stratégie courante pour limiter les interactions secondaires lors de la séparation et de la purification des oligonucléotides. Or, la technologie de particules BEH tolère des conditions extrêmes comme un pH basique, une température élevée et la présence d’additifs généralement nécessaires pour analyser les oligonucléotides.
Testées par lots et certifiées par contrôle qualité, les colonnes préparatives XBridge OBD pour oligonucléotides fournissent une assurance supplémentaire pour la reproductibilité, facilitent le transfert de méthodes et répondent aux besoins émergents en purification pour les siRNA, OAS et réactifs oligonucléotidiques standard et chimiquement diversifiés. Chaque lot de sorbant Oligonucleotide BEH C18 est soumis à un contrôle qualité et sélectionné à l’aide de l’étalon MassPrep pour oligonucléotides de Waters et d’une évaluation rigoureuse de la résolution et de la traînée des pics obtenue à partir d’une séparation IP-RP à l’acétate de triéthylammonium. Ces phases rigoureusement contrôlées sont disponibles dans des granulométries de 2,5 et 5 µm et dans des tailles de pores de 130 et 300 Å. Les spécialistes disposent ainsi d’un large éventail d’options polyvalentes pour purifier divers produits de synthèse.
Garnies de particules de silice hybride C18 BEH (particules hybrides à ponts éthane) de Waters, les colonnes préparatives XBridge et XBridge Premier Oligonucleotide OBD font preuve d’une longévité remarquable dans des conditions de pH et de température élevés, tout en conservant une performance chromatographique exceptionnelle. Bien entretenues, les colonnes Oligonucleotide BEH C18 peuvent dépasser les 1 000 injections sans perdre de leur efficacité ou de leur capacité de rétention.
La capacité de charge dépend de nombreux critères lors de purifications préparatives. L’efficacité de la colonne, la taille des pores, la granulométrie et les paramètres de la méthode sont autant de facteurs déterminants. Les colonnes à pores plus larges favorisent le transfert de masse et permettent d’obtenir des pics plus fins pour les analytes les plus gros. Toutefois, en raison de leur surface réduite, elles peuvent présenter une capacité de charge plus faible. Les colonnes préparatives XBridge Oligonucleotide OBD de Waters sont disponibles en différentes tailles de pores et dans une large gamme de diamètres internes permettant une transposition d’échelle prévisible et une meilleure capacité de charge.
La pureté et la qualité de l’isolement des oligonucléotides sont essentielles pour minimiser les problèmes de sécurité et d’efficacité liés aux impuretés non désirées dans les études toxicologiques. Hautement efficaces, les colonnes préparatives XBridge Oligonucleotide OBD 2,5 µm permettent de séparer plus facilement les impuretés précoces et coéluées tout en conservant le profil chromatographique et un rendement élevé.
Les groupes phosphodiester des oligonucléotides peuvent adsorber les métaux utilisés dans la fabrication des colonnes classiques. L’utilisation de matériaux à faible adsorption peut améliorer la finesse des pics en minimisant la chélation, ce qui conduit à une rétention plus fiable et à des paramètres chromatographiques plus cohérents. L’intérieur des colonnes préparatives XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 OBD 130 Å et 300 Å 5 µm est recouvert d’un revêtement MaxPeak HPS déposé en phase vapeur pour améliorer la finesse des pics et le rendement. Elles sont disponibles avec un diamètre interne de 10 mm et des longueurs de 50, 100 et 150 mm.
Testées par lots et certifiées par contrôle qualité, les colonnes préparatives XBridge Oligonucleotide OBD sont disponibles dans une large gamme de diamètres et de longueurs, offrant des options de purification en laboratoire à la fois prévisibles et flexibles pour une transposition d’échelle directe. Les formats suivants sont disponibles :
Colonnes préparatives XBridge Oligonucleotide OBD 130 et 300 Å, 5 µm, indispensables pour le développement de méthodes HPLC, disponibles avec des options de pores standard et larges, en acier inoxydable et avec technologie MaxPeak, testées par lot d’oligonucléotides et certifiées par contrôle qualité.
Colonnes préparatives XBridge Oligonucleotide OBD 130 Å, 2,5 µm, offrant une résolution exceptionnelle et une durée de vie supérieure.
Colonnes préparatives XBridge Oligonucleotide BEH C18 OBD 300 Å, 2,5 µm, avec possibilité de personnalisation en option pour la purification d’oligonucléotides plus gros. Veuillez contact un bureau de vente pour demander un devis personnalisé
Détermination de la pureté des fractions pour une purification de 25 mg à l’aide d’une nouvelle colonne préparative XBridge Oligonucleotide BEH C18 OBD, 130 Å, 2,5 µm.
(A) Comparaison des chromatogrammes obtenus pour le phosphate d’hydrocortisone à l’aide de colonnes ACQUITY UPLC BEH C18, 130 Å, 1,7 µm, 2,1 x 50 mm, MaxPeak Premier (en noir) et classique (en gris). La charge massique était de 2 ng. Les séparations en gradient d’acétonitrile ont été réalisées avec une phase mobile aqueuse de formiate d’ammonium 10 mM (pH 3,0), un débit de 0,5 mL/min et une température de 30 °C. Les pics ont été détectés à l’aide d’un détecteur PDA, le canal 246 nm étant affiché. (B) Tracé logarithmique de la surface des pics en fonction de la charge massique pour le phosphate d’hydrocortisone séparé à l’aide d’une colonne MaxPeak Premier (en noir) et d’une colonne standard (en gris), avec une charge massique comprise entre 2 et 200 ng.
