• 应用纪要

甲苄噻嗪掺假的假冒M30药丸提取物筛查和确认检测

甲苄噻嗪掺假的假冒M30药丸提取物筛查和确认检测
  • Michael Wakefield
  • Jeff Salamat
  • Alexandra Harvey
  • Waters Corporation
  • San Diego County Sheriff’s Department Regional Crime Laboratory
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摘要

假冒M30药丸中含有甲苄噻嗪是美国近两年毒品查获工作中出现的一个令人不安的趋势。本文将介绍一种筛查和确认假冒M30药丸提取物中所含物质的工作流程。

优势

  • ACQUITY™ RDa™检测器为毒品样品的全面筛查提供了一种快速高效的方法。
  • 将准确质量数、短分析时间、可自定义且可扩展的数据库与碎裂模式下的完整扫描采集相结合，为药物筛查提供了高可信度结果。
  • Xevo™ TQ-Absolute和TQ-S micro串联质谱仪能够为药物确认分析提供出色的灵敏度

简介

毒品犯罪网络正在大量生产假药，并以合法处方药片的名义进行虚假销售，蒙骗毫无戒心的消费者。许多假药的外观与处方药相似，例如羟考酮（Oxycontin®、Percocet®）、氢可酮（Vicodin®）和阿普唑仑（Xanax®）；或安非他命（Adderall®）等兴奋剂，如图1所示。这类假冒处方药通常通过社交媒介和电商平台销售，包括未成年人在内的普通人群很容易就能购买到这类药品。过去两年，美国各地出现一个令人不安的毒品查获趋势：甲苄噻嗪（一种兽用镇静剂）被作为掺假物添加到越来越多的违禁药物混合物中，并由此导致越来越多的过量服药死亡案例1。

图1.看起来像处方药（例如羟考酮 (https://www.dea.gov/onepill)）的假冒M30药丸。

我们之前介绍过一种使用ACQUITY RDa检测器筛查毒品的LC-Tof方法2。 ACQUITY RDa检测器为毒品筛查提供了一种快速高效的方法，能够筛查自定义的药物目标列表，还能帮助鉴定以往未鉴定出的化合物。本文将介绍对假冒M30药丸进行溶解、过滤、稀释-上样前处理后采用ACQUITY RDa检测器进行毒品筛查的应用。本研究将使用在MRM检测模式下运行的LC-MS/MS系统，将Xevo TQ Absolute（或Xevo TQ-S micro）质谱仪与ACQUITY UPLC™ I-Class PLUS (FTN)系统联用，对已鉴定组分进行确认。这两种仪器在此类半定量检测中均具有出色的灵敏度，并且能够针对不同的预算提供合适选择。

实验

样品前处理

假冒M30药丸样品提取物由圣地亚哥郡警长部门管制物质调查组提供。将M30药丸切成薄片制成粉末，取约1 mg粉末溶于1 mL乙醇中，然后用0.2 µm PTFE Acrodisc针式过滤器（沃特世P/N：186009327）过滤。

将3滴过滤后的溶液用20%甲醇水溶液稀释（筛查溶液），然后将10 μL此溶液进样至UPLC系统，进行筛查分析。

使用80/20 (v/v)水/甲醇将此筛查溶液进一步按1:100的比例稀释，然后进样1 μL至UPLC系统，进行确认分析（确认溶液）。 

使用ACQUITY RDa检测器进行毒品筛查

将10 μL的筛查溶液进样至ACQUITY UPLC I-Class PLUS FTN系统。使用ACQUITY HSS T3 1.8 µm, 2.1 x 100 mm色谱柱（P/N：186003539）分离化合物，流动相为pH 3.0的5 mM甲酸铵水溶液和含0.1%甲酸的乙腈，运行时间为9.5分钟。使用ACQUITY RDa检测器以正离子模式检测化合物，获取碎裂信息的完整扫描数据（50–2000 m/z）。毒品筛查实验利用包含碎裂信息的完整扫描数据进行化合物鉴定，同时将使用包含400种化合物的自定义目标列表（库）。如前所述，在waters_connect™软件中使用准确质量数、保留时间和化合物碎片离子数据快速搜索可自定义的数据库以鉴定案例研究样品2。

使用串联质谱法对筛查毒品进行确认和半定量

对M30药丸进行半定量实验，基于可获得的标准品鉴定出14种化合物中的11种。将1 μL的确认溶液进样至ACQUITY UPLC I-Class PLUS FTN系统。使用ACQUITY HSS T3 1.8 µm, 2.1 x 100 mm色谱柱（P/N：186003539）分离化合物，流动相为pH 3.0的5 mM甲酸铵水溶液和含0.1%甲酸的乙腈，运行时间为4.5分钟。采用Xevo TQ Absolute和Xevo TQ-S micro串联质谱仪以正离子电离模式和MRM检测模式，使用定量和定性通道对化合物进行检测和半定量，如表1所示。

表1.Xevo TQ Absolute和Xevo TQ-S micro的MRM条件（定量离子通道以粗体显示）。

将各化合物（对乙酰氨基酚和咖啡因除外）溶于20%甲醇水溶液中生成五点校准曲线，浓度范围为0.5~100 ng/mL，并配制浓度为35 ng/mL的质量控制标准品。对乙酰氨基酚和咖啡因使用浓度范围为1.0~250 ng/mL的校准曲线，以溶于20%甲醇水溶液中浓度为75 ng/mL的溶液作为质量控制标准品。
由于分析时未获得所分析化合物的氘代内标，因此本次分析采用外标法定量法。

结果与讨论

使用ACQUITY RDa进行毒品筛查

本文的筛查方法通过比较预期和实测保留时间、准确质量数和仪器强度响应，在假冒M30药丸提取物中鉴定出了14种推定的阳性化合物（对乙酰氨基酚、4-ANPP、4-甲胺基安替比林、乙酰芬太尼、咖啡因、脱丙酰对氟芬太尼、芬太尼、利多卡因、O(p)-氟芬太尼、对氟苯乙基4-ANPP、苯乙基4-ANPP、普鲁卡因、曲马多、甲苄噻嗪）。图2a和2b分别为芬太尼和甲苄噻嗪毒品筛查实验的waters_connect软件结果。甲苄噻嗪的实测质量数为m/z 221.1110，质量数误差为1.3 ppm (0.3 mDa)，实测保留时间为2.30 min，而预期保留时间为2.38 min。此外，芬太尼的实测质量数为m/z 337.2272，质量数误差为-0.8 ppm (-0.3 mDa)，实测保留时间为3.08 min，而预期保留时间为3.10 min。

图2a.waters_connect软件中对M30药丸进行芬太尼类毒品筛查分析所得的结果。
图2b.waters_connect软件中对M30药丸进行甲苄噻嗪毒品筛查分析所得的结果。

使用串联质谱法对筛查毒品进行确认和半定量

两种串联四极杆仪器针对每种分析化合物的结果相当。在测试的校准范围内，每种化合物均获得了R2值大于0.995的线性响应。

使用Xevo TQ Absolute和Xevo TQ-S micro分析M30药丸获得的半定量结果也显示在所有分析化合物的汇总表中（图3）。Xevo TQ Absolute针对芬太尼和甲苄噻嗪的检出浓度分别为7444 ng/mL和913 ng/mL。此外，4-甲胺基安替比林（欧洲镇痛药安乃近的代谢物）、4-ANPP、O(p)-氟芬太尼、对乙酰氨基酚和咖啡因的检出浓度高于500 ng/mL。

图3.Xevo TQ Absolute和Xevo TQ-S micro药丸分析获得的半定量结果汇总。

图4和图5分别显示了使用Xevo TQ Absolute分析M30药丸所得芬太尼和甲苄噻嗪的半定量TargetLynx™ XS分析结果。

图4.Xevo TQ Absolute上芬太尼的TargetLynx分析结果。
图5.Xevo TQ Absolute上甲苄噻嗪的TargetLynx分析结果。

结论

本文举例说明了掺有甲苄噻嗪的假冒M30药丸的筛查和确认分析工作流程。该工作流程遵循科学领域委员会组织(OSAC)关于查获毒品分析鉴定的建议，利用A类和B类技术，通过结构信息和化学、物理特征提供最高水平的选择性。

采用ACQUITY RDa检测器进行的LC-Tof分析为查获毒品样品的全面筛查提供了一种快速高效的方法。在本例中，我们从本应含有一种活性成分的药丸中推定鉴定出含有14种化合物的复杂混合物。准确质量数、短分析时间、可自定义且可扩展的数据库结合碎裂的完整扫描数据采集，为药物筛查实验提供了高可信度结果，可在初始靶标库搜索未获得结果时帮助实现回顾性数据分析。

使用Xevo TQ Absolute或Xevo TQ-S micro质谱仪进行的确认检测为已鉴定化合物提供了保留时间和MRM半定量数据。两种质谱仪均可以出色的灵敏度实现化合物的检测和定量。在分析的假冒M30药丸中，检出甲苄噻嗪，且浓度定量为913 ng/mL。

参考资料

  1. https://www.dea.gov/sites/default/files/2022-12/The%20Growing%20Threat%20of%20Xylazine%20and%20its%20Mixture%20with%20Illicit%20Drugs.pdf Accessed 31 May 2023.
  2. Michael Wakefield和Erik Todd。使用ACQUITY RDa检测器进行毒品筛查。沃特世应用纪要。 720007097ZH。 2020年12月。

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