離子對逆相(IPRP)層析是用於合成寡核苷酸表徵分析和不純物分析的理想方法。相較於包括陰離子交換(AEX)、HILIC及SEC在內的任何其他層析技術,這個方法更能協助科學家解析合成及製程相關不純物。這項技術也有其難度。有很多因素可以直接影響分離效能和再現性,包括離子對試劑的純度和穩定性、對層析硬體的非特異性吸附,以及吸附劑的批次間差異。IPRP需靠高pH值和高溫條件才能展現理想的分離效果,因此,管柱材料必須能耐受高pH值和高溫。
Waters寡核苷酸逆相管柱具以下特點,能提高分析結果的可信度:
核酸(包括寡核苷酸)是聚陰離子(帶負電荷),很容易吸附於不鏽鋼管柱的金屬氧化物表面。Waters MaxPeak Premier寡核苷酸分析管柱採用惰性雜化有機/無機矽膠表面化學材料,能消除絕大部分的核酸NSA,因而能提高靈敏度、再現性和生產力。 Waters支援實驗室省去耗時的分析前管柱鈍化與樣品活化步驟。
合成寡核苷酸的IP-RP層析分離能依據大小、電荷和疏水性的細微變化解析樣品成分。Waters ACQUITY(UPLC:1.7 µm粒徑大小)和XBridge(HPLC/UHPLC:2.5 µm粒徑大小)Premier BEH C18寡核苷酸分析管柱能發揮優異的寡核苷酸樣品解析度、靈敏度和再現性。
Waters ACQUITY和XBridge Premier寡核苷酸分析管柱填充Waters BEH(乙烯架橋雜化)C18雜化矽膠顆粒,在高pH值和高溫條件下,不但管柱使用壽命長,分離效能也十分出色。
Waters提供一系列優質且可追溯批號的分析標準品,這些標準品與寡核苷酸逆相管柱相輔相成,有助於進行系統適用性測試、方法開發以及狀況排除。這些標準品包括:Waters MassPREP寡核苷酸標準品(含15-35mer oligodT分子量標準品),適用於所有Waters品牌寡核甘酸管柱的品管檢查流程;20mer ssDNA標準品,適用於LC-MS/MS碎片和序列基準分析;脂質共軛且高度修飾的反義寡核苷酸(ASO)、ssDNA和dsDNA分子量標準品等。
ACQUITY和XBridge Premier BEH C18寡核苷酸分析管柱均提供適用於VanGuard FIT管柱的規格,包括一個一體成形的5 mm保護柱匣,其中充填了相同的吸附劑,能發揮防止分析管柱積垢的作用。一體成形設計,完全不影響樣品解析度。倘若管柱匣結垢,很容易就能更換管柱匣,充分延長分析管柱使用壽命。