Colunas e consumíveis para purificação de oligonucleotídeos

Colunas e consumíveis para purificação de oligonucleotídeos

Descubra como as colunas preparativas e os consumíveis de escala de laboratório da Waters para oligonucleotídeos podem ajudar a obter rapidamente purificações excepcionais de alta recuperação e rendimento em aumento de escala direto. Criados com tolerância a pH e temperatura líder do setor, cada lote de sorvente é testado e selecionado por CQ utilizando os padrões da Waters para oligonucleotídeos para garantir o desempenho e a reprodutibilidade de lote a lote.

Descubra como as colunas preparativas e os consumíveis de escala de laboratório da Waters para oligonucleotídeos podem ajudar a obter rapidamente purificações excepcionais de alta recuperação e rendimento em aumento de escala direto. Criados com tolerância a pH e temperatura líder do setor, cada lote de sorvente é testado e selecionado por CQ utilizando os padrões da Waters para oligonucleotídeos para garantir o desempenho e a reprodutibilidade de lote a lote.
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I workflow analitici di Waters per la caratterizzazione e il monitoraggio degli oligonucleotidi, noti per la loro solidità e convenienza, garantiscono la comprensione dei processi e la qualità del prodotto
Learn how to achieve high performance oligonucleotide preparative chromatography by utilizing XBridge Oligonucleotide OBD Prep Columns and efficient method optimization considerations

Visão geral

Purificar um produto de oligonucleotídeo de comprimento completo das impurezas geradas durante a síntese é essencial para garantir sua funcionalidade, segurança e eficácia em aplicações farmacêuticas e de diagnóstico. Devido à sua natureza polianiônica, a purificação de oligonucleotídeos com alta seletividade e resolução é um desafio. A cromatografia de fase reversa com pareamento iônico (IP-RP, Ion-Pairing Reversed-Phase) surgiu como a técnica dominante e preferida.

Colunas estáveis de alto pH/temperatura e testadas em lote com níveis controlados de interações secundárias ajudam a remover rapidamente os gargalos que consomem tempo. As colunas de OBD Waters XBridge BEH C18 para oligonucleotídeos são a escolha certa para colunas preparativas, oferecendo desempenho garantido, escalabilidade consistente e purificação de alta recuperação de vários oligonucleotídeos com modificações químicas complexas.

  • As partículas de BEH C18 para oligonucleotídeos testadas em lote e certificadas por controle de qualidade proporcionam aumento de escala previsível e purificação consistente em uma variedade de diâmetros de coluna
  • A tecnologia de partículas de sílica híbrida BEH C18 oferece estabilidade de pH e temperatura líder do setor, com resolução e vida útil de coluna excepcionais
  • A tecnologia de Superfícies de alto desempenho (HPS, High Performance Surfaces) MaxPeak Premier, disponível em colunas com diâmetro interno de 10 mm, fornece uma opção extra para reduzir a adsorção não específica para obter o máximo de sensibilidade, reprodutibilidade e produtividade
  • Uma variedade de padrões analíticos de alta qualidade e rastreáveis por lote facilita o teste de adequação do sistema, o desenvolvimento de métodos e a solução de problemas
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Preenchimento Optimum Bed Density

Preenchimento Optimum Bed Density

Para colunas preparativas com proporções de medidas menores, o preenchimento de pasta de alta pressão com partículas pequenas muitas vezes não consegue atingir a densidade de leito desejada encontrada em colunas analíticas bem projetadas. A compressão axial excessiva na entrada pode resultar em quebra de partículas, canalização e redução da permeabilidade do leito. As colunas de OBD projetadas cuidadosamente oferecem benefícios significativos, incluindo maior vida útil da coluna, maior eficiência, melhor formato de pico e menor contrapressão.

Superfícies de alto desempenho MaxPeak com colunas de 10 mm de diâmetro interno

Superfícies de alto desempenho MaxPeak com colunas de 10 mm de diâmetro interno

Os ácidos nucleicos, incluindo os oligonucleotídeos, são polianiônicos (carregados negativamente) e, dessa forma, prontamente adsorvem superfícies de óxido metálico em colunas de aço inoxidável. As colunas de OBD Waters XBridge Premier BEH C18 para oligonucleotídeos são construídas com componentes de hardware modificados para ter uma química de superfície inerte híbrida orgânica/inorgânica à base de sílica que reduz consideravelmente a adsorção não específica (NSA, Non-Specific Adsorption) de ácidos nucleicos, permitindo assim uma recuperação aprimorada e uma reprodutibilidade melhorada para determinados compostos que precisam ser isolados de uma substância medicamentosa para estudos posteriores. As colunas de OBD XBridge Premier BEH C18 para oligonucleotídeos também eliminam a necessidade de passivação da coluna/condicionamento da amostra para que seja possível iniciar as corridas de coleta de frações sem demora. 

Partículas de BEH C18 de 130 e 300 Å, 2,5 e 5 µm para oligonucleotídeos testadas em lote e selecionadas

Partículas de BEH C18 de 130 e 300 Å, 2,5 e 5 µm para oligonucleotídeos testadas em lote e selecionadas

A tecnologia híbrida de pontes de etileno (BEH, Ethylene Bridge Hybrid) certificada em lote da Waters para oligonucleotídeos garante desempenho, reprodutibilidade e aumento de escala adicionais para purificação. Alta temperatura e alto pH são estratégias predominantes para minimizar as interações secundárias na separação e purificação de oligonucleotídeos. A tecnologia de partículas BEH suporta condições adversas como alto nível de pH, temperatura e aditivos que normalmente são necessários para a análise de oligonucleotídeos.

As colunas preparativas de OBD XBridge para oligonucleotídeos, testadas em lote e certificadas por controle de qualidade, fornecem uma garantia extra de reprodutibilidade e transferência de métodos, além de atender às necessidades crescentes de purificação para siRNAs (RNAs de interferência pequena), ASOs (Oligonucleotídeos antissentido) e reagentes de oligonucleotídeos padrão e novos quimicamente diversos. Cada lote de sorvente BEH C18 para oligonucleotídeos é testado por controle de qualidade e selecionado utilizando o Padrão Waters MassPrep para oligonucleotídeos e uma avaliação rigorosa de resolução e cauda de pico a partir de uma separação de acetato de trietilamônio por IP-RP (Fase reversa - pareamento iônico). Esses sorventes cuidadosamente examinados estão disponíveis em tamanhos de partícula de 2,5 e 5 µm, bem como em tamanhos de poro de 130 e 300 Å, para fornecer aos químicos de oligonucleotídeos uma variedade de opções versáteis para purificar diversos produtos de síntese.

Excelente vida útil da coluna

Excelente vida útil da coluna

As Colunas preparativas de OBD XBridge e XBridge Premier para oligonucleotídeos são preenchidas com partículas BEH (híbridas com pontes de etileno) de sílica C18 da Waters e demonstram uma longevidade notável da coluna sob condições de pH e temperatura elevados, mantendo um desempenho inigualável nas separações. Com cuidado, as colunas BEH C18 para oligonucleotídeos podem exceder 10000 injeções sem perda de eficiência ou retenção. 

Capacidade de carregamento previsível

Capacidade de carregamento previsível

Em purificações preparativas, a capacidade de carregamento é influenciada por vários parâmetros. A eficiência da coluna, o tamanho de poro, o tamanho da partícula e os parâmetros do método desempenham papéis importantes. Colunas com poros mais largos permitem melhor transferência de massa e formatos de pico mais nítidos de analitos maiores. Com sua área de superfície reduzida, elas podem apresentar menor capacidade de carregamento. As colunas preparativas de OBD Waters XBridge para oligonucleotídeos estão disponíveis em diferentes tamanhos de poros e em uma ampla variedade de diâmetros internos de coluna para escalabilidade previsível e capacidade de carregamento aprimorada.

Frações de alta pureza e maiores rendimentos

Frações de alta pureza e maiores rendimentos

A purificação de oligonucleotídeos de alta pureza e qualidade é fundamental para minimizar as preocupações com a segurança e a eficácia relacionadas a impurezas indesejadas em estudos toxicológicos. As colunas preparativas de OBD XBridge de 2,5 µm para oligonucleotídeos de alta eficiência facilitam o isolamento de impurezas iniciais e coeluentes, mantendo o perfil cromatográfico sem comprometer a alta recuperação.

"As colunas de OBD Waters XBridge BEH C18 de 300 Å e 5 µm mostraram uma melhoria definitiva na remoção de impurezas de eluição precoce."

- Amy Howie, Diretora de Qualidade e Cumprimento de Produtos, Oligo Factory, Inc.

- Amy Howie, Diretora de Qualidade e Cumprimento de Produtos, Oligo Factory, Inc.

A Oligo Factory é uma CMO líder, especializada em oligonucleotídeos personalizados para descoberta em estágio avançado, fases clínicas, diagnósticos e RUO, com a missão de fornecer oligonucleotídeos econômicos e de alta qualidade, ao mesmo tempo em que oferece serviços flexíveis e individualizados para cada cliente. Eles estão trabalhando com a Waters Corporation para otimizar a purificação de moléculas de sgRNA essenciais para a pesquisa e a utilização clínica da edição de genes CRISPR. 

Spirale della molecola di DNA

Soluções

Estabilidade de partículas com proteção MaxPeak HPS

Estabilidade de partículas com proteção MaxPeak HPS
Colunas preparativas de OBD XBridge Premier BEH C18 de 130 Å, 300 Å e 5 µm para oligonucleotídeos

Os grupos fosfodiésteres de oligonucleotídeos podem adsorver os metais utilizados na construção de colunas padrão. A utilização de componentes de hardware de coluna de baixa adsorção pode melhorar o formato de pico ao minimizar a quelação, levando a uma retenção mais confiável e a parâmetros cromatográficos mais consistentes. As colunas preparativas de OBD XBridge Premier BEH C18 de 130 Å e 300 Å, 5 µm para oligonucleotídeos são fabricadas com componentes MaxPeak HPS depositados a vapor para aprimorar o formato do pico e melhorar a recuperação, e estão disponíveis em 10 mm de diâmetro interno e comprimentos de 50, 100 e 150 mm.

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  • Reversed-Phase Analysis
  • Oligonucleotides
  • Purification

Estabilidade de partículas e desempenho para desenvolvimento de métodos

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Colunas preparativas de OBD XBridge BEH C18 para oligonucleotídeos

As colunas preparativas de OBD XBridge para oligonucleotídeos testadas em lote e certificadas por CQ estão disponíveis em uma ampla variedade de diâmetros e vários comprimentos para opções de purificação em escala de laboratório que são previsíveis e flexíveis para aumento de escala direto. Os tamanhos incluem:

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Formulações de oligonucleotídeos e ácidos nucleicos de alta pureza para comparação de desempenho.

Formulações de oligonucleotídeos e ácidos nucleicos de alta pureza para comparação de desempenho.

Padrões de ácidos nucleicos/oligonucleotídeos para comparação de desempenho

Padrões de ácidos nucleicos/oligonucleotídeos para comparação de desempenho
Padrões e reagentes de ácidos nucleicos e oligonucleotídeos

Complementando nossas colunas de fase reversa para oligonucleotídeos, a Waters fornece uma variedade de padrões analíticos de alta qualidade e rastreáveis por lote para facilitar o teste de adequação do sistema, o desenvolvimento de métodos e a solução de problemas. Isso inclui o Padrão MassPREP para oligonucleotídeos, que contém uma escada de oligodT de 15 a 35 mer para verificar o controle de qualidade de todas as colunas para oligonucleotídeos da Waters, um padrão de ssDNA de 20 mer para comparação de fragmentação de LC– MS/MS e análise de sequência, um oligonucleotídeo antissentido conjugado com lipídio (ASO) fortemente modificado, escadas de ssDNA e dsDNA e muito mais.

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Proteja e prolongue a vida útil da coluna analítica.

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Pré-coluna preparativa para vida útil estendida da coluna

Pré-coluna preparativa para vida útil estendida da coluna
Pré-coluna preparativa XBridge BEH C18 para oligonucleotídeos

As colunas preparativas de OBD XBridge BEH C18 para oligonucleotídeos estão disponíveis com pré-colunas. Os cartuchos da coluna são preenchidos com o mesmo sorvente e podem ser utilizados para evitar a contaminação e a incrustação das colunas preparativas, resultando em uma vida útil mais longa da coluna. Colocar essa unidade de pré-coluna na frente da coluna preparativa proporcionará uma vida útil mais longa da coluna e reduzirá os custos de purificação.

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Aplicações

Os grupos fosfodiésteres dos oligonucleotídeos podem adsorver os metais encontrados nos corpos das colunas e nos frits. Utilizando a baixa adsorção, o hardware de coluna de Superfícies de alto desempenho MaxPeak pode melhorar o formato do pico ao minimizar a quelação, levando a uma retenção mais confiável e a parâmetros cromatográficos mais consistentes. As colunas preparativas de OBD XBridge Premier BEH C18 para oligonucleotídeos são fabricadas com componentes depositados a vapor MaxPeak HPS para aprimorar o formato do pico e melhorar a recuperação.

Os grupos fosfodiésteres dos oligonucleotídeos podem adsorver os metais encontrados nos corpos das colunas e nos frits. Utilizando a baixa adsorção, o hardware de coluna de Superfícies de alto desempenho MaxPeak pode melhorar o formato do pico ao minimizar a quelação, levando a uma retenção mais confiável e a parâmetros cromatográficos mais consistentes. As colunas preparativas de OBD XBridge Premier BEH C18 para oligonucleotídeos são fabricadas com componentes depositados a vapor MaxPeak HPS para aprimorar o formato do pico e melhorar a recuperação.

Notas de aplicação

Notas de aplicação

Um desafio da purificação de oligonucleotídeos em escala laboratorial é o isolamento de impurezas que podem ser semelhantes às moléculas de destino. As partículas de tamanho pequeno geralmente não são predominantes na purificação em escala de laboratório devido à alta pressão que podem gerar. As colunas preparativas de OBD XBridge BEH C18 de 2,5 µm para oligonucleotídeos testadas em lote da Waters oferecem um novo nível de garantia para o isolamento eficiente e de baixa pressão de sgRNA CRISPR, siRNA e oligo-conjugados complexos. Os parâmetros de purificação otimizados com o modo de gradiente focado e a fase móvel sem hexafluoroisopropanol permitem uma purificação altamente eficiente, de alto rendimento, sem riscos e econômica.

Um desafio da purificação de oligonucleotídeos em escala laboratorial é o isolamento de impurezas que podem ser semelhantes às moléculas de destino. As partículas de tamanho pequeno geralmente não são predominantes na purificação em escala de laboratório devido à alta pressão que podem gerar. As colunas preparativas de OBD XBridge BEH C18 de 2,5 µm para oligonucleotídeos testadas em lote da Waters oferecem um novo nível de garantia para o isolamento eficiente e de baixa pressão de sgRNA CRISPR, siRNA e oligo-conjugados complexos. Os parâmetros de purificação otimizados com o modo de gradiente focado e a fase móvel sem hexafluoroisopropanol permitem uma purificação altamente eficiente, de alto rendimento, sem riscos e econômica.

Notas de aplicação

Notas de aplicação

A tecnologia CRISPR desempenha um papel fundamental na modificação da edição genética. A tecnologia utiliza um RNA de guia único (sgRNA), daí a importância da pureza do sgRNA para melhorar a exatidão e a precisão terapêutica. As colunas tradicionais de HPLC de 8 a 20 µm disponíveis no mercado podem não atender à necessidade de segurança e exatidão de medicamentos devido à falta de poder de resolução necessário para isolar as impurezas das sequências de destino. 

A nova coluna XBridge BEH C18 de 300 Å e 5 µm para oligonucleotídeos testada em lote melhora a eficiência da separação e o mecanismo de retenção para ácidos nucleicos maiores, como sgRNA e aplicações relacionadas. Os tamanhos menores de partículas e as dimensões otimizadas dos poros com 300 Å são aplicados para atingir novos níveis de pureza de passagem única, necessários para aplicações de CRISPR de alta precisão.

A tecnologia CRISPR desempenha um papel fundamental na modificação da edição genética. A tecnologia utiliza um RNA de guia único (sgRNA), daí a importância da pureza do sgRNA para melhorar a exatidão e a precisão terapêutica. As colunas tradicionais de HPLC de 8 a 20 µm disponíveis no mercado podem não atender à necessidade de segurança e exatidão de medicamentos devido à falta de poder de resolução necessário para isolar as impurezas das sequências de destino. 

A nova coluna XBridge BEH C18 de 300 Å e 5 µm para oligonucleotídeos testada em lote melhora a eficiência da separação e o mecanismo de retenção para ácidos nucleicos maiores, como sgRNA e aplicações relacionadas. Os tamanhos menores de partículas e as dimensões otimizadas dos poros com 300 Å são aplicados para atingir novos níveis de pureza de passagem única, necessários para aplicações de CRISPR de alta precisão.

Notas de aplicação

Notas de aplicação

Os dados falam por si

Os dados falam por si
Determinações de pureza de fração para uma corrida de purificação de 25 mg utilizando uma nova coluna preparativa de OBD XBridge BEH C18 de 130 Å e 2,5 µm para oligonucleotídeos.
(A) Comparação dos cromatogramas obtidos para o fosfato de hidrocortisona utilizando as colunas MaxPeak Premier (traço preto) e padrão (traço cinza) ACQUITY UPLC BEH C18 de 130 Å, 1,7 µm, 2,1 x 50 mm. O carregamento de massa foi de 2 ng. As separações de gradiente de acetonitrila foram realizadas com uma fase móvel aquosa de formiato de amônio 10 mM (pH 3,0), uma taxa de fluxo de 0,5 mL/min e uma temperatura de 30 °C. Os picos foram detectados utilizando um detector PDA, com o canal de 246 nm exibido. (B) Gráfico log a log da área do pico vs. carregamento de massa para fosfato de hidrocortisona separado utilizando colunas MaxPeak Premier (símbolos pretos) e padrão (símbolos cinza), com carga de massa de 2-200 ng.

Recursos

  • White Paper

Colunas de HPLC de baixa adsorção baseadas em Superfícies de alto desempenho MaxPeak

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