PEO/PEG的Arc HPLC水相SEC/GPC分离

本应用简报评估了Waters Arc HPLC系统执行聚环氧乙烷/聚乙二醇(PEO/PEG)凝胶渗透色谱（GPC，又称为体积排阻色谱(SEC)）分析的性能。 

优势

• Arc HPLC系统在Empower 3软件环境下运行，可提供精确的流速，从而在GPC分析中获得准确、可重现的峰
• Ultrahydrogel Linear色谱柱可对标称分子量为700 MDa的聚合物实现体积排阻分离

凝胶渗透色谱分析需要采用高效液相色谱(HPLC)系统来提供精确的流速和可重现的结果。GPC技术将根据保留时间与分子量的对数作图，因此，泵必须产生稳定一致的等度液流才能提供可重现的色谱峰¹。 测定未知样品分子量常用的方法是比较样品与窄分子量聚合物标准品的相对校准曲线²。

流速等众多Arc HPLC GPC方法参数见表1。本研究使用聚乙二醇和聚环氧乙烷标准品(PEG/PEO)绘制校准曲线（图1）。

如图2所示，通过PEO/PEG混合分子量标准品6次进样的重叠图证明Arc HPLC泵具有优异的流速精密度。在Waters Arc HPLC系统上使用两根线性GPC色谱柱和30 min运行时间获得的峰保留时间和峰分子量(Mp)相对标准偏差小于0.3%（表3和表4）。

Empower 3有很多内置功能，能够对通常在电子表格中完成的数据进行精确报告。常用的报告区域是色谱柱塔板数，其包含于系统适应性功能中。通过报告色谱柱塔板数，可绘制柱效图表并观察任何性能变化（表5）。 

搭载Empower 3软件的Arc HPLC是一款功能非常强大的GPC数据处理工具，适用于基础和复杂的色谱图绘制和计算。本实验展示了基础GPC计算。利用窄分布PEO/PEG标准品作为校准标准品，并作为本实验的宽分布未知样品。本研究所选方法和标准品对于碳水化合物等聚合物的水相GPC分析很常见³。选择Ultrahydrogel线性色谱柱分析标称分子量达700 MDa的宽分子量范围物质，并且利用两根相同的色谱柱提高聚合物峰的分离度⁴。Empower 3软件可报告峰结果字段的部分列表包括Mn、Mw、Mp、Mz、Mz+1和多分散性（表5）。提供采用点到点以及一阶至五阶拟合的相对和修改后普适校正类型，相对校准示例见图1。

等度模式下运行的Arc HPLC泵可提供高质量凝胶渗透色谱分析所需的优异流量精密度。

所有基本GPC计算都可以使用配备GPC选项的Empower 3软件完成，并且提供许多复杂的GPC计算。

使用两根线性色谱柱证明了分析时间可缩短至30 min。

1. Arc HPLC系统, https://www.waters.com/waters/en_US/Arc-HPLC-System/nav.htm?cid=135068659&locale=en_US.
2. GPC/SEC常见问题与解答, https://www.waters.com/waters/en_US/Frequently-Asked-GPC-SEC-Questions/nav.htm?cid=10167847&locale=en_US.
3. Yakindra Prasad Timilsena, Raju Adhikari, Stefan Kasapis, Benu Adhikari, Molecular and Functional Characteristics of Purified Gum From Australian Chia Seeds, Carbohydrate Polymers, Volume 136, 2016, Pages 128–136, ISSN 0144-8617, https://doi.org/10.1016/j.carbpol.2015.09.035.
4. Ultrahydrogel色谱柱.沃特世维护和使用手册, WAT011556, 修订版F, 2015年3月.
5. Empower GPC软件.沃特世入门指南, 71500031303ZH, 修订版A, 2004年5月.
6. 沃特世公司.Empower技巧.https://blog.waters.com/category/empower-tips.