纯化全长寡核苷酸产物以去除合成过程中产生的杂质,对于确保其在制药和诊断应用中的功能、安全性和有效性至关重要。由于寡核苷酸具有聚阴离子性质,导致纯化过程难以实现高选择性和高分离度。离子对反相色谱(IP-RP)已成为优先用于寡核苷酸分析的主流技术。
在高pH值/高温条件下保持稳定且经过批次测试、次级相互作用水平控制得当的色谱柱有助于快速突破耗时的分析瓶颈。Waters XBridge BEH C18最佳柱床密度(OBD)寡核苷酸分析专用柱是优选的制备型色谱柱,性能有保障,可提供一致的可扩展性,能够以高回收率纯化各种具有复杂化学修饰的寡核苷酸。
由于制备型色谱柱的长径比(aspect ratio)较小,采用高压浆料填装法填充小颗粒时,往往无法达到设计良好的分析型色谱柱中所期望的填料密度。进样口处轴向压力过大会导致颗粒破裂、通道效应和柱床渗透性降低。精心设计的OBD色谱柱具有显著优势,包括色谱柱使用寿命更长、柱效更高、峰形更好且柱压有所降低。
核酸(包括寡核苷酸)是聚阴离子分析物(带负电荷),因此容易吸附到不锈钢色谱柱中的金属氧化物表面。Waters XBridge Premier BEH C18 OBD寡核苷酸分析专用柱采用经过改良的硬件组件,以及惰性的有机/无机杂化硅胶基质表面填料,可大幅减少核酸的非特异性吸附(NSA),对于某些需要从原料药中分离出来以供进一步研究的化合物,有助于提高回收率和重现性。XBridge Premier BEH C18 OBD寡核苷酸分析专用柱还省去了色谱柱钝化/样品活化步骤,因此可以立即开始运行馏分收集工作。
沃特世的每一批亚乙基桥杂化(BEH)技术色谱柱均经过认证,可在寡核苷酸的纯化分析中展现出众的性能、重现性,并支持规模放大。在寡核苷酸的分离和纯化中,高温和高pH值是尽可能减少次级相互作用的常用策略。BEH颗粒技术可耐受寡核苷酸分析通常所需的严苛条件,例如高pH值、高温和高添加剂含量。
XBridge OBD制备型寡核苷酸分析专用柱经过批次检测和QC认证,为重现性、方法转移提供了额外保障,并支持标准和新型化学物质如siRNA、ASO和寡核苷酸药物的新兴纯化需求。每批BEH C18寡核苷酸吸附剂都使用Waters MassPrep寡核苷酸标准品进行了QC测试和筛选,并通过乙酸三乙铵IP -RP分离进行了严格的分离度和峰拖尾评估。 这些吸附剂经过仔细考察,提供2.5 µm和5 µm粒径以及130 Å和300 Å孔径规格,为寡核苷酸的分析人员提供了多种通用选择,使他们得以纯化各种合成产品。
XBridge和XBridge Premier OBD制备型寡核苷酸分析专用柱填充Waters BEH(亚乙基桥杂化)C18杂化硅胶颗粒,即使在高pH和高温条件下也具有很长的色谱柱使用寿命,同时保持出色的分离性能。只要仔细保养,BEH C18寡核苷酸分析专用柱可执行超过1,0000次进样,且柱效或保留性不受影响。
在制备型纯化中,载样量受到多个参数影响,柱效、孔径、粒径和方法参数都发挥了重要作用。色谱柱孔径越大,传质越顺畅,大分子分析物的峰形越清晰。但由于表面积减小,载样量可能会降低。Waters XBridge OBD制备型寡核苷酸分析专用柱有不同的孔径和内径供您选择,扩展性可预测,并且能够提供更高的载样量。
在毒理学研究中,高纯度、高品质的寡核苷酸纯化对于尽可能避免不良杂质带来的安全性和有效性问题至关重要。2.5 µm XBridge OBD制备型寡核苷酸分析专用柱具有高柱效,有助于分离早期洗脱和共洗脱杂质,同时能够保持色谱特征,并且无损高回收率。
沃特世提供一系列具有批次可溯源性的高质量分析标准品,与寡核苷酸反相色谱柱相辅相成,助力系统适应性测试、方法开发和故障诊断排除。包括:MassPREP寡核苷酸标准品(含15-35 mer oligodT ladder)— 用于QC验证所有沃特世寡核苷酸品牌色谱柱;20 mer ssDNA标准品 — 用于LC-MS/MS碎片分析和序列分析的性能基准测试;脂质偶联重链修饰的反义寡核苷酸(ASO);ssDNA;和dsDNA ladder等。
XBridge BEH C18 OBD制备型寡核苷酸分析专用柱带有保护柱。两种色谱柱的柱芯填充相同的吸附剂,可用于防止制备型色谱柱发生污染和结垢,从而延长色谱柱的使用寿命。将此保护组件放置在制备型色谱柱之前,可延长色谱柱的使用寿命并降低纯化成本。
CRISPR技术在基因编辑修饰中发挥着关键作用。这项技术利用了单向导RNA (sgRNA),因此,sgRNA的纯度对提高治疗的准确性和精确性具有重要意义。市面上传统的8 µm~20 µm HPLC色谱柱由于分离能力不足以从目标序列中分离出杂质,可能无法满足对药物安全性和准确性的要求。
全新的XBridge BEH C18, 300 Å, 5 µm寡核苷酸分析专用柱经过批次检测,可改善sgRNA等大分子核酸及相关应用的分离效率和保留机制。这款色谱柱采用更小的粒径和300 Å的优化孔径,可以在一次操作中达到更高的纯度,从而满足高精度CRISPR应用的要求。
CRISPR技术在基因编辑修饰中发挥着关键作用。这项技术利用了单向导RNA (sgRNA),因此,sgRNA的纯度对提高治疗的准确性和精确性具有重要意义。市面上传统的8 µm~20 µm HPLC色谱柱由于分离能力不足以从目标序列中分离出杂质,可能无法满足对药物安全性和准确性的要求。
全新的XBridge BEH C18, 300 Å, 5 µm寡核苷酸分析专用柱经过批次检测,可改善sgRNA等大分子核酸及相关应用的分离效率和保留机制。这款色谱柱采用更小的粒径和300 Å的优化孔径,可以在一次操作中达到更高的纯度,从而满足高精度CRISPR应用的要求。