수년간 분석 과학자들은 서로 다른 특성을 가진 유기 용매와 역상 컬럼을 통해 스크리닝을 숙련되게 수행함으로써 목표로 설정한 선택성에 도달했습니다. 온도 및 기울기는 규칙적으로 조정되어 분해능을 향상시킵니다. 안정성이 보장된 현대적 컬럼을 이용하여 pH 농도에 관계없이 여러 가지 상황에서 이동상을 스크리닝할 수 있습니다.

pH의 미미한 증가 변화를 테스트하는 것은 분석법 개발에서 루틴 툴을 사용하는 것만큼 일반적이지는 않습니다. pH의 작은 변화는 용리 순서의 큰 변화로 이어지고, 심지어 한 pH 유닛의 10분의 3 범위를 넘어서기도 합니다. pH를 조절하여 견고한 분석법을 개발하는 것은 분명 가치있는 일이지만 크로마토그래퍼는 이러한 방법을 빈번하게 사용하지 않습니다.

서로 다른 pH의 이동상을 만드는 것은 노동집약적이고 많은 시간이 소요되는 일입니다. 월요일 오전마다 분석 전 준비를 위해 완충 용액을 만드는데 시간을 소비하십니까? 몇번의 측정이 필요합니까? 몇개의 용매 용기가 필요합니까? 그리고 그 용액은 매번 정확하게 동일합니까?

ACQUITY UPLC H-Class 시스템과 ACQUITY UPLC H-Class Bio 시스템은 고분해능 분리법을 개발하고 사용하기 위한 쿼터너리 기반의 우수한 크로마토그래피 시스템으로서, 이러한 시스템의 분석법 재현성에 기여하는 요인 중 하나가 완충 용액을 일관되게 만드는 것입니다. 이것이 Waters에서 자사의 쿼터너리 UPLC 시스템 각각에  Auto•Blend Plus 기술을 탑재한 이유입니다.

이동상의 자동 형성

Waters Auto•Blend 기술을 이용하여 저장 용기에 담긴 순수 용매나 농축 저장 용액으로부터 이동상을 자동으로 형성할 수 있습니다. 이 기술은 또한 선택한 이동상에 대해 원하는 pH 및 이온 강도를 보다 효율적으로 관리할 수 있게 합니다. 이 기술의 소프트웨어 알고리즘은 요구되는 pH를 완충 시스템의 정의에 기반하여 어떻게 제공할 지를 산정합니다. Waters의 기법은 확립된 산-염기 평형 원리를 바탕으로 합니다. 이 원리에서 원하는 pH의 완충 용액은 약한 산성 용액과 그에 부합하는 염기 용액을 혼합하여 만들어집니다.

Auto•Blend Plus는 크고 작은 분자의 분석법을 관리하는 데 사용될 수 있습니다.

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Since mobile phase combinations and gradients are automatically blended on-demand to meet the optimum retention and selectivity of the separation, Auto●Blend Plus technology is useful for routine assays, in complicated separations requiring multiple solvents, and in automatic method development or system flushing. It is included as a standard feature with the ACQUITY UPLC H-Class and H-Class Bio systems.

Makes method development more efficient:

• Explore all separation alternatives
• Test intermediate conditions
• Minimize errors in solution preparation

Streamlines routine analyses:

• Minimizes errors in solution preparation
• Conserves costly solvent use (and disposal)
• Readily switch between multiple methods

Programming with AutoBlend Plus

1. Use a pre-defined buffer system or create your own from any components that are suitable for your sample.
2. Directly program a gradient table in pH and salt concentration.
3. Program pH and salt concentration independently, using linear, concave, or convex curves for either or both. 

AutoBlend Plus also provides a graphic display of the programmed gradient, below.

Principles of Auto●Blend Plus Technology

Auto●Blend Plus Technology is the use of specific algorithms to program a quaternary solvent manager to deliver buffers of a specified pH and salt concentration. 

The function is derived from the  practice of preparing buffer solutions by blending acidic and basic  stock solutions.  In the quaternary solvent manager, the percentage of flow drawn from each of the four reservoirs provides the same blending as manual buffer preparation. 

A typical system configuration is shown in Figure 1. The software calculates the proportions of reservoirs A, B, C, and D based on the definitions of the buffer system.  Proportions are calculated from the known pKa of the buffer or from an empirical calibration table.  The required proportions from each reservoir are calculated at each pump stroke to deliver the pH and salt concentration specified by the separation method.  The system and software have been validated for accurate pH delivery, both at constant pH and with simple pH gradients.

Figure 1. Principle of Auto•Blend Plus Technology .  The four mobile phase reservoirs of the ACQUITY UPLC^® H-Class System are filled with concentrated stocks and the Auto•Blend Plus Technology algorithm is used to calculate the proportions required from each reservoir for a specified pH and salt concentration.

 For details, see the HPLC 2011 poster: Efficient Use of pH Gradients in the Ion Exchange Analysis of Proteins