在法医毒理学分析中使用Oasis PRiME MCX萃取全血中的合成芬太尼化合物并去除磷脂

本应用简报介绍了一种为法医毒理学分析开发的高效样品萃取方法，用于在去除磷脂残留的同时萃取出全血样品中的合成芬太尼类似物（用于UPLC-MS/MS分析）。

优势

从全血样品中快速、可重现地分离合成芬太尼化合物，同时尽可能地减少磷脂残留。

由于合成芬太尼类似物的滥用以及与之相关的用药过量和致死事件大幅攀升，过去几年来，法医毒理学领域分析血液中合成芬太尼类似物的需求显著增长¹。 这类分析面临的一个主要挑战是这类化合物在血液样品中的浓度通常很低。因此，稳定、可重现的样品制备方法对于达到所需的检测灵敏度至关重要。生物样品中能够影响检测灵敏度的组分之一是磷脂。相较于其他的离子交换吸附剂，使用传统的混合模式阳离子交换吸附剂时往往会残留大量磷脂。当分析含有多达45%的红细胞，且磷脂含量远高于血浆的全血样品时，磷脂残留对分析的影响尤其严重。

本文详细介绍了使用Oasis PRiME MCX μElution板从全血样品中萃取芬太尼类似物的方法，重点介绍了萃取效率、基质效应和磷脂去除率。此外，为了在固相萃取之前高效处理全血样品，本研究还优化了样品预处理方法。

将合成芬太尼化合物加入全血样品中。用硫酸锌/乙酸铵溶液(ZnSO₄/NH₄OAc)处理血液样品(100 μL)以裂解细胞，然后用50:50的乙腈:甲醇溶液进行沉淀。离心后，用4%磷酸(H₃PO₄)稀释上清液，然后用Oasis PRiME MCX μElution板进行萃取。然后，用含有5%氨水的50:50的乙腈:甲醇溶液洗脱样品。最后，使用ACQUITY™ UPLC I-Class/Xevo TQ-S micro系统分析萃取物。

图1所示为全血样品中合成芬太尼类似物的回收率。由图可见回收率在67%~91%范围内，平均值为86.4%。图中的值为三个不同浓度下（250、1000和10,000 pg/mL）得到的平均值。回收率结果一致，且所有%RSD均小于10%。我们还计算了基质效应，结果同样显示在图1中。所有基质效应均小于10%，且RSD小于5%，这表明不存在与该方法相关的离子抑制效应。未观察到与浓度相关的回收率或基质效应偏差。

磷脂去除率高是Oasis PRiME MCX的一大创新特性。图2比较了经蛋白沉淀法、Oasis MCX萃取和Oasis PRiME MCX萃取处理后的全血样品中残留的磷脂。色谱图及相关的图示表明，相较于蛋白沉淀法，Oasis PRiME MCX去除了99%以上的磷脂，而相较于Oasis MCX，Oasis PRiME MCX去除了97.4%的磷脂，也就是说，在已经净化过的样品的基础之上，进一步大幅提升了样品纯净度。

在进行法医毒理学UPLC-MS/MS分析之前，使用Oasis PRiME MCX µElution板从全血样品中成功萃取出了合成芬太尼化合物。该方法不仅可使所有分析物都达到较高且一致的回收率，基质效应可忽略不计，而且几乎去除了所有残留磷脂，该方法相较于蛋白沉淀法去除了99%以上的磷脂，相较于Oasis MCX去除了97%的磷脂。这意味着获得的萃取物更纯净，有助于延长色谱柱使用寿命，尽可能减少MS维护，还有望减少基质效应对该分析的影响。本研究选定的这组芬太尼类似物涵盖了很广的极性范围，因此该方法可根据需要应用于其他芬太尼类似物的分析。

1. Centers for Disease Control and Prevention.Annual Surveillance Report of Drug- Related Risks and Outcomes — United States, 2017.Surveillance Special Report 1.Centers for Disease Control and Prevention, U.S. Department of Health and Human Services.Published August 31, 2017.Accessed [date] from https://www.cdc.gov/drugoverdose/pdf/pubs/2017-cdc-drug-surveillance-report.pdf.