Columnas de fase reversa para péptidos

Cromatografía en fase reversa

La cromatografía en fase reversa con reactivos de par iónico como TFA (ácido trifluoroacético) y ácido fórmico puede proporcionar separaciones de alta resolución de mezclas complejas de péptidos (p. ej., digestiones tripsínicas de proteína o secuencias largas de péptidos sintéticos) cuyas secuencias pueden diferenciarse en un solo aminoácido. En general, la hidrofobicidad del péptido determina el orden de elución, según el cual primero se eluyen las proteínas menos hidrofóbicas.

Los factores como la composición de las partículas (sílice frente a híbridas), el tamaño de poro (130 Å frente a 300 Å), la densidad del ligando, así como las condiciones de separación (por ejemplo, duración del gradiente, temperatura de separación, caudal) tienen una función importante para la obtención de una separación que cumpla los requisitos de la aplicación.

Al igual que sucede con otras bioseparaciones, cuando se utilizan tamaños de partículas más pequeños, para esta aplicación tan exigente, las opciones de columnas para UPLC/UHPLC proporcionan una resolución superior de los componentes y en menos tiempo que las columnas para HPLC.

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Columnas ACQUITY Premier Peptide

Las columnas ACQUITY Premier de Waters representan las innovaciones tecnológicas más recientes y proporcionan el más alto nivel de rendimiento, flexibilidad y garantía cromatográficos para mejorar las capacidades de los laboratorios científicos de todo el mundo.

Proporcionan el rendimiento cromatográfico que se espera de nuestras fiables tecnologías de partícula.
Al utilizar la tecnología de superficie de alto rendimiento MaxPeak (HPS) en el diseño de hardware de columnas, las columnas ACQUITY Premier ofrecen mejoras significativas en la reproducibilidad, la forma de los picos y la recuperación al minimizar las interacciones entre analito y superficie.
Reducen la necesidad de aplicar procedimientos de pasivación prolongados o de utilizar aditivos complejos que se suelen requerir para alcanzar un rendimiento óptimo con las columnas de acero inoxidable tradicionales.

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Columnas ACQUITY UPLC Peptide

Las columnas ACQUITY UPLC Peptide BEH C18 de 130 Å o 300 Å ofrecen un amplio intervalo de pH utilizable y una estabilidad de temperatura excepcional para aplicaciones que van desde la proteómica hasta el mapeo de péptidos. Las columnas ACQUITY UPLC Peptide CSH C18 de 130 Å con una superficie con carga positiva baja se pueden usar con los eluyentes estándar que contienen TFA o con un modificador ácido más débil, como el ácido fórmico, lo que elimina la necesidad de decidirse entre un eluyente de fase reversa que proporcione picos bien definidos o uno que minimice la reducción de la señal de MS.

La opción de columna Peptide HSS T3, 100 % de base de sílice, es la opción ideal para la separación de péptidos pequeños e polares, ya que la retención es mayor que la que se obtiene al utilizar columnas de separación de péptidos híbridas BEH o CSH de Waters. También se dispone de columnas que contienen partículas de XSelect Peptide HSS T3 de 2,5 µm XP o 5 µm para aplicaciones para UHPLC o HPLC.

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Columnas XBridge Peptide BEH

Las columnas XBridge Peptide BEH C18 ofrecen un amplio intervalo de pH utilizable y una estabilidad de temperatura excepcional para aplicaciones que van desde la proteómica hasta el mapeo de péptidos. Estas columnas para HPLC son especialmente adecuadas para la cromatografía en fase reversa de una amplia gama de péptidos, incluidas especies grandes y pequeñas, ácidas y básicas, e hidrofílicas e hidrofóbicas. Estas columnas están disponibles en tamaños de poros de 130 Å y 300 Å y ofrecen diferentes selectividades de separación para utilizar con muestras difíciles.

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Columnas XSelect Peptide CSH

Las columnas para péptidos con partículas híbridas con superficie cargada (CSH) ofrecen una capacidad excepcional de carga de masa de péptidos que mantiene altas capacidades de pico al utilizar eluyentes que contienen ácido fórmico al 0,1 % o TFA al 0,1 %. Se adecúan mejor a compuestos de menos de 10 000 Daltons y ofrecen una selectividad de separación distinta a la del material BEH C18 de 130 Å. Columna escalable de 1,7 μm, 3,5 μm, 2,5 μm XP y preparativa de 5 μm para satisfacer las necesidades de cada aplicación. Sometidas a controles de calidad específicos con digestiones trípticas de citocromo-c y utilizando eluyente con ácido fórmico al 0,1 % para garantizar uniformidad entre columnas para los métodos validados.

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Separación de péptidos con LC-MS de nanoflujo y microflujo

El sistema LC-MS de microflujo para la identificación de péptidos se simplifica en gran medida con el dispositivo de separación iKey de 150 µm gracias a su diseño “plug and play” (conectar y usar) y a las conexiones de fluídica de menor tamaño. El dispositivo iKey ofrece un aumento de sensibilidad hasta 40 veces mayor en comparación con las columnas UPLC de 2,1 mm de diámetro interno.

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Columnas BioSuite

Columna BioSuite C18, 100 Å, 3 μm PA-A

Específicamente diseñadas para una excelente retención de péptidos polares.
Excelente rendimiento en separaciones por HPLC tradicionales con bajas concentraciones de TFA (por ejemplo, TFA al 0,025 %).

Columna BioSuite C18, 300 Å, 3,5 µm PA-B

Excepcional rendimiento en la separación de digestiones que contienen péptidos hidrofílicos, hidrofóbicos y básicos.
Capacidad y forma de pico mejoradas para las separaciones de péptidos que utilizan TFA (por ejemplo, TFA al 0,1 %).
Buena opción para la separación de fragmentos grandes de péptidos (p. ej., digestiones de Lys-C).

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Columnas BioSuite de fase reversa para péptidos

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Columnas Symmetry

Las columnas Symmetry de fase reversa con partículas de base de sílice se sintetizan con reactivos orgánicos ultrapuros, lo que da como resultado un material de alta pureza con una actividad silanólica muy baja. Al combinarse con la alta cobertura superficial de la fase enlazada, es posible obtener separaciones y recuperaciones excepcionales para péptidos.

Mayor control durante la fabricación para obtener resultados uniformes entre lotes y columnas.
Opciones de tamaño de poro de 100 Å y 300 Å para péptidos de tamaño pequeño o grande.
La química de columna SymmetryShield ofrece selectividad complementaria a la que se ofrece en las columnas Symmetry.
Las columnas SymmetryPrep hacen posible un escalado directo a la vez que se mantiene la resolución.

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Columnas Delta-Pak HPLC

Las columnas Delta-Pak para HPLC cuentan con partículas de 5 μm o 15 μm de forma esférica, 100 % de base de sílice, altamente estables, enlazadas y con end-capping. Estas columnas se ofrecen en dos tamaños distintos de poro (100 Å o 300 Å) con ligandos C4 o C18 para satisfacer distintas necesidades de selectividad y retención. Están disponibles en distintas configuraciones de columna y cartucho de 15 µm, lo que proporciona capacidades de escalado uniformes y predecibles para la purificación en una escala que va desde miligramos a gramos. La misma química también está disponible en partículas de 5 µm de mayor resolución, lo que permite comprobar fácilmente la pureza de las fracciones aisladas recolectadas a partir de cromatografía de purificación.