La recrudescence de développement de thérapies à base d’oligonucléotides a conduit à l’apparition de pipelines en plein essor dans le secteur. Agissant au niveau de la transcription et de la traduction des gènes, ces médicaments à base d’acides nucléiques courts sont très prometteurs pour de nombreux troubles héréditaires et maladies courantes.
Les outils et techniques LC/MS de Waters jouent un rôle très important dans la confirmation de l’identité et de la pureté de ces médicaments, ainsi que dans la quantification de leur présence dans les biofluides.
Étude de cas : BioSpring implémente les flux de travail LC/MS de Waters pour les oligonucléotides afin d’étendre la gamme existante
Les colonnes et les systèmes MaxPeak Premier éliminent le caractère imprévisible des pertes d’analytes en raison d’interactions métalliques, qui peuvent être particulièrement accentuées sur des oligonucléotides à charge négative.
Simplifiez l’analyse biopharmaceutique LC/MS haute performance pour chaque utilisateur grâce au système LC/MS BioAccord de Waters avec ACQUITY Premier, une plateforme intégrée et conforme qui peut être déployée de la découverte aux laboratoires GxP.
Accélérez la caractérisation des oligonucléotides de synthèse avec le système de banc d’essai HRMS haute performance du spectromètre de masse Xevo G3 Q-Tof qui fournit des résultats qualitatifs et quantitatifs précis.
Élargissez le champ d’application de l’analyse de sensibilité optimale avec la spectrométrie de masse triple quadripolaire Xevo TQ Absolute de Waters, qui offre des niveaux inégalés de fiabilité, de reproductibilité et de performance pour vos applications d’oligonucléotides.
Test de l’inertie du système UPLC ACQUITY Premier et de la colonne OST ACQUITY Premier à l’aide de l’oligomère 21-nt : chromatogramme UV de la concentration la plus faible détectable (0,5 nM ou 5 femtomoles de l’oligonucléotide 21-mers chargé sur colonne) comparée à l’injection de blanc précédente.
Courbes d’étalonnage du modulateur d’expression génique GEM91 utilisant une colonne en acier inoxydable et un système classique (rouge), une colonne ACQUITY Premier et un système classique (bleu), ainsi qu’une colonne et un système ACQUITY Premier (violet). Les différentes tendances indiquent des différences marquées dans la récupération à l’aide des colonnes et des systèmes testés.
Chromatogrammes TUV et TIC illustrant les performances du système BioAccord lorsque l’étalon OST de 1 μM a été dilué 100 fois (chargement d’un échantillon de 100 fmoles). Les cinq oligonucléotides principaux sont clairement détectés dans les chromatogrammes UV et TIC, ce qui indique que la sensibilité du système et de la méthode LC/MS est appropriée pour détecter les impuretés d’oligonucléotides de faible niveau.
La séquence de l’échelle complète LC/MS/MS a été confirmée pour la séquence de l’ARN simple brin de 5'-UCGUCAAGCGAUUACAAGGTT-3'. L’expérience a été réalisée à l’aide du pic M4 comme ion précurseur. L’attribution des pics de fragmentation a été réalisée en comparant les masses théoriques à l’aide de simples calculs dans un fichier Excel. MaxEnt3 a été utilisé pour la déconvolution des charges et le désisotopage.
