Les thérapies géniques à base de vecteurs viraux sont des formulations de médicaments complexes, composées de protéines et d’acides nucléiques contenant plus de 200 000 atomes. Couplée à la détection optique (UV, MALS) et à la spectrométrie de masse (MS), la chromatographie liquide (LC) de Waters offre les moyens analytiques nécessaires pour caractériser et quantifier avec exactitude ces structures hétérogènes et leurs attributs, tant au niveau des composés qu’au niveau des produits intacts. Elle permet de réaliser diverses mesures en routine, notamment le titrage viral, l’analyse des agrégats/impuretés, les ratios de protéines virales, la carte peptidique et l’analyse des modifications, l’efficacité de l’encapsidation et l’intégrité du génome.
Webinaire : Colonnes SEC à faible adsorption et à faible granulométrie pour une caractérisation rapide et efficace des AAV par SEC-MALS
Les colonnes et les systèmes MaxPeak Premier éliminent le caractère imprévisible des pertes d’analytes en raison d’interactions métalliques, qui peuvent être particulièrement accentuées sur des molécules biologiques.
Réalisez des analyses biopharmaceutiques par LC/MS dans chaque laboratoire GxP avec le système LC/MS BioAccord de Waters, qui comprend un spectromètre de masse haute résolution et un logiciel waters_connect pour analyser des données et créer des rapports conformément aux exigences réglementaires.
Accélérez la caractérisation des vecteurs viraux avec le spectromètre de masse haute résolution Xevo G3 Q-Tof, un système de paillasse haute performance qui fournit des résultats qualitatifs et quantitatifs exacts.
Mesurez avec exactitude l’agrégation des vecteurs viraux, le titrage du génome et de la capside et le rapport capside vide/pleine avec les détecteurs MALS DAWN et ultraDAWN de Wyatt, avec détection UV et RI post-séparation LC ou FFF.
a) Superposition du spectre de masse de l’AAV8 avec un zoom sur la plage de masse de 2,5-6 MDa, avec les capsides entièrement vides et les capsides pleines traitées par incubation de 30 minutes à 4, 22, 35 et 50 °C. b) Spectre de charge de l’AAV8 avec un zoom sur la plage de masse de 2,5-6 MDa, avec les capsides entièrement vides et les capsides pleines traitées par incubation de 30 minutes à 4, 22, 35 et 50 °C.
Titrages de capsides pleines (bleu) et vides (rouge) déterminés par RT-MALS lors de l’élution (34 - 48 minutes) et de la désorption (> 48 minutes) dans le gradient linéaire final. La force ionique du tampon est représentée par la ligne noire en pointillés.
Vues agrandies d’un chromatogramme d’AAV2 obtenu avec une colonne en acier inoxydable (4,6 x 150 mm, granulométrie de 5 µm, tracé rouge) par rapport à une colonne HPS (XBridge Premier GTx BEH SEC 450 Å 2,5 µm 4,6 x 150 mm, tracé noir). Les séparations ont été effectuées avec une phase mobile contenant un tampon de force ionique standard (10 mM de phosphate à pH 7,4 + 200 mM de KCl).
La quantification relative des protéines VP a été mesurée par détection optique, notamment (A) par UV et (B) par fluorescence (FLR). L’annotation des pics indique la répartition et l’abondance relative calculée des composés détectés. La détection par FLR présente un rapport signal/bruit de VP3 presque cinq fois plus élevé que la détection par UV avec une charge massique 10 fois plus importante, ce qui suggère une sensibilité environ 50 fois plus élevée.
