유전자 치료제용 AEX 컬럼 및 표준물질

유전자 치료제용 AEX 컬럼 및 표준물질

광범위한 유전자 치료법을 위한 전하 기반 분석법을 개발하세요. Waters AEX 컬럼은 합성 올리고뉴클레오타이드, CRISPR 유전자 편집 , mRNA, 플라스미드 DNA 및 바이러스 벡터에 중점을 둔 약물 개발자에게 다용도의 머무름 및 선택성을 제공합니다.

광범위한 유전자 치료법을 위한 전하 기반 분석법을 개발하세요. Waters AEX 컬럼은 합성 올리고뉴클레오타이드, CRISPR 유전자 편집 , mRNA, 플라스미드 DNA 및 바이러스 벡터에 중점을 둔 약물 개발자에게 다용도의 머무름 및 선택성을 제공합니다.


개요

AEX는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, siRNA, CRISPR 단일 가이드 RNA(sgRNA), 리보뉴클레오프로테인 복합체, mRNA, DNA 플라스미드 및 바이러스 캡시드를 포함한 유전자 치료제를 분리하기 위한 기초적인 기술입니다. 음이온 교환 메커니즘은 음전하를 띄는 분석물질과 양전하를 띄는 고정상 사이의 정전기 상호 작용을 기반으로 합니다. 바이오 분자의 음의 값이 높을수록 컬럼의 수지에 더 단단히 흡착됩니다. 분석물질은 이동상의 이온 세기 또는 pH 변화에 따라 전하 밀도를 기반으로 분리 및 용리됩니다.

워크플로에 가장 적합한 Waters AEX 컬럼과 표준물질을 선택하여 최적의 분석 조건을 보장하세요.



개선된 분리를 위한 약 음이온 교환 컬럼

개선된 분리를 위한 약 음이온 교환 컬럼

Waters Gen-Pak FAX(4.6 x 100mm) 컬럼은 핵산의 음이온 교환 HPLC에서 뛰어난 분리능을 제공합니다. Waters Gen-Pak FAX 컬럼에는 DEAE로 기능화된 비다공성 수지 기반의 약 음이온 교환기가 들어 있습니다. 2.5μm 입자가 패킹되어 있어 분석과 마이크로 분취용 응용에 적합합니다.

  • 약 음이온 교환 비다공성 폴리머 컬럼
  • 합성 올리고뉴클레오타이드 및 핵산의 고분리능 분리
  • 특정 응용에 필요한 고유한 DEAE 선택성과 낮은 머무름

짧은 시간에 뛰어난 분리능을 제공하는 강 음이온 교환 컬럼

짧은 시간에 뛰어난 분리능을 제공하는 강 음이온 교환 컬럼

Waters Protein-Pak Hi Res Q(4.6 x 100mm) Ion-Exchange(IEX) 컬럼은 재조합형 단백질, 단일 클론 항체 및 기타 생물학적 화학물의 분석을 돕기 위해 개발되었습니다. 이러한 입자의 높은 비다공성 화합물 결합 용량 덕분에 기존의 다양한 다공성 IEX 제품보다 짧은 시간에 전하 종 분리능을 생성합니다.

  • 강 음이온 교환 비다공성 폴리머 패킹 컬럼
  • 4차 Amine 리간드 기능을 가진 높은 결합 용량
  • 다양한 바이오의약품과 호환 가능

웹세미나: 핵산의 음이온 교환 및 크기 배제에 대한 새로운 인사이트

mRNA 및 AAV 분리를 위한 새로운 AEX 및 SEC 분석법 개발

mRNA 백신의 성공은 핵산 기반 약물의 성능을 입증합니다. 안정성, 이질성, 약물 설계 및 구조-기능 관계에 대한 추가 정보를 제공하려면 더 많은 분석 특성화 도구가 필요합니다. AEX 및 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 기술은 핵산과 해당 운반체의 고분리능 분리에 매우 적합합니다. 이 웹세미나에서는 AAV 및 mRNA를 포함한 여러 의약품 및 샘플 유형에 대한 보다 강력한 플랫폼 분석법에 대해 자세히 설명합니다.

mRNA 및 AAV 분리를 위한 새로운 AEX 및 SEC 분석법 개발

mRNA 백신의 성공은 핵산 기반 약물의 성능을 입증합니다. 안정성, 이질성, 약물 설계 및 구조-기능 관계에 대한 추가 정보를 제공하려면 더 많은 분석 특성화 도구가 필요합니다. AEX 및 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 기술은 핵산과 해당 운반체의 고분리능 분리에 매우 적합합니다. 이 웹세미나에서는 AAV 및 mRNA를 포함한 여러 의약품 및 샘플 유형에 대한 보다 강력한 플랫폼 분석법에 대해 자세히 설명합니다.



솔루션


WAX on, WAX off

WAX on, WAX off

네이티브 조건에서 올리고뉴클레오타이드 및 더 긴 핵산은 음전하를 띄는 다중음이온 인산 골격을 가지고 있습니다. 이 기능 덕분에 핵산은 AEX에 이상적인 후보입니다. Waters Gen-Pak FAX 컬럼은 합성 올리고뉴클레오타이드부터 mRNA에 이르는 핵산용으로 설계된 비다공성 2.5µm 약 음이온 교환 수지입니다.

  • Synthetic Oligonucleotide Separations
  • Oligonucleotide Anion Exchange Separations
  • Empty/Full Viral Capsid Analysis

SAX to the MAX

SAX to the MAX

Protein-Pak Hi Res Q 컬럼에는 4차 Amine 작용기를 가진 비다공성 폴리머 수지가 포함되어 있습니다. 강 음이온/양이온 교환(SAX) 응용 분야는 mRNA, CRISPR 단일 가이드 RNA(sgRNA) 및 리보핵단백질 복합체 형성의 완전성 분석, 플라스미드 DNA의 이소폼 정량화 및 바이러스 벡터화 유전자 치료법의 empty/full 캡슐화 분석을 포함하여 다양하고 광범위합니다. 

  • Oligonucleotide Anion Exchange Separations
  • Intact mRNA Analysis
  • Evaluating CRISPR Guide RNA and Ribonucleoprotein Complex Formation
  • Empty/Full Viral Capsid Analysis

AEX 벤치마킹을 위한 올리고뉴클레오타이드 및 핵산 표준물질

AEX 벤치마킹을 위한 올리고뉴클레오타이드 및 핵산 표준물질

AEX 분석법은 유전자 치료제의 특성화 및 품질 확인을 위한 강력한 도구입니다. 해당 분석물질과 화학적으로 유사한 고품질의 참조 물질은 분석법 개발 속도를 높이고 향후 분석을 위해 인증된 참조 물질로 사용할 수 있습니다.

  • Lipid conjugated ASO
  • siRNA oligonucleotides
  • Single-Guide RNA (sgRNA)
  • DNA Ladder
  • Empty/Full Viral Capsid Analysis

응용 분야

단백질, 올리고뉴클레오타이드 및 핵산에 대해 우수한 분리능, 높은 회수율 및 고유한 선택성을 발휘하는 Gen Pak FAX 약 음이온 교환 수지의 예가 많이 있습니다. 컬럼의 머무름이 낮으므로 이동상 조정이 가능해 분리가 향상되고, 변성 이동상 조건을 통해 고유한 탈아미노화 이소폼 분리 선택성을 얻을 수 있습니다. 

단백질, 올리고뉴클레오타이드 및 핵산에 대해 우수한 분리능, 높은 회수율 및 고유한 선택성을 발휘하는 Gen Pak FAX 약 음이온 교환 수지의 예가 많이 있습니다. 컬럼의 머무름이 낮으므로 이동상 조정이 가능해 분리가 향상되고, 변성 이동상 조건을 통해 고유한 탈아미노화 이소폼 분리 선택성을 얻을 수 있습니다. 


Cas 단백질은 sgRNA로 리보핵단백질(RNP) 복합체를 형성합니다. 약물 개발 중에 RNP 복합체의 효율성과 강도를 평가하는 것은 매우 중요합니다. 관련 의약품의 순도를 테스트하는 것도 중요합니다. 새로운 접근 방식은 음이온과 양이온 교환을 커플링하여 이 세 가지 성분을 기본 전하를 기반으로 쉽게 분리하는 방법을 강조합니다. 

Cas 단백질은 sgRNA로 리보핵단백질(RNP) 복합체를 형성합니다. 약물 개발 중에 RNP 복합체의 효율성과 강도를 평가하는 것은 매우 중요합니다. 관련 의약품의 순도를 테스트하는 것도 중요합니다. 새로운 접근 방식은 음이온과 양이온 교환을 커플링하여 이 세 가지 성분을 기본 전하를 기반으로 쉽게 분리하는 방법을 강조합니다. 


AEX는 순도 테스트용으로 플라스미드 이소폼을 분리하고 정량화하기 위한 직접 측정을 제공합니다. AEX는 플라스미드 구조에 존재하는 전하 밀도의 차이를 기준으로 초나선형(SC), 열린 원형(OC) 및 선형(L) 플라스미드를 분리합니다. 예를 들어, 초나선형 DNA는 더 이완된 열린 원형 또는 선형 형태보다 높은 음전하 밀도를 가지므로, Protein-Pak Hi Res Q 양전하를 전하를 띄는 고정상과 더 강력한 상호 작용을 합니다.

AEX는 순도 테스트용으로 플라스미드 이소폼을 분리하고 정량화하기 위한 직접 측정을 제공합니다. AEX는 플라스미드 구조에 존재하는 전하 밀도의 차이를 기준으로 초나선형(SC), 열린 원형(OC) 및 선형(L) 플라스미드를 분리합니다. 예를 들어, 초나선형 DNA는 더 이완된 열린 원형 또는 선형 형태보다 높은 음전하 밀도를 가지므로, Protein-Pak Hi Res Q 양전하를 전하를 띄는 고정상과 더 강력한 상호 작용을 합니다.


바이오의약품 제조 과정에서 AAV 유전자 치료제 등 바이러스 캡시드 내 DNA 페이로드의 캡슐화 효율성을 모니터링하는 것은 필수적입니다. 높은 비율의 캡시드는 원하는 이식 유전자를 포함하지 않을 수 있으며, 이에 따른 치료 효과도 없을 수 있습니다. 음이온 교환은 벡터 내에 존재하는 이식 유전자에 의해 부여된 증가된 음전하에 따라 empty/full 캡시드를 기능적으로 분리할 수 있습니다. 

바이오의약품 제조 과정에서 AAV 유전자 치료제 등 바이러스 캡시드 내 DNA 페이로드의 캡슐화 효율성을 모니터링하는 것은 필수적입니다. 높은 비율의 캡시드는 원하는 이식 유전자를 포함하지 않을 수 있으며, 이에 따른 치료 효과도 없을 수 있습니다. 음이온 교환은 벡터 내에 존재하는 이식 유전자에 의해 부여된 증가된 음전하에 따라 empty/full 캡시드를 기능적으로 분리할 수 있습니다. 


mRNA 르네상스 시대가 열리면서 RNA 약물 및 백신 후보의 생물물리적 속성을 특성화하기 위한 감도가 높으며 강력한 분석법에 대한 필요성이 다시 제기되었습니다. Intact mRNA 분석의 경우, 낮은 온도에서 알킬 암모늄염 기울기를 사용하여 mRNA의 자체 구조를 보존하고, 샘플 농도의 빠른 측정과 함께 이질성을 평가할 수 있습니다. 또한 이러한 기술은 시험관 내(in vitro) 전사 반응의 진행률을 모니터링하도록 최적화할 수 있습니다.

mRNA 르네상스 시대가 열리면서 RNA 약물 및 백신 후보의 생물물리적 속성을 특성화하기 위한 감도가 높으며 강력한 분석법에 대한 필요성이 다시 제기되었습니다. Intact mRNA 분석의 경우, 낮은 온도에서 알킬 암모늄염 기울기를 사용하여 mRNA의 자체 구조를 보존하고, 샘플 농도의 빠른 측정과 함께 이질성을 평가할 수 있습니다. 또한 이러한 기술은 시험관 내(in vitro) 전사 반응의 진행률을 모니터링하도록 최적화할 수 있습니다.




데이터는 그 자체로 의미가 있습니다

데이터는 그 자체로 의미가 있습니다
sgRNA는 Cas9 단백질과의 복합체 형성 후 약간 과잉으로 존재하는 것으로 관찰되었습니다. 복합체 형성은 260(검은색) 및 280nm(빨간색) 모두에서 모니터링되었습니다.
다양한 AEX 컬럼을 사용하여 올리고 dT 래더에 대해 얻은 UV 크로마토그램(260nm)입니다. 염 기울기 분리는 0.72mL/min 유속, 20mM Tris pH 8 완충액 이동상 및 300~600mM NaCl에서 실행되는 10min 기울기를 사용하여 30˚C에서 수행되었습니다.
Waters Protein-Pak Hi Res Q 컬럼을 이용한 ΦX174 플라스미드 이소폼(L, O, SC) 분리. 20mM Tris pH 7.4, 1.69~1.75M 테트라메틸암모늄 클로라이드(10min). 유속: 0.4mL/min.
최적화된 AEX 분석법을 사용하는 다양한 empty/full 캡시드 혼합물의 % empty 캡시드 정량화. 
30~60°C 범위의 다양한 일련의 컬럼 온도와 결합된 AEX 컬럼, Tris 버퍼 이동상 및 염화나트륨 기울기를 사용하는 Cas9 mRNA(A) 및 EPO mRNA(B)의 이온 교환 분리.
30~60°C 범위의 다양한 일련의 컬럼 온도와 결합된 AEX 컬럼, Tris 버퍼 이동상 및 염화나트륨 기울기를 사용하는 Cas9 mRNA(A) 및 EPO mRNA(B)의 이온 교환 분리.

웹세미나 및 리소스


  • How-to Video

핵산의 음이온 교환 및 크기 배제에 대한 새로운 인사이트

핵산의 음이온 교환 및 크기 배제에 대한 새로운 인사이트

관련 항목

정확한 고처리량 데이터를 제공하도록 고안된 Waters 유전자 치료제(GTx) 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 컬럼을 통해 유전자 치료제를 분석하면 샘플의 효능과 안전성에 대해 파악할 수 있습니다.

GTxResolve 컬럼을 사용하여 지질 나노입자(LNP), 핵산 및 바이러스 벡터 응집체에 대한 중요 품질 속성을 높은 신뢰도로 강력하게 분석할 수 있습니다.

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GTxResolve Premier BEH Amide 컬럼을 통해 합성 올리고뉴클레오타이드, 분해된 핵산, 캡시드 단백질에 대해 이온 쌍이 없으며 분리능이 뛰어난 분석법을 개발하세요.

유전자 치료제용 AEX 컬럼 및 표준물질에 대해 자세히 알아보세요.

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