Modos de separación
Identificar las químicas de columna que solucionen todos sus problemas cromatográficos.
Cromatografía de fase reversa
La cromatografía de fase reversa es, con gran diferencia, la técnica de separación por cromatografía líquida más utilizada actualmente en el laboratorio y su popularidad se refleja por la amplia selección de productos de columnas que ofrece Waters en la actualidad.
En su forma más sencilla, la cromatografía de fase reversa se compone de una fase móvil polar, normalmente una mezcla de agua o solución tampón con eluyentes polares como el metanol, el acetonitrilo o el tetrahidrofurano, y una fase estacionaria no polar como hidrocarburos de cadena larga unidos a un soporte de sílice o híbrido. En los últimos años, se ha destinado una gran cantidad de recursos de investigación y desarrollo en el área de las fases de separación con el fin de mejorar la eficacia y la estabilidad frente al pH de las columnas, y de proporcionar selectividades alternativas.
Las químicas de columnas modernas de Waters se pueden clasificar de manera general en tres categorías:
- Híbrida: Diseñada para obtener una estabilidad máxima frente al pH y ofrecer opciones de desarrollo de métodos más flexibles. Disponible en las marcas XBridge, ACQUITY BEH y XTerra; intervalo de pH: 1-12.
- Sílice: Históricamente, el soporte de fase reversa más utilizado; los productos SunFire y Symmetry se sintetizan a partir de materias primas en la fábrica Taunton de Waters y están diseñados para obtener una capacidad de carga máxima. Intervalo de pH: 2-7
- Específicas de la aplicación: Diseñadas para un área de aplicación específica, como las columnas Atlantis para obtener una mejor retención de las moléculas polares.
Cromatografía de fase normal
Antes del desarrollo de las fases enlazadas de fase reversa, la cromatografía de fase normal era la técnica de separación más popular. Se basa en la interacción de los analitos con grupos funcionales polares en la superficie de la fase estacionaria, que alcanza su potencia máxima cuando se utilizan eluyentes no polares como fase móvil.
La cromatografía de fase normal es una herramienta de separación muy potente debido a la amplia gama de eluyentes disponibles que se puede utilizar para ajustar con precisión la selectividad de una separación. Sin embargo, muchos cromatografistas han dejado de utilizarla debido a su complejidad. En determinadas circunstancias, existe un período de equilibrado prolongado o problemas de reproducibilidad que se deben principalmente a la sensibilidad de la técnica a la presencia de pequeñas concentraciones de contaminantes polares en la fase móvil. Si estos problemas se controlan, la técnica normalmente proporciona unos cromatogramas mejores a los que se obtienen con los métodos de fase reversa debido a la baja viscosidad de los eluyentes que se utilizan habitualmente.
Las columnas de fase normal están disponibles en las familias de productos SunFire, Nova-Pak y Spherisorb.
HILIC (cromatografía de interacción hidrofílica)
La cromatografía de interacción hidrofílica se ha practicado durante mucho tiempo, aunque el término HILIC se ha empezado a utilizar de forma común recientemente. Los analitos son compuestos muy polares como los péptidos, los hidratos de carbono o los metabolitos polares.
La HILIC se puede considerar una extensión de la cromatografía de fase normal en el ámbito de las fases móviles acuosas. Las fases móviles son mezclas de agua o solución tampón (< 40 %) con eluyentes orgánicos. Las fases estacionarias son adsorbentes polares muy hidrofílicos como el sílice, las fases con enlaces polares, los rellenos poliméricos polares y los intercambiadores de iones. El factor común de todas estas fases estacionarias es que pueden adsorber agua fácilmente, de ahí su clasificación como «hidrofílicas».
Los métodos de gradiente empleados en el modo HILIC son exactamente los opuestos a los que se utilizan en el modo de fase reversa. Las condiciones iniciales comprenden una elevada cantidad de materia orgánica, normalmente el 95 %, y el cambio progresivo a una mayor cantidad de materia acuosa. Por este motivo, también está empezando a ser habitual el término fase reversa-reversa.
La técnica está ganando popularidad y por este motivo se investigan cada vez más rellenos de columnas.
Las columnas HILIC de Waters se encuentran disponibles en las familias de productos Atlantis, CORTECS, XBridge y ACQUITY.
Cromatografía de fase reversa
La cromatografía de fase reversa es, con gran diferencia, la técnica de separación por cromatografía líquida más utilizada actualmente en el laboratorio y su popularidad se refleja por la amplia selección de productos de columnas que ofrece Waters en la actualidad.
La fase estacionaria es no polar y se crea, en algunos casos, enlazando grupos funcionales de hidrocarburos de cadena larga a un soporte de partículas de sílice, de núcleo sólido, poliméricas o híbridas. La fase estacionaria es no polar y se crea, en algunos casos, uniendo una funcionalidad de hidrocarburos de cadena larga a un soporte de partículas de sílice, de núcleo sólido, poliméricas o híbridas. En los últimos años, se ha destinado una gran cantidad de trabajo en los campos de la investigación y el desarrollo al área de los soportes de separación de fase reversa con el fin de mejorar la eficacia de las columnas y la estabilidad frente al pH, y de proporcionar selectividades alternativas.
Las químicas de columnas modernas de Waters se pueden clasificar de manera general en cuatro categorías:
- Híbrida: Diseñada para obtener una estabilidad máxima frente al pH y ofrecer opciones de desarrollo de métodos más flexibles. Intervalo de pH de 1 a 12
- Sílice: Históricamente, el soporte de fase reversa más utilizado; estos productos se sintetizan a partir de materias primas en la fábrica Taunton de Waters y están diseñados para obtener una capacidad de carga máxima. Intervalo de pH 2-7.
- Núcleo sólido: Partículas diseñadas para maximizar la eficacia de la columna reduciendo el uso de aditivos que ocasionan dispersión en la columna. Disponible en tamaños de partículas de 1,6 y 2,7 µm, y compatible con todos los sistemas de cromatografía líquida.
- Específicas de la aplicación: Diseñadas para un área de aplicación específica para obtener una mejor retención de las moléculas polares.
Marcas de columnas relacionadas
Híbridas
Sílice
Núcleo sólido
Específicas de la aplicación
Cromatografía de fase normal
La cromatografía de fase normal se puede considerar como lo opuesto a la cromatografía de fase reversa. Se basa en la interacción de los analitos con grupos funcionales polares con la superficie polar de la fase estacionaria. La fase móvil de elución fuerte para la cromatografía de fase normal es polar, por lo que la retención máxima se logra utilizando eluyentes no polares.
La cromatografía de fase normal es una herramienta de separación muy potente debido a la amplia gama de eluyentes disponibles que se puede utilizar para ajustar con precisión la selectividad de una separación. Sin embargo, muchos cromatografistas han dejado de utilizarla debido a su complejidad. En determinadas circunstancias, existe un período de equilibrado prolongado o problemas de reproducibilidad que se deben principalmente a la sensibilidad de la técnica a la presencia de pequeñas concentraciones de contaminantes polares en la fase móvil. Si estos problemas se controlan, la técnica normalmente proporciona unos cromatogramas mejores a los que se obtienen con los métodos de fase reversa debido a la baja viscosidad de los eluyentes que se utilizan habitualmente.
Marcas de columnas relacionadas
HILIC (cromatografía de interacción hidrofílica)
La cromatografía de interacción hidrofílica se ha practicado durante mucho tiempo, aunque el término HILIC se ha empezado a utilizar de forma común recientemente. HILIC es una variación de la cromatografía de fase normal, en la que los analitos mejor retenidos son compuestos muy polares, como metabolitos polares, carbohidratos o péptidos.
Las fases móviles son mezclas de agua o solución tampón (< 40 %) con eluyentes orgánicos. Las fases estacionarias son muy hidrofílicas y están compuestas de sílice, fases enlazadas polares, rellenos poliméricos polares, zwitteriones e intercambiadores de iones. El factor común de todas estas fases estacionarias es que pueden adsorber fácilmente una capa de agua en la superficie de las partículas para favorecer la partición. La retención se ve impulsada por la partición con la capa de agua inmovilizada en la superficie y el volumen de fase móvil. Los métodos de gradiente empleados en el modo HILIC son exactamente los opuestos a los que se utilizan en el modo de fase reversa. Las condiciones iniciales comprenden una elevada cantidad de materia orgánica, normalmente el 95 %, y el cambio progresivo a una mayor cantidad de materia acuosa. Por este motivo, también está empezando a ser habitual el término fase reversa-reversa.
La técnica está ganando popularidad y por este motivo se investigan cada vez más rellenos de columnas.
Marcas de columnas relacionadas
Cromatografía de intercambio iónico
Las separaciones de intercambio iónico (IEX) se realizan habitualmente aplicando gradientes salinos crecientes, modificando el pH o aplicando simultáneamente cambios de pH y de concentración de sal; donde las especies de proteínas menos cargadas eluyen antes que las moléculas de mayor carga. En función del tipo de proteína y el pH de separación, se selecciona un intercambiador aniónico o catiónico para la separación. Asimismo, la duración del gradiente, el pH y la composición del tampón, el caudal y la temperatura de la separación son factores que desempeñan una importante función a la hora de obtener la selectividad deseada entre proteínas.
