Bio-Konjugat-Säulen und Kits

Bio-Konjugat-Säulen und Kits

Verlassen Sie sich auf Waters als Ihre Lösung aus einer Hand für Säulen und Kits für Bio-Konjugat und Antikörper-Wirkstoff-Konjugat (ADC) bei der Entdeckung, Entwicklung und Herstellung von Applikationen.

Verlassen Sie sich auf Waters als Ihre Lösung aus einer Hand für Säulen und Kits für Bio-Konjugat und Antikörper-Wirkstoff-Konjugat (ADC) bei der Entdeckung, Entwicklung und Herstellung von Applikationen.

BioResolve Säulen für die Analyse, Charakterisierung, Überwachung intakter Proteine und die Qualitätskontrolle von Ladungsvarianten von mAbs und ADCs
BioResolve Säulen für die Analyse, Charakterisierung, Überwachung intakter Proteine und die Qualitätskontrolle von Ladungsvarianten von mAbs und ADCs

Überblick

Da biopharmazeutische Unternehmen den Einsatz von Bio-Konjugaten und ADC als eine Art von Krebstherapie erproben, stellt die Analyse ihrer komplexen, unterschiedlichen Strukturen eine große Herausforderungen dar. Waters bietet Lösungen für diese speziellen analytischen Herausforderungen, indem es die Bewertung vieler wichtiger kritischer Qualitätsattribute (CQAs) erleichtert, einschließlich der Bestimmung von Wirkstoff-Antikörper-Verhältnissen (DAR) selbst bei niedrigen Mengen, unter anderem mithilfe von Umkehrphasen- (RP) oder hydrophober Interaktionschromatographie-Säulen (HIC), Aggregation und Fragmentierung mithilfe von Größenausschlusschromatographie-Säulen (SEC) und Konjugationsstellen mit PeptideWorks Kits für den Trypsinverdau für das Peptid-Mapping.

Unser umfassendes Säulenangebot umfasst:

  • Umkehrphasen-Säulen
  • HIC-Säulen
  • SEC-Säulen
  • Ionenaustauschsäulen
  • Glykoprotein-Säulen

Ganz gleich, ob Sie lysin-konjugierte ADCs analysieren und sekundäre Wechselwirkungen zwischen ADCs und Säulenhardware minimieren möchten oder andere Probleme mit der Datenqualität lösen möchten – Waters hat die richtige Säulentechnologie zur konsistenten und zuverlässigen Durchführung Ihrer Trennung von Biomolekülen.



Reduzierung unerwünschter hydrophober Wechselwirkungen mit MaxPeak Premier High-Performance Surfaces (HPS)

Reduzierung unerwünschter hydrophober Wechselwirkungen mit MaxPeak Premier High-Performance Surfaces (HPS)

Mit den Waters MaxPeak Premier Säulen haben Wissenschaftler dank der Verwendung von MaxPeak High Performance Surfaces (HPS) Technologie eine bessere Kontrolle über ihre chromatographischen Trennungen. Wenn beispielsweise eine Trennung von Proteinen nach Größe in Lösung erfolgt, können sekundäre Wechselwirkungen auftreten, die Probenverlust, breitere Peaks und ungenaue Quantifizierung von Aggregaten verursachen. Die MaxPeak High Performance Surface Technologie wurde unter Verwendung von Ethylen Bridged Hybrid (BEH) SEC-Partikeln mit hydroxy-terminiertem Polyethylenoxid (PEO) mit hoher Abdeckung entwickelt. Diese sind für genauere Daten äußerst bioinert. Dadurch werden hydrophobe Wechselwirkungen minimiert, die sekundäre Wechselwirkungen verursachen, was eine herausragende Peakform und konsistente Quantifizierung liefert.

Erhalten Sie die erwartete chromatographische Leistung, Flexibilität und Sicherheit der bewährten Partikeltechnologie von Waters mit Säulen, die in Partikelgrößen von 1,7 µm (ACQUITY Premier Säulen), 2,5 µm (XBridge Premier Säulen, XSelect Premier Säulen) und ≤ 3 µm (ausgewählten BioResolve Premier Säulen) erhältlich sind.

Lösungen


Umkehrphasen-Säulen für DAR-Bestimmung und Wirkstoffverteilung

Umkehrphasen-Säulen für DAR-Bestimmung und Wirkstoffverteilung

Umkehrphasen-Säulen für Bio-Konjugate und Antikörper-Wirkstoff-Konjugate mit MaxPeak HPS, wie die ACQUITY und XBridge Premier Protein BEH C4 Säulen, wurden speziell zur Minimierung sekundärer Wechselwirkungen zwischen ADCs und Säulenhardware entwickelt. Sie eignen sich für die Analyse von lysin-konjugierten ADCs. Im Gegensatz zu cystein-konjugierten ADC sind die Disulfidbrücken innerhalb der Ketten, die die Verknüpfungen zwischen den schweren und leichten Ketten des mAb für die lysin-konjugierten ADCs aufrechterhalten, intakt. Daher ist die Umkehrphasenchromatographie für die Analyse von lysin-konjugierten ADCs geeignet, wenn die Linker-Chemie bei einem sauren pH-Wert nicht instabil ist. Darüber hinaus bietet Waters Umkehrphasen-Säulen mit Solid Core Partikel-Technologie an, wie z. B. BioResolve RP mAb Polyphenyl für die Analyse auf Intaktheit und Untereinheiten, um die Lokalisierung verknüpfter Wirkstoffe auf Domänenebene zu bestimmen. 

  • Reversed-Phase Analysis

Hydrophobe Interaktionschromatographie (HIC) zur DAR-Bestimmung

Hydrophobe Interaktionschromatographie (HIC) zur DAR-Bestimmung

Waters Protein-Pak Hi Res HIC-Säulen mit nicht porösen Partikeln enthalten eine niedrige Dichte an Butyl-Liganden für eine hervorragende Auflösung in kürzerer Zeit im Vergleich zur Verwendung vieler traditioneller poröser HIC-Säulen. Dies gewährleistet eine konsistente Leistung von Charge zu Charge durch Qualitätskontrollprüfung mit definierten Proteinstandards.

  • HIC Analysis

Erzielen Sie eine konsistente Aggregationsgenauigkeit mit SEC-Säulen

Erzielen Sie eine konsistente Aggregationsgenauigkeit mit SEC-Säulen

Vermeiden Sie die Erstellung mehrerer mobiler SEC-Eluentenphasen mit verschiedenen Proteinen, indem Sie eine Plattformmethode mit phosphatgepufferter Salzlösung (d. h. PBS) für durchweg genaue Aggregat-, Monomer- und Fragmentdaten mit Waters SEC-Säulen verwenden. Darüber hinaus ist für Bio-Konjugate, die hydrophob sein können, was zu unerwünschten sekundären Wechselwirkungen führt, bei den MaxPeak Premier Protein SEC-Säulen und den PEO-gebundenen BEH-Partikeln kein organisches Lösungsmittel erforderlich.

  • SEC Analysis

Charakterisieren und Überwachen von Ladungsvarianten mit der Kationenaustauschchromatographie

Charakterisieren und Überwachen von Ladungsvarianten mit der Kationenaustauschchromatographie

Messen Sie Profile von Ladungsvarianten von cystein- und lysin-gebundenen ADCs mit der BioResolve SCX mAb Säule und den BioResolve CX pH-Pufferkonzentraten für Salz- oder pH-Gradienten mit minimalen sekundären Wechselwirkungen bei der optischen Detektion. Für strukturelle Erkenntnisse mit Massenspektrometrie beim Ionenaustausch machen unsere MS-kompatiblen Puffer, IonHance CX-MS pH-Pufferkonzentrate, die Online-IEX-MS mit hochreinen, flüchtigen, für die Massenspektrometrie geeigneten Puffern möglich.

  • Charged Variant Analysis
  • Cation-Exchange Chromatography

Messen Sie die Oligonukleotid-Konjugation mit Anionenaustausch-Säulen

Messen Sie die Oligonukleotid-Konjugation mit Anionenaustausch-Säulen

Antikörper-Oligonukleotid-Konjugate (AOCs) werden häufig in der Proteindiagnostik eingesetzt und sind ein erfolgsversprechendes Thema für die gezielte Zelltherapie. Die negative Nettoladung eines AOC dehnt sich mit jeder zusätzlichen Konjugationsstelle aus, was zu einer erhöhten Retention auf einem Anionenaustauscherharz führt. Die GenPak FAX Säule enthält einen schwachen Anionenaustauscher, der eine kontrollierte Retention und eine einzigartige Selektivität für Protein und Oligonukleotidproben aufweist. Neue Applikationsarbeiten zeigen, dass AEX mit MALS gekoppelt werden kann, um absolute Molekulargewichtsinformationen zu erzeugen.

  • AEX OIigonucleotide Conjugate Analysis

Lokalisieren Sie Glykane präzise innerhalb einer Proteinstruktur mit Glykoprotein-Säulen

Lokalisieren Sie Glykane präzise innerhalb einer Proteinstruktur mit Glykoprotein-Säulen

Hydrophile Interaktionschromatographie (HILIC) wurde häufig zur Trennung kleiner polarer Verbindungen genutzt, aber ihre Applikation auf große Biomoleküle war, abgesehen von freigesetzten Glykanen, überraschend begrenzt. Mit Waters weitporigen Glykoprotein-Säulen ist es jetzt möglich, mit HILIC bisher unerreichbare Informationen aus intakten Proteinen (mit oder ohne Glykosylierung), Proteinfragmenten und komplexen, freigesetzten Glykanen zu erhalten.

  • Hydrophillic Interaction Chromatography (HILIC)
  • Released Glycans

Schneller, automatisierbarer und robuster Workflow für den Proteinverdau

Schneller, automatisierbarer und robuster Workflow für den Proteinverdau

Mit den Waters PeptideWorks Kits für den Trypsinverdau für manuelle oder automatische Workflows kann Ihr Labor auf einzigartige Weise ein hocheffizientes, reproduzierbares Peptid-Mapping in weniger als 2,5 Stunden erreichen – 4-mal schneller als durchschnittliche selbst entwickelte Methoden. Führen Sie 30-Minuten-Verdaus mit einem Enzym-Peptid-Verhältnis von 1:5, einer 78%igen Reduktion fehlender Spaltungen und einer 98%igen Reduktion verunreinigter Autolysepeaks durch. PeptideWorks ist ideal für die Bestimmung der Konjugationsstelle von Wirkstoffen, die Charakterisierung der Proteinstruktur, die Identifizierung von Proteinen und die Überwachung der Proteinmodifizierung, einschließlich posttranslationale Modifikationen.

  • Peptides
  • Peptide Mapping
  • Protein Digestion

Die Glykananalyse ist jetzt noch einfacher und empfindlicher

Die Glykananalyse ist jetzt noch einfacher und empfindlicher

Stellen Sie sich eine optimierte, schnelle und hochempfindliche Methode zur Profilierung von N-Glykanen auf ADCs mit dem GlycoWorks Kit vor. Erzielen Sie eine beispiellose Fluoreszenz- und massenspektrometrische Leistung bei der Analyse von N-Glykanen und maximieren Sie gleichzeitig die Produktivität mit einer Lösung, die mit dem Waters Andrew+ Pipettierroboter automatisierbar ist. In nur 3 simplen Schritten und lediglich 30 Minuten vereinfacht das GlycoWorks RapiFluor-MS N-Glykan Kit die komplizierte und zeitaufwendige Probenvorbereitung.

  • n-glycan analysis
  • glycosylation

Vereinfachen Sie die Proteinquantifizierung

Vereinfachen Sie die Proteinquantifizierung

Vereinfachen und beschleunigen Sie den Proteinverdau mit den ProteinWorks eXpress Digest Kits. Vorab gemessene, chargenrückverfolgbar Reagenzien und standardisierte Protokolle für die genaue, präzise und empfindliche LC-MS-Quantifizierung von Proteinen, einschließlich ADCs, in Plasma und Serum. Erzielen Sie eine unübertroffene Leistung und Flexibilität bei einem reproduzierbaren Proteinverdau mit Kits, die für verschiedene Workflows optimiert sind, einschließlich Protein-Bioanalyse/DMPK.

  • Proteins
  • Protein bioanalysis

Reduzieren Sie die Kosten für SEC-Analysen ohne Kompromisse

Reduzieren Sie die Kosten für SEC-Analysen ohne Kompromisse

Durch die Verwendung der verfügbaren und günstigen MaxPeak Premier Protein SEC 250 Å Vorsäulen kann die Lebensdauer Ihrer analytischen SEC-Säule verlängert werden, ohne die gewünschte Auflösung der getrennten Komponenten zu beeinträchtigen oder die Trennungen erforderlicher Größenvarianten zu beeinträchtigen.  

  • SEC Columns
  • Proteins

Applikationen

Optimieren Sie die Datenaufnahme, Verarbeitung und Reporterstellung für die ADC-Analyse durch LC-UV oder LC-MS. Erhalten Sie mehr Informationen mit diesen Applikationshinweisen

Optimieren Sie die Datenaufnahme, Verarbeitung und Reporterstellung für die ADC-Analyse durch LC-UV oder LC-MS. Erhalten Sie mehr Informationen mit diesen Applikationshinweisen


Eine zuverlässige, reproduzierbare Bestimmung des DAR basierend auf der Verteilung der Wirkstofflast auf cystein-konjugierten ADCs über die Peakflächen wird mit der Protein-Pak Hi Res hydrophoben Interaktionschromatographie-Säule (HIC) mittels optischer Detektion konsistent erreicht. Erhalten Sie mehr Informationen mit diesen Applikationshinweisen.

Eine zuverlässige, reproduzierbare Bestimmung des DAR basierend auf der Verteilung der Wirkstofflast auf cystein-konjugierten ADCs über die Peakflächen wird mit der Protein-Pak Hi Res hydrophoben Interaktionschromatographie-Säule (HIC) mittels optischer Detektion konsistent erreicht. Erhalten Sie mehr Informationen mit diesen Applikationshinweisen.


Die Größenausschlusschromatographie (SEC) bestimmt Peptid- und Proteinaggregate, Monomere und Fragmente in der Forschung, Entwicklung und Herstellung von ADCs mit Molekulargewichten von 100.000 bis 650.000 Dalton. Sorgen Sie mit unseren BEH-basierten SEC-Säulen für eine hohe Produktivität bei der ADC-Charakterisierung. Die Qualität wird mit MassPrep Peptid- und Proteinstandards kontrolliert, um eine konsistente Trennung im gesamten SEC-MS-Workflow zu gewährleisten. Erhalten Sie mehr Informationen mit diesen Applikationshinweisen.

Die Größenausschlusschromatographie (SEC) bestimmt Peptid- und Proteinaggregate, Monomere und Fragmente in der Forschung, Entwicklung und Herstellung von ADCs mit Molekulargewichten von 100.000 bis 650.000 Dalton. Sorgen Sie mit unseren BEH-basierten SEC-Säulen für eine hohe Produktivität bei der ADC-Charakterisierung. Die Qualität wird mit MassPrep Peptid- und Proteinstandards kontrolliert, um eine konsistente Trennung im gesamten SEC-MS-Workflow zu gewährleisten. Erhalten Sie mehr Informationen mit diesen Applikationshinweisen.


Die Analyse von Ladungsvarianten von lysin- und cysteingebundenen ADCs mit Salz- und pH-Gradientenelutionsmechanismus ist routinemäßig mit Waters SCX Säulen möglich. Diese korrosionsbeständigen Säulen enthalten nicht poröse, Partikel auf Polymerbasis, die mit einem sorgfältig optimierten Mehrkomponenten-Netzwerk aus negativ geladenen Sulfonsäure-Liganden beschichtet sind – für reproduzierbare, hochauflösende, ladungsbasierte Trennungen von mAbs und anderen Proteinen in LC- und LC-MS-Applikationen. Erhalten Sie mehr Informationen mit diesen Applikationshinweisen.

Die Analyse von Ladungsvarianten von lysin- und cysteingebundenen ADCs mit Salz- und pH-Gradientenelutionsmechanismus ist routinemäßig mit Waters SCX Säulen möglich. Diese korrosionsbeständigen Säulen enthalten nicht poröse, Partikel auf Polymerbasis, die mit einem sorgfältig optimierten Mehrkomponenten-Netzwerk aus negativ geladenen Sulfonsäure-Liganden beschichtet sind – für reproduzierbare, hochauflösende, ladungsbasierte Trennungen von mAbs und anderen Proteinen in LC- und LC-MS-Applikationen. Erhalten Sie mehr Informationen mit diesen Applikationshinweisen.


Die Trennung von intakten Glykoproteinen, Glykoproteinfragmenten und Glykopeptiden kann eine Herausforderung sein. HILIC-Säulen können im Vergleich zu RPLC-Methoden bei Beibehaltung einer guten Trennung eine höhere Wiederfindung bei besonders schwierigen mAb- und ADC-Untereinheiten liefern. HILIC von mAb-Untereinheiten kann auch zur Beurteilung von N-Glykosylierungsprofilen verwendet werden. Bei den Waters HILIC-Säulen wird jede Charge des Glycoprotein BEH Amide 300 Å, 1,7 µm Materials mit dem Waters Glycoprotein Teststandard einer Prüfung auf Konsistenz von Charge zu Charge unterzogen. Erhalten Sie mehr Informationen mit diesen Applikationshinweisen.

Die Trennung von intakten Glykoproteinen, Glykoproteinfragmenten und Glykopeptiden kann eine Herausforderung sein. HILIC-Säulen können im Vergleich zu RPLC-Methoden bei Beibehaltung einer guten Trennung eine höhere Wiederfindung bei besonders schwierigen mAb- und ADC-Untereinheiten liefern. HILIC von mAb-Untereinheiten kann auch zur Beurteilung von N-Glykosylierungsprofilen verwendet werden. Bei den Waters HILIC-Säulen wird jede Charge des Glycoprotein BEH Amide 300 Å, 1,7 µm Materials mit dem Waters Glycoprotein Teststandard einer Prüfung auf Konsistenz von Charge zu Charge unterzogen. Erhalten Sie mehr Informationen mit diesen Applikationshinweisen.




Die Daten sprechen für sich

Die Daten sprechen für sich
Dekonvolierte intakte Massenspektren für cystein-konjugierte ADCs aus nativen SEC-LC-MS nach Deglykosylierung. Die Wirkstoffverteilung wurde für drei verschiedene cystein-konjugierte ADC-Proben mit zunehmender Wirkstofflast verglichen. 
Das Ladungsvariantenprofil eines eingestellten, cystein-gebundenen Antikörper-Wirkstoff-Konjugats von Pfizer wurde mit Ionenaustauschchromatographie erzielt. (A) UV-Chromatogramme, die mit einer Salz-Gradientenmethode von 20 mM MES (pH-Wert 5,4) und einer linearen Erhöhung der Natriumchlorid-Konzentration von 140–220 mM in 30 Minuten bei 0,80 mL/min mit einer BioResolve SCX mAb, 4,6 x 100 mm Säule erzielt wurden. UV-Chromatogramme, die mit pH-Gradientenmethoden mit einer BioResolve SCX mAb, 4,6 x 50 mm Säule mit BioResolve CX pH-Konzentraten und mobilen Phasen ohne (B), mit 5 % (C) oder mit 10 % Acetonitril (D) und einer linearen Steigerung des Prozentsatzes der mobilen Phase B von 0 auf 100 % in 30 Minuten bei 1,00 mL/min erzielt wurden. (E) Überlagerung von UV-Chromatogrammen, die mit pH-Gradientenmethoden mit einer BioResolve SCX mAb Säule mit 4,6 x 50 mm unter Verwendung von BioResolve CX pH-Konzentraten und mobilen Phasen ohne, mit 5 % und mit 10 % Acetonitril erzielt wurde. Die UV-Detektion erfolgte bei 280 nm.
Hydrophile Interaktionschromatographie eines mAb im Vergleich zu seinem ADC. Die Zahlen geben an, wie viele Linker/Nutzlasten im Konjugat vorhanden sind, wobei a und b Stellungsisomere angeben. *Bezeichnet Linker-/Nutzlast-Hydrolyseprodukte. #Bezeichnet eine Spurenoxidation. Die Glykosylierung wird entsprechend der Cambridge-Nomenklatur gekennzeichnet. F steht für Fucose, A2 stellt dar, dass die Strukturen zwei Antennen haben, und G steht für Galactose (FA2 = G0F, FA2G1 = G1F und FA2G2 = G2F).
AEX-MALS einer AOC-Probe, erhalten mit einer Waters Gen-Pak FAX Säule. Es wird ein UV-280-nm-Chromatogramm mit überlagerter Molmasse angezeigt. Peakbegrenzungen werden durch die vertikalen gestrichelten Linien angezeigt.
Vergleich des Peptide-Mappings (UV-Chromatogramme) von konjugiertem und nicht konjugiertem Trastuzumab
Oben: Trypsinverdau mit biosimilarem Trastuzumab.
Unten: Trastuzumab Emtansin (Kadcyla), Trypsinverdau mit Antikörper-Wirkstoff-Konjugat.
Bei beiden Trypsinverdauungen wurden RapiZyme Trypsin und das PeptideWorks Kit für den Trypsinverdau mit einer Injektion von 100 µL (~ 10 µg) mit einer XSelect Premier Peptide CSH C18, 2,5 µm, 2,1 x 150 mm Säule verwendet. Zusätzliche Peaks wurden im Kadcyla Chromatogramm (unten) im Vergleich zu nicht konjugiertem Trastuzumab (oben) beobachtet. 
Vergleich der Leistung bei hydrophoben sekundären Wechselwirkungen mit dem ADC Ado-Trastuzumab Emtansin. Bei Erhöhung der organischen Konzentration ist der Grad der Veränderung bei der XBridge Premier Protein SEC 250 Å, 2,5 µm Säule wiederum vernachlässigbar, mit einer hervorragenden Peakform von 0 bis 15 % MeCN. Hydrophobe sekundäre Wechselwirkungen wurden durch die Verwendung von hydroxy-terminiertem PEO-Packungsmaterial mit hoher Abdeckung stark gemildert.
Cystein-konjugierte ADC-Analyse mithilfe von HIC. Die Wirkstoffverteilung wurde für drei verschiedene cystein-konjugierte ADC-Proben mit zunehmender Wirkstofflast bestimmt.

Webinare und Ressourcen



  • Artikelnachdruck

Hochempfindliches LC-MS-Profiling von Antikörper-Wirkstoff-Konjugaten mit Difluoressigsäure-Ionenpaarung

Hochempfindliches LC-MS-Profiling von Antikörper-Wirkstoff-Konjugaten mit Difluoressigsäure-Ionenpaarung
  • Poster

Verbesserte Profilierung von mAbs und ADCs auf Untereinheitsebene mit Difluoressigsäure in MS-Qualität

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Weitere Informationen über Bio-Konjugate und Antikörper-Wirkstoff-Konjugate(ADC)-Säulen.

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