Consumibles y columnas de purificación de oligonucleótidos

Para columnas de preparación con relaciones de aspecto más pequeñas, el empaquetado de la pasta a alta presión con partículas pequeñas a menudo no logra la densidad de lecho deseada que se encuentra en columnas analíticas bien diseñadas. Una compresión axial excesiva en la entrada puede provocar la rotura de partícula, la formación de canales y una permeabilidad reducida del lecho. Las columnas OBD cuidadosamente diseñadas ofrecen ventajas significativas, como una mayor vida útil de la columna, mayor eficacia, mejor forma de los picos y menor contrapresión.

Los ácidos nucleicos, incluidos los oligonucleótidos, son polianiónicos (carga negativa) y, como tal, se adsorben fácilmente en las superficies de óxidos metálicos de las columnas de acero inoxidable. Las columnas OBD BEH C₁₈ para oligonucleótidos XBridge Premier de Waters están fabricadas con componentes de hardware modificados para tener una química de superficie híbrida inerte orgánica/inorgánica basada en sílice que reduce en gran medida la adsorción no específica (NSA) de ácidos nucleicos, lo que permite una mejor recuperación y reproducibilidad para ciertos compuestos que deben aislarse de un principio activo para su posterior estudio. Las columnas OBD BEH C₁₈ para oligonucleótidos XBridge Premier también eliminan la necesidad de pasivación de la columna/acondicionamiento de la muestra, por lo que se pueden iniciar los procesos de recolección de fracciones sin demora. 

La tecnología de partículas híbridas con puentes de etileno (BEH) certificada por lotes de Waters para oligonucleótidos garantiza un mayor rendimiento, reproducibilidad y escalado para la purificación. Las altas temperatura y el pH elevado son estrategias frecuentes para minimizar las interacciones secundarias en la separación y purificación de oligonucleótidos. La tecnología de partículas BEH resiste las condiciones más duras, como pH y temperatura elevados, y los aditivos que normalmente se requieren para el análisis de oligonucleótidos.

Las columnas de preparación OBD para oligonucleótidos XBridge, probadas por lotes y con certificación de control de calidad, proporcionan una garantía adicional para la reproducibilidad y la transferencia de métodos, y asisten a las necesidades de purificación emergentes para siRNA, ASO y reactivos de oligonucleótidos estándar y nuevos químicamente diversos. Cada lote de sorbente BEH C₁₈ de oligonucleótidos se somete a pruebas de control de calidad y se selecciona utilizando el patrón de oligonucleótidos MassPrep de Waters y una evaluación rigurosa de la resolución y de la asimetría de los picos a partir de una separación IP-RP con acetato de trietilamonio. Estos sorbentes cuidadosamente examinados están disponibles en tamaños de partícula de 2,5 y 5 µm, así como en tamaños de poro de 130 y 300 Å, para proporcionar a los químicos de oligonucleótidos una gama de opciones versátiles para purificar una variedad de diferentes productos de síntesis.

Las columnas de preparación OBD para oligonucleótidos XBridge y XBridge Premier de Waters se rellenan con partículas de sílice híbridas con puentes de etileno (BEH) C₁₈ de Waters y muestran una notable longevidad de la columna en condiciones de pH y temperatura elevados, a la vez que mantienen un rendimiento de separación excepcional. Con los cuidados adecuados, se sabe que las columnas BEH C₁₈ para oligonucleótidos superan las 10 000 inyecciones sin pérdida de eficacia ni retención. 

En las purificaciones de preparación, varios parámetros influyen en la capacidad de carga. La eficacia de columna, el tamaño de poro, el tamaño de partícula y los parámetros del método desempeñan un papel importante. Las columnas con mayor tamaño de poro permiten una mejor transferencia de masa y unos picos más definidos de los analitos más grandes. Debido a su área superficial reducida, pueden presentar una menor capacidad de carga. Las columnas de preparación OBD para oligonucleótidos XBridge de Waters están disponibles con diferentes tamaños de poro y una amplia gama de diámetros internos de columna para lograr una escalabilidad predecible y una capacidad de carga mejorada.

La purificación de oligonucleótidos de alta pureza y calidad es fundamental para minimizar los problemas de seguridad y eficacia relacionados con las impurezas no deseadas en los estudios toxicológicos. Las columnas de preparación OBD para oligonucleótidos XBridge de 2,5 µm de alta eficacia facilitan el aislamiento de las impurezas tempranas y de coelución, al mismo tiempo que mantienen el perfil cromatográfico sin comprometer la alta recuperación.