RapiZyme RNase
可調整RNA酶解能將LC-MS定序流程化繁為簡
要確認CRISPR sgRNA和mRNA的特性、序列及純度，必須進行相當嚴謹的表徵分析。這幾種RNA分子功能、修飾和變異均相當複雜，因此相當適合用於進行LC-MS分析。由於分子大小的緣故，進樣前通常必須以諸如RNase之類的核酸內切酶進行酶解。使用離子對逆相(IPRP)或親水層析分離(HILIC)結合質譜(MS)，很容易就能偵測到產生的酶解產物。
Waters RapiZyme MC1和RapiZyme Cusativin在許多二核苷酸位點都能發揮控制得宜且可再現的RNA切割作用。RapiZyme RNase會產生各種獨特且互補重疊的RNA片段。就LC-MS使用者而言，這樣的酶解作用是可以調整的，有助於提高層析峰鑑定可信度，因此能夠擴大序列覆蓋率並提供更多與分子相關的見解。每支試管各含10,000單位的RapiZyme RNase，這樣的酶試劑足以完成多達100次10 µg RNA樣品的酶解反應。
- 盡可能提高mRNA和sgRNA序列覆蓋率
- 使用專為LC-MS分析而設計的RNase
- 進行酶解時不需使用變性劑和RNase抑制劑
- 使用環狀磷酸鹽產品提高訊號清晰度與靈敏度
- 加速RNA治療藥物的開發與分析
RapiZyme RNase
規格
概述
- 以更完整的RNA LC-MS表徵分析序列覆蓋率改善結果
- 使用高純度、高活性酶試劑的提高效率，可進行多達100次反應（因底物而異）
- 使用即用型自動作業酶解實驗步驟簡化分析流程
- 運用可靠且不需額外使用抑制劑試劑的熱滅活，避免過度酶解及污染儀器/管柱
- 使用兩種酶專一性地標靶尿苷或胞苷殘基
- waters_connect MAP Sequence整合酶解特性，能徹底發揮靈敏度並簡化數據解析作業
- 與IonHance HFIP移動相添加劑結合能將不必要的鈉鉀加成物含量減少兩倍
建議用途：用於改善CRISPR sgRNA和mRNA治療藥物的序列覆蓋率。
深入探索酶解原理
RapiZyme MC1和RapiZyme Cusativin的切割專一性是可再現的。RapiZyme MC1和RapiZyme Cusativin的研究應用了二重標識的熱淬滅RNA底物。以RNase切割有FAM標記的測試底物後，將這個底物與其黑洞猝滅劑(Black Hole Quencher)複合體分離。接著使用吸光度技術偵測酶解物，定量量測標靶切割的情況。額外應用了陰性對照的HEX標記基質（例如polyA），進行非靶標切割評估。FAM/HEX的比例有助於深入瞭解各種酶的活性，且可在溫度、pH值、緩衝液成分、酶單位和時間等不同的條件下進行。進行這些分析是為了判斷RapiZyme Cusativin和RapiZyme MC1的理想反應條件。
具體說明
RapiZyme MC1和RapiZyme Cusativin是高純度、高活性的RNase，能發揮具互補作用的切割專一性。這些重組過且可調整的酶能協助控制合成寡核苷酸、mRNA和sgRNA的酶解，從而加速RNA治療藥物的開發和分析。RapiZyme MC1在pH值8的條件下用於[A/U/C]pU二核苷酸鍵，在酶解方面表現出理想的選擇性和效率；RapiZyme Cusativin在pH值9的條件下用於Cp[U/A/G]二核苷酸序列，在切割方面表現出理想的選擇性和效率。可以更改溫度、pH值以及酶與基質比等參數，以利對於特定樣品發揮理想的分析效果。
全面保障
RapiZyme MC1和RapiZyme Cusativin的基質嵌合和切割作用特別容易出現在特定的二核苷酸位點。RapiZyme MC1特別容易在尿苷的5'端進行切割，RapiZyme Cusativin特別容易在胞苷的3'端進行切割。兩種酶的裂解產物都是可以控制及重複的。這些RNase的特殊性質會導致部分酶解，除了產生獨特且重疊的片段之外，還會產生較長的產物。部分酶解能提供大量資訊，讓片段分解成更多樣化的結構，利於進行結構解析研究。waters_connect MAP Sequence之類的資訊系統工具會根據所選酶的已知切割特性預測電腦模擬片段(mRNA Cleaver)，並且對照測得資料與RNA分子研究標的的序列。
