從合成過程中產生的不純物純化製備出全長寡核苷酸產物,在確保這類產物應用於製藥與診斷所能發揮的功能、安全性和成效方面是非常重要的步驟。寡核苷酸的性質屬於聚陰離子,因此,以高選擇性和解析度純化寡核苷酸並不容易。離子對逆相層析(IP-RP)已經發展成一項主要技術,也是會優先選擇的技術。
在高pH值/高溫範圍內能保持穩定、通過批次檢驗且能控制二次交互作用程度的管柱,有助於快速消除耗時的瓶頸。Waters XBridge BEH C18管柱最佳充填(OBD)寡核苷酸分析管柱是製備級管柱的不二之選,應用於化學修飾程度複雜的各種寡核苷酸純化製備時,能發揮優異的效能、一致的擴充性,以及相當高的回收率。
就長寬比較小的製備級管柱而言,以小顆粒進行高壓漿料充填所能達到的層床密度,理想程度通常不若精心設計過的分析級管柱。進樣端軸向壓縮過度,可能會導致顆粒破裂、形成通道,以及層床滲透力降低。精心設計的OBD管柱具有諸多優勢,包括管柱使用壽命較長、效率較高、峰型較好以及背壓較低。
核酸(包括寡核苷酸)是聚陰離子(帶負電荷),因此會穩定吸附於不鏽鋼管柱內層的金屬氧化物表面。Waters XBridge Premier BEH C18 OBD寡核苷酸分析管柱的硬體零組件經過改良,採用惰性有機/無機雜化矽基表面化學材料,能大幅降低核酸的非特異性吸附(NSA),應用於某些需從原料藥中分離出來進一步研究的化合物,能充分提高回收率和再現性。XBridge Premier BEH C18 OBD寡核苷酸分析管柱也不需要管柱鈍化/樣品活化流程,可以立即應用於餾分收集分析。
Waters的乙烯架橋雜化(BEH)技術通過批次檢驗認證,用於寡核苷酸分析能確實發揮更優異的效能和再現性,也適合升級擴充應用於純化製備。在寡核苷酸分離處理和純化製備作業中,高溫和高pH值是盡量減少二次交互作用的普遍策略。BEH顆粒技術能承受高pH值、高溫及高含量添加劑等嚴峻條件,這些通常是寡核苷酸分析不可或缺的條件。
XBridge OBD製備級寡核苷酸分析管柱通過批次檢驗和品質管控認證,其再現性和方法轉移等各方面的效能格外有保障,應用於化學特性多樣豐富的標準/新型siRNA、ASO與寡核苷酸試劑,也能充分因應新興純化製備方面的需求。每一批BEH C18寡核苷酸吸附劑均以Waters MassPrep寡核苷酸標準品進行過品質管控檢驗並精心挑選,更通過乙酸三乙銨IP-RP分離處理作業中嚴謹的解析度與峰拖尾評估。 這類吸附劑經過仔細檢查,粒徑大小分2.5和5 µm兩種,孔隙大小則分130和300 Å兩種,因此,寡核苷酸化學家在純化各種不同的合成產物時,就能有更豐富的選擇。
XBridge和XBridge Premier OBD製備級寡核苷酸分析管柱的填料是Waters BEH(乙烯架橋雜化)C18雜化二氧化矽顆粒,在高pH值和高溫條件下,不但管柱使用壽命長,分離效能也十分出色。只要妥善保養,BEH C18寡核苷酸分析管柱的進樣次數可以超過1,0000次,且不會發生效率或滯留性降低的問題。
在製備級純化製備作業中,上樣量會受諸多參數影響。管柱效率、孔隙大小、粒徑大小和方法參數全都能發揮相當大的影響力。孔隙較大的管柱應用於較大的分析物,能夠發揮較佳的質量傳遞效能,也能得到更銳利的峰型。由於表面積縮小,上樣量可能會較低。Waters XBridge OBD製備級寡核苷酸分析管柱分多種不同的孔隙大小和管柱內徑,適合應用於穩定擴充升級與提升上樣量。
高純度的優質寡核苷酸純化製備非常重要,能大幅降低毒理學研究中與非必要不純物相關的安全性和有效性疑慮。2.5 µm XBridge OBD製備級寡核苷酸分析管柱能發揮相當高的效率,有助於分離處理早期不純物與共洗脫不純物,同時保持層析分離特性,不影響高回收率。
Waters提供一系列能進行批次溯源的優質分析標準品,有助於進行系統適用性測試、方法開發及狀況排除,也讓我們的逆相寡核苷酸分析管柱產品更加完整。這些標準品包括Waters MassPREP寡核苷酸標準品(含15-35mer oligodT分子量標準品),適用於所有Waters品牌寡核苷酸分析管柱的品質管控檢查流程;20mer ssDNA標準品,適用於LC-MS/MS碎片和序列基準分析;脂質共軛且高度修飾的反義寡核苷酸(ASO)、ssDNA和dsDNA分子量標準品等。
XBridge BEH C18 OBD製備級寡核苷酸分析管柱可使用保護管柱。匣式管柱採用相同的吸附劑填料,能用於防止製備級管柱污染和積垢,因此能夠延長管柱使用壽命。將此保護組件置於製備級管柱前方,可延長管柱使用壽命,並降低純化成本。
CRISPR技術在基因編輯改造方面發揮相當重要的作用。這項技術會採用單股RNA (sgRNA),因此,sgRNA純度是提高治療準確度和精密度的重要關鍵。市面上的8~20 µm傳統HPLC管柱可能無法符合藥物安全和準確度方面的需求,原因在於其解析力不足以將靶標序列中的不純物分離出來。
新型的XBridge BEH C18, 300 Å, 5 µm寡核苷酸分析管柱通過批次檢驗,應用於sgRNA等大分子核酸及相關用途,能夠發揮更好的分離處理效率和滯留機制。較小的粒徑,經過最佳化處理的300 Å孔隙尺寸,能用於達到新的單次通過純度標準,充分因應高精密度CRISPR用途的需求。
CRISPR技術在基因編輯改造方面發揮相當重要的作用。這項技術會採用單股RNA (sgRNA),因此,sgRNA純度是提高治療準確度和精密度的重要關鍵。市面上的8~20 µm傳統HPLC管柱可能無法符合藥物安全和準確度方面的需求,原因在於其解析力不足以將靶標序列中的不純物分離出來。
新型的XBridge BEH C18, 300 Å, 5 µm寡核苷酸分析管柱通過批次檢驗,應用於sgRNA等大分子核酸及相關用途,能夠發揮更好的分離處理效率和滯留機制。較小的粒徑,經過最佳化處理的300 Å孔隙尺寸,能用於達到新的單次通過純度標準,充分因應高精密度CRISPR用途的需求。