ACQUITY™ RDa™检测器与RemoteAnalyzer®软件相结合在无人值守环境中简单、快速地提供精确质量数信息
摘要
本应用纪要介绍ACQUITY RDa检测器与基于浏览器的RemoteAnalyzer软件(SpectralWorks - Runcorn, UK)结合作为一个简单、直观平台的使用性能，使合成化学家能够在无人值守环境中测量精确质量数。
优势
- 让合成化学家能够常规测量精确质量数以对API（活性药物成分）和相关杂质进行质量数确认。
- RDa Tof（飞行时间）检测器的快速扫描速率能够实现快速UPLC™梯度，而不影响定性数据。
- 通过电子邮件快速获得结果，以便对反应结果做出方便、及时的决策。
- 灵活的RemoteAnalyzer软件可配置为根据角色需要获得特定的访问权限
简介
许多有机化学家以质谱仪(MS)作为验证产品以及合成反应中任何杂质的便捷工具。
单四极杆质谱仪只能提供名义质量数数据，这些数据虽然有用，但不能消除目标化合物、降解物、杂质或副反应产物错误分配的可能性。ToF高分辨率质谱仪(HRMS)可能需要高水平的专业知识才能操作，但它提供的精确质量数测量结果能够提高化合物表征的可信度。
ACQUITY RDa检测器采用简单的自动设置，旨在让更多的化学家更容易完成精确质量数测量。
RemoteAnalyzer软件采以直观的“点击”浏览器设计，进一步简化了单次分析和批量分析的样品提交操作。
为凸显该方法的优势，向雷米普利2-[N-[(S)-1-乙氧羰基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰基]-(1S, 3S, 5S)-2-氮杂双环[3.3.0]辛烷-3-甲酸（CAS号87333-19-5；一种血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂）中添加0.1% (w/w)的四种相关杂质：雷米普利异丙酯、雷米普利二酮哌嗪、雷米普利甲酯和六氢雷米普利（分别标记为A-D），并使用ACQUITY RDa进行分析。
(ACE)抑制剂是一类重要的高血压调节治疗药物。
雷米普利及其潜在有关杂质的化学结构见表1。
表1.雷米普利API和杂质A-D的结构、经验化学式和单同位素质量数
利用RemoteAnalyzer软件控制样品提交和处理过程，同时采用UNIFI进行数据采集，所采集的原始数据保持完整且独立于RemoteAnalyzer处理。
实验
样品描述
向雷米普利样品中添加浓度为0.1% w/w的四种相关杂质A-D。所有标准品均为欧洲药典标准品，均购自Merck（英国多塞特郡）。
用甲醇制备1 mg/mL雷米普利溶液以及杂质A-D的单独制剂（浓度为200 µg/mL）。将980 µL雷米普利溶液与5 µL各杂质溶液一起转移到样品瓶中，得到相对于API为0.1% (w/w)的杂质溶液。将100 µL该溶液转移到样品瓶中并用900 µL甲醇:水80:20稀释。
使用ACQUITY UPLC I-Class PLUS二元系统与运行时间为4 min的简单梯度进行分析。图1汇总了提交以杂质加标的雷米普利样品并通过RemoteAnalyzer浏览器进行分析的工作流。
图1.将样品提交至Remote Analyzer的工作流
液相色谱条件
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液相色谱系统： |
ACQUITY™ UPLC™ I-Class PLUS |
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样品瓶： |
TruView最大回收样品瓶(P/N:186005668CV) |
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色谱柱： |
ACQUITY™ UPLC™ BEH™ C18 50 × 2.1 mm,1.7 µm (P/N: 186002350) |
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柱温： |
80 °C |
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样品温度： |
10 °C |
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进样体积： |
1 µL |
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流速： |
0.5 mL/min |
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流动相A： |
2 mM甲酸铵 + 0.1%甲酸 |
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流动相B： |
乙腈 + 0.1 %甲酸 |
梯度表
质谱条件
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质谱系统： |
ACQUITY RDa检测器 |
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电离模式： |
正离子 |
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采集范围： |
50-2000 m/z |
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毛细管电压： |
1.5 kV（缺省值） |
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锥孔电压： |
30 V |
数据管理
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质谱软件： |
UNIFI™ 2.1.2.14 RemoteAnalyser®SpectralWorks Ltd. 版本4.56.0.3447 |
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信息学软件： |
waters_connect™ |
结果与讨论
ACQUITY RDa检测器可以自动设置，包括检测器设置、自动调谐和质量数校准。按照该常规设置，当毛细管电压设为1.5 kV，锥孔电压设为30 V时，系统会采集MS全扫描精确质量数。
使用柱温为40 °C的初始色谱条件在保留时间约2 min处表现出非常宽的共洗脱峰。实验采用质子和非质子溶剂并未缓解色谱结果不佳的情况，但是将柱温提高至80 °C时，显著改善了所有检测到的化合物的峰形和分离度。选择亚乙基桥颗粒色谱柱技术，可确保在这些温度下运行不会对酸性条件下的色谱柱使用寿命产生不利影响1。
提交样品后，将发送一封电子邮件确认已成功收到分析请求。样品分析完成后，分析员会收到一封电子邮件，确认已成功完成分析工作流步骤1–6。
通过电子邮件发送的结果包含每个建议化学式的pdf文档，见图2。另外，电子邮件中包含一个超链接（突出显示），分析员单击该超链接即可进入RemoteAnalyzer软件中的样品审查页面。该页面包含每种检测到的组分的pdf文档副本以及.swrc文件（RemoteAnalyzer专有文件格式）的链接。选择.swrc文件后，将打开一个交互式结果页面，显示“启用缩放”TIC（总离子流色谱图）以及EIC（提取离子流色谱图）和每种分析物的提取质谱图，见图3。
图2.示例电子邮件，包含pdf格式的结果以及交互式结果页面的链接
图3.包含交互式色谱图/质谱图的结果页面
图4显示了由RemoteAnalyzer软件采集的TIC（总离子流色谱图）和所获得的色谱图。由RemoteAnalyzer生成的报告总结见表2，显示所有化合物均具有优异的ppm误差，即所有化合物的误差均介于-0.1 ppm与2 ppm之间。
图4/表2.由RemoteAnalyzer软件采集的TIC，包含显示成功检测到API和杂质的结果报告。结果汇总于表2中。
色谱图显示异丙酯杂质与API有轻微共洗脱，但是全扫描飞行时间检测的快速扫描速度允许对紧邻洗脱的峰进行准确的定量积分和分配2。
结论
将ACQUITY RDa检测器与RemoteAnalyzer软件相结合，使合成化学家能够常规测量精确质量数。
在4 min的UPLC运行时间内，雷米普利和四种加标相关物质均以优异的质量精度(≤2 ppm)检出。
快速扫描速率RDa检测器能够使用快速UPLC梯度，而不会影响定性质量数测量，从而实现高效、可靠的样品周转时间。
通过基于浏览器的RemoteAnalyzer软件控制样品提交和处理过程，化学家可以随时随地远程检索和审查数据，而无需返回到仪器控制PC。
参考资料
- 沃特世杂化颗粒技术综述.第2部分：亚乙基桥[BEH Technology™]杂化颗粒及其在液相色谱中的应用。
- Alelyunas YW, Wrona MD, Cook K, McDonald S, Rainville P. MS扫描速度对UPLC峰分离和代谢物鉴定的影响：飞行时间HRMS与Orbitrap.
720007690ZH，2022年7月
