Método UPLC-MS/MS altamente sensible y robusto para la cuantificación de nitrosaminas a nivel de impurezas en los principios activos del grupo ‘sartanes’ y ranitidina

Este resumen de la aplicación muestra un método LC-MS/MS altamente sensible y robusto para la cuantificación de seis nitrosaminas a nivel de impurezas (NDMA, NDEA, NEIPA, NDIPA, NDBA y NMBA) en soluciones que contienen los principios activos irbesartán, losartán, valsartán (sartanes) y ranitidina.

Ventajas

El espectrómetro de masas Xevo TQ-XS, acoplado a un sistema ACQUITY UPLC I-Class PLUS con una columna HSS T3 para la separación, permite la cuantificación de alta sensibilidad de nitrosaminas a nivel de impurezas en principios activos del grupo ‘sartanes’ y ranitidina, logrando límites inferiores de cuantificación (LLOQ) de 0,1 ng/mL.

Se considera que los compuestos N-nitroso tienen una potencia cancerígena extremadamente alta, y varios medicamentos han sido retirados del mercado debido a la presencia de estas impurezas.^1,2 Para garantizar la seguridad de los productos farmacéuticos, se deben tomar medidas para averiguar el origen de estas impurezas y garantizar su eliminación del principio activo final. Se puede encontrar información sobre cómo evaluar y controlar estas impurezas cancerígenas en la guía ICH M7 (R1).³

Aquí se presenta un método de LC-MS/MS robusto y altamente sensible para la cuantificación simultánea de seis nitrosaminas a nivel de impurezas (NDMA, NDEA, NEIPA, NDIPA, NDBA y NMBA). Este método proporciona valores de LLOQ de 0,1 ng/mL (3 pg en columna) con un rango dinámico lineal de 0,1-100 ng/mL.

Se prepararon soluciones patrón que contenían las seis nitrosaminas a nivel de impurezas y cuatro principios activos (ranitidina y sartanes) a partir de una solución stock concentrada que contenía 1 μg/mL de cada nitrosamina y ~100 μg/mL de cada principio activo en metanol:agua (20:80). Los patrones de calibración (0,05-100 ng/mL) se prepararon en agua por dilución en serie de la solución de 1 µg/mL y se colocaron en una placa de recolección de muestras de 96 pocillos (número de referencia 186005837). La placa se selló utilizando una tapa sellante de silicona/PTFE precortada para 96 pocillos (número de referencia 186006332). Las condiciones de LC-MS se enumeran en la tabla 1, mientras que las transiciones de MRM específicas para las nitrosaminas y los principios activos utilizados para el análisis se enumeran en la tabla 2. El análisis de LC-MS/MS se realizó con un espectrómetro de masas de cuadrupolos en tándem Xevo TQ-XS de Waters acoplado a un sistema ACQUITY UPLC I-Class PLUS. La separación cromatográfica de las nitrosaminas y los principios activos se logró con una columna ACQUITY HSS T3, basada en un método anterior.⁴ Gracias a su química polar única, la columna ACQUITY HSS T3 proporcionaba una excelente capacidad de retención para las nitrosaminas, en particular para la retención de la nitrosamina más polar, la NDMA (figura 1). Xevo TQ-XS MS, equipado con la novedosa guía de iones StepWave y la sonda APCI IonSABRE, mejoró el muestreo de iones en la fuente, permitió una transferencia de iones eficiente y mejoró la ionización. Se utilizó software cromatográfico y de procesamiento de datos MassLynx (v4.2) y TargetLynx XS para la adquisición y cuantificación de datos. La misma funcionalidad cuantitativa también está disponible con la solución preparada para el cumplimiento normativo de Waters, MassLynx Security. El rendimiento del sistema de triple cuadrupolo se pone de manifiesto en la tabla 3, mientras que el rendimiento cromatográfico, resaltando los LLOQ de las seis nitrosaminas a nivel de impurezas, se muestra en la figura 2. Con este ensayo desarrollado, se lograron LLOQ de 0,1 ng/mL, con exactitudes y RSD ≤15%, lo que demuestra un método altamente sensible, exacto y robusto para la cuantificación de nitrosaminas a nivel de impurezas.

Se ha desarrollado con éxito un método UPLC-MS/MS para la cuantificación exacta, robusta y altamente sensible de seis nitrosaminas a nivel de impurezas en una única determinación, con el que se obtienen LLOQ de 0,1 ng/mL utilizando el sistema ACQUITY UPLC I-Class PLUS y el espectrómetro de masas de cuadrupolos en tándem Xevo TQ-XS. La columna ACQUITY HSS T3 proporcionó una excelente capacidad de retención y selectividad para seis nitrosaminas a nivel de impurezas. Este método ofrece un punto de partida práctico para la cuantificación de alta sensibilidad de nitrosaminas o compuestos similares.

1. https://www.uspharmacist.com/article/ fda-update-on-recent-voluntary-arb-drug-recalls
   
2. https://www.fda.gov/newsevents/ press-announcements/ statement-alerting-patients-and-health-careprofessionals- ndma-found-samples-ranitidine 
3. ICH M7 R1, Assessment and Control of DNA Reactive (Mutagenic) Impurities in Pharmaceuticals to Limit Potential Carcinogenic Risk, International Conference on Harmonization, marzo de 2018. 
4. Maziarz, M.; Naughton, S. Use of a proprietary polar column chemistry for the separation of nitrosamines in sartan and ranitidine drug substances. Nota técnica de Waters. 720006738ES. 2020.