RapiZyme核糖核酸酶
利用可调控RNA酶解简化LC-MS测序
CRISPR sgRNA和mRNA需要进行严格的表征，以确认其鉴定结果、序列和纯度。这些RNA分子由于其复杂的功能、修饰和异构体而成为LC-MS分析的主要候选分子。由于其分子大小，我们通常在进样前使用核酸内切酶（例如核糖核酸酶）进行酶解。获得的酶解产物可以通过离子对反相色谱(IPRP)或亲水作用色谱(HILIC)与质谱(MS)联用轻松进行检测。
Waters RapiZyme MC1和RapiZyme Cusativin可在一系列二核苷酸位点进行可控、可重现的RNA切割。RapiZyme核糖核酸酶可产生多种具有互补重叠的独特RNA片段。对于LC-MS用户而言，该技术可实现可调控的酶解反应，有助于提高峰识别的可信度，从而增加了序列覆盖率，并提供了分子信息。每管含有10,000单位的RapiZyme核糖核酸酶，足够完成多达100次10 µg RNA样品的酶解反应。
- 尽可能提高mRNA和sgRNA的序列覆盖率
- 使用专为LC-MS分析设计的核糖核酸酶
- 酶解时无需使用变性剂和核糖核酸酶抑制剂
- 使用环磷酸盐产品获得更清晰的信号和更高的灵敏度
- 加速RNA治疗药物的开发和分析
RapiZyme核糖核酸酶
规格
概述
- 以更完整的RNA LC-MS表征序列覆盖率改善结果
- 使用高纯度、高活性的酶试剂提高效率，可进行多达100次反应，具体取决于底物
- 使用即用型自动化酶解方案简化分析过程
- 可靠的热灭活方法无需额外的抑制剂，可避免过度酶解和仪器/色谱柱污染
- 利用两种酶的特异性靶向尿苷或胞苷残基
- 利用waters_connect MAP Sequence中集成的酶解特性，大幅提高灵敏度并简化数据解析
- 与IonHance HFIP流动相添加剂配合使用，可将不需要的钠和钾加合物含量减少2倍
推荐用途：提高CRISPR sgRNA和mRNA治疗药物的序列覆盖率。
深入探索酶解原理
RapiZyme MC1和RapiZyme Cusativin具有可重现的切割特异性。双标记、淬灭RNA底物已用于研究RapiZyme MC1和RapiZyme Cusativin。经核糖核酸酶切割后，FAM标记的测试底物与它的黑洞淬灭剂(Black Hole Quencher)偶联物分离。然后使用基于吸光度的技术检测酶解物，从而对靶向切割进行定量测量。此外，采用阴性对照、HEX标记的底物（例如polyA）用于评估非靶向切割。FAM/HEX比率有助于深入了解每种酶的活性，并且可在各种条件下（包括温度、pH、缓冲液组成、酶单位和时间）进行分析。这些分析旨在确定RapiZyme Cusativin和RapiZyme MC1的理想反应条件。
具体说明
RapiZyme MC1和RapiZyme Cusativin是具有互补切割特异性的高纯度、高活性核糖核酸酶。这些重组、可调控的酶经过精心设计，可促进合成寡核苷酸、mRNA和sgRNA的受控酶解，从而加速RNA治疗药物的开发和分析。RapiZyme MC1在pH 8的条件下，对于[A/U/C]pU二核苷酸键的酶解速率表现出理想的选择性和效率，而RapiZyme Cusativin则是在pH 9的条件下，对Cp[U/A/G]二核苷酸序列的切割表现出理想的选择性和效率。通过调整温度、pH和酶与底物的比率等参数，可以优化特定样品的分析效果。
全面保障
RapiZyme MC1和RapiZyme Cusativin更在特定的二核苷酸位点表现出对底物对接和切割的偏好。RapiZyme MC1倾向于在尿苷的5'端进行切割，RapiZyme Cusativin则在胞苷的3'端进行切割。两种酶均产生了可控且可重复的切割产物。这些核糖核酸酶的特殊性质会导致部分酶解，产生较长的产物以及独特和重叠的片段。部分酶解可提供大量信息，产生更多样的片段以供结构解析研究。使用信息学工具（例如waters_connect MAP Sequence）可以加快数据解析，该工具可以根据所选酶的已知切割特性预测模拟片段(mRNA Cleaver)，并将观察到的数据映射到所研究的RNA分子序列上。
