• 应用纪要

在分析方法的开发中使用Empower™样品组生成器自动创建色谱方法

在分析方法的开发中使用Empower™样品组生成器自动创建色谱方法
  • Margaret Maziarz
  • Waters Corporation
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摘要

本技术简报展示如何在基于系统性筛选策略执行的方法开发中使用Empower™样品组生成器(SSG)软件自动创建色谱方法。本实验研究采用配备PDA和ACQUITY™ QDa™质谱检测器的Arc™ Premier系统进行。使用Empower™色谱数据软件(CDS)进行数据采集和分析。

优势

  • 使用Empower样品组生成器(SSG)自动且快速地创建Empower仪器方法、方法组和样品组方法，以便在Waters ACQUITY™ LC仪器、光学检测器和ACQUITY QDa质谱检测器上执行分析
  • 确信所有色谱运行均使用正确创建的方法完成

简介

分析方法的开发是一个复杂的过程，需要筛选多种色谱参数才能获得分离效果理想并且稳定耐用的方法。系统性筛选策略分三个阶段完成方法开发，包括探索、筛选和优化步骤1-2。 分析人员会在整个分析过程中系统地评估影响选择性和分离度的关键因素，并需要精心创建许多色谱方法。

Empower样品组生成器(SSG)软件可针对多种变量自动创建色谱方法3。 根据实验设计，在样品组方法中自动创建和构造Empower方法组和仪器方法，作为准备运行的进样序列。使用Empower SSG，可减少时间和抄录错误，确保所有色谱运行均按照正确创建的方法完成。

本技术简报展示如何在方法开发工作流程中使用Empower样品组生成器(SSG)自动且快速地创建色谱方法。我们采用系统性筛选策略开发一种分析盐酸萘甲唑林和马来酸非尼拉敏活性药物成分(API)及其相关物质的方法。使用Empower SSG创建运行筛选和优化研究所需的色谱方法。

实验

样品描述

按照之前所述的方法制备包含盐酸萘甲唑啉和马来酸非尼拉敏API及其相关物质的混标溶液2。

质谱条件

液相色谱系统：

Arc Premier系统，带色谱柱管理器（主动式）、PDA和ACQUITY QDa质谱检测器

样品瓶：

LCMS最大回收样品瓶，容积2 mL，P/N：600000670CV

色谱柱：

所有色谱柱均为4.6 x 100 mm，2.5 µm，柱温40 °C

XSelect™ Premier CSH™ C18 (P/N: 186009873)

XSelect Premier CSH苯己基柱(P/N: 186009890)

XSelect Premier HSS T3 (P/N: 186009859)

Atlantis™ Premier BEH™ C18 AX (P/N: 186009397)

流动相：

A：1%甲酸水溶液

B：1%氢氧化铵水溶液

C：水

D1：乙腈

D2：甲醇

流速：

1.0 mL/min

进样体积：

5.0 µL

清洗溶剂：

清除/样品清洗液：80:20水/甲醇

密封清洗液：90:10水/乙腈

检测：

UV 260 nm

梯度表

数据管理

色谱软件：

Empower™ 3 Feature Release 5Service Release 5 (FR5 SR5)，用于数据采集和分析。

Empower样品组生成器是Empower色谱数据软件(CDS)选配的插件3。

结果与讨论

我们采用系统性筛选策略开发出一种分析盐酸萘甲唑啉、马来酸非尼拉敏及其相关物质的方法2。 将Arc Premier系统与色谱柱管理器和溶剂选择阀集成，可实现色谱柱和有机溶剂的自动切换。

筛选

在筛选阶段，使用乙腈和甲醇溶剂测试采用不同填料的色谱柱。使用Empower SSG软件按照下述步骤创建运行筛选研究所需的色谱方法（仪器、方法组和样品组方法）。

  • 通过加载包含溶剂和色谱柱的逗号分隔值(CSV)文件，将实验设计导入Empower SSG（图1）
  • 从Empower项目加载一个基本样品组方法到Empower SSG，其中包括方法组和仪器方法以及分析的系统配置，并配置仪器组件（图2）
  • 将Empower中溶剂（图3）和色谱柱（图4）设置相关的因素映射到泵和色谱柱管理器模块
  • 最终的生成设置包括进样组、平衡时间和方法名称（图5）
图1.使用Empower SSG创建色谱方法。导入溶剂和色谱柱筛选的实验设计。
图2.Empower SSG。根据需要加载基本样品组方法并配置仪器组件设置。ACQUITY rQSM泵设置：强溶剂和弱溶剂管路、用于强溶剂的“D-切换”、AutoBlend与储备溶剂管路A。
图3.Empower SSG。有机溶剂设置：泵和强溶剂管路。
图4.Empower SSG。色谱柱选择设置：色谱柱管理器和阀位置。
图5.Empower SSG。色谱方法的最终生成设置，包括样品前处理信息、进样组（空白、系统适用性、标准品）、平衡时间和方法名称。

完成最终设置后，Empower SSG根据实验设计自动创建样品组方法，作为准备运行的进样序列（图6）。Empower会在样品组方法中自动创建仪器方法和方法组以及相关的色谱柱和溶剂。按照Empower用户的指示，在运行开始时添加平衡步骤和空白进样。使用Empower SSG可以自动生成色谱方法，减少了手动执行该过程所需的时间和相关的抄录错误。

图6.在筛选阶段使用Empower SSG软件生成的Empower样品组方法

优化

在优化阶段，系统地优化色谱参数以获得所需的分离度和色谱性能。

为了说明如何在优化实验中使用Empower SSG创建色谱方法，我们评估了有机溶剂在10 min内从90%降低到60%的范围内梯度斜率的影响。方法按照筛选部分所述的步骤创建。将梯度斜率映射到泵和强溶剂百分比，以及梯度分离中的第2行和第3行（或步骤）（图7）。

结论

Empower SSG软件基于系统性筛选策略在方法开发工作流程中自动创建色谱方法。该软件会在样品组方法中自动创建仪器方法和方法组，作为筛选和优化研究中准备运行的进样序列。自动创建色谱方法大幅减少了抄录错误，并且缩短了手动创建这些步骤所需的时间。SSG的使用让我们可以确信，色谱运行都是使用正确创建的方法完成的。

图7.使用Empower SSG在梯度斜率的优化中创建色谱方法。将梯度斜率映射到泵和强溶剂百分比，并应用于梯度分离中的第2行和第3行。

参考资料

  1. Hong P, McConville P. 在液相色谱方法开发中实施系统性筛选策略的全面解决方案，沃特世白皮书, 720005268ZH, 2018.
  2. Maziarz M, Rainville PD.使用系统性筛选策略高效开发盐酸萘甲唑啉、马来酸非尼拉敏和相关物质的分析方法.沃特世应用纪要, 720007850ZH, 2023.
  3. Waters Empower 3 Sample Set Generator Release Notes（《Waters Empower 3样品组生成器发行说明》）.沃特世公司, 716004237. 

特色产品

720008224ZH，2024年2月

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