Un bioprocédé efficace, du développement des lignées cellulaires à celui du procédé en amont, nécessite des plateformes analytiques sensibles, robustes et à haute cadence. Les solutions Bioprocessing Walk-up de Waters sont des options idéales pour la technologie PAT (Process Analytical Technology) « at-line ». Elles simplifient les mesures complexes des paramètres critiques des procédés (CPP) et des attributs critiques de qualité (CQA) effectuées en routine et s’intègrent aux bioréacteurs tels que les systèmes Ambr 15 et Ambr 250 de Sartorius.
La plateforme LC/MS automatisée est conçue pour accélérer les bioprocédés en amont avec des délais de réponse rapides en :
rationalisant le workflow, de la préparation des échantillons à l’acquisition des données, en passant par le traitement des données pour les échantillons provenant de bioréacteurs
L’association du système BioAccord et du système Automation Portal est une solution PAT basée sur la LC/MS qui propose des workflows automatisés de l’échantillon au résultat pour l’évaluation rapide des CPP et des CQA pour les échantillons provenant de bioréacteurs.
Diagrammes de tendance typiques de métabolites illustrant l’échantillonnage en bioréacteur au fil du temps. Résultats représentatifs pour le tryptophane (concentrations absolues) et la choline (tendances relatives).
Chromatogrammes UV et MS TIC représentatifs de l’échantillon de milieu après purification de la protéine A. À droite, détermination du taux de glycanes dans l’échantillon purifié de protéine A, montrant un diagramme à barres superposé pour chaque glycane en fonction du bioréacteur et au fil du temps.
Exemple d’évolution de l’abondance de la choline dans les milieux de culture cellulaire épuisés illustré par le diagramme à barres des tendances pour 12 bioréacteurs différents sur plusieurs jours.
Diagramme de tendance de la réponse brute à partir de 100 injections. (A) = Leucine, (B) = Leucine marquée par un isotope stable (C) = Rapport de réponse leucine/leucine marquée par un isotope stable. Le graphique montre que la variation du signal dans la réponse brute est corrigée par l’utilisation d’un étalon interne.
La figure montre les séparations HT SEC de NISTmAb avec pour phase mobile du DPBS 1,5X et des volumes d’injection de 0,8 µL pour les colonnes de 150 mm et de 0,5 µL pour les colonnes de 100 mm. Colonnes et débits : A) 1,7 µm (150 mm) à 0,50 mL/min, B) 2,5 µm (150 mm) à 0,50 mL/min, C) 2,5 µm (150 mm) à 1,00 mL/min, D) 1,7 µm (100 mm) à 0,75 mL/min, E) 1,7 µm (100 mm) à 0,90 mL/min. La détection de l’absorbance UV a été réalisée à une fréquence de 20 à 40 Hz.
Chromatogrammes d’ions extraits (XIC) superposés couvrant les principaux composés et les paires isobares isoleucine/leucine et acide isocitrique/acide citrique.
Comparaison de la séparation LC/MS de l’étalon de sous-unité mAb sur une colonne BioResolve Premier RP mAb Polyphenyl 450 Å 2,7 µm de 2,1 x 20 mm (gradient de 4 minutes) et sur une colonne BioResolve RP mAb Polyphenyl 450 Å 2,7 µm de 2,1 x 100 mm (gradient de 20 minutes).
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