Colonnes de phase inverse pour oligonucléotides

Colonnes de phase inverse pour oligonucléotides

Les colonnes de phase inverse pour oligonucléotides de Waters offrent une tolérance au pH et à la température inégalée dans le secteur, ainsi qu’une résolution exceptionnelle pour la caractérisation des oligonucléotides et l’analyse des impuretés. Chaque lot de sorbant est soumis à un contrôle qualité (QC) à l’aide d’étalons d’oligonucléotides pour garantir la performance et la reproductibilité interlots.

Les colonnes de phase inverse pour oligonucléotides de Waters offrent une tolérance au pH et à la température inégalée dans le secteur, ainsi qu’une résolution exceptionnelle pour la caractérisation des oligonucléotides et l’analyse des impuretés. Chaque lot de sorbant est soumis à un contrôle qualité (QC) à l’aide d’étalons d’oligonucléotides pour garantir la performance et la reproductibilité interlots.
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Présentation

La chromatographie en phase inverse avec appariement d’ions (IP-RP) est la technique idéale pour la caractérisation des oligonucléotides de synthèse et l’analyse des impuretés. Aucune autre technique chromatographique, y compris l’échange d’anions (AEX), la HILIC et la SEC, n’est aussi efficace que pour résoudre les impuretés liées à la synthèse et au processus. Toutefois, elle comporte aussi quelques inconvénients. De nombreux facteurs peuvent affecter directement la performance et la reproductibilité de la séparation, notamment la pureté et la stabilité des réactifs d’appariement d’ions, l’adsorption non spécifique sur le matériel chromatographique et les variations du sorbant d’un lot à l’autre. Pour obtenir des séparations optimales, l’IP-RP nécessite des conditions de pH et de température élevés. Il faut donc que les matériaux des colonnes aient une bonne tolérance au pH et à la température.

Obtenez des résultats fiables grâce aux colonnes de phase inverse pour oligonucléotides de Waters qui présentent les caractéristiques suivantes : 

  • Stabilité au pH et à la température inégalée dans le secteur grâce à la technologie de particules de silice hybride BEH C18 pour une résolution et une longévité exceptionnelles
  • Réduction considérable de l’adsorption non spécifique grâce à la technologie MaxPeak Premier HPS (High-Performance Surfaces) pour une sensibilité, une reproductibilité et une productivité maximales
  • Contrôle qualité à base d’oligonucléotides pour garantir la performance et la reproductibilité des séparations d’un lot à l’autre

Sensibilité et reproductibilité améliorées sans conditionnement de la colonne

Sensibilité et reproductibilité améliorées sans conditionnement de la colonne

Les acides nucléiques, y compris les oligonucléotides, sont polyanioniques (chargés négativement) et s’adsorbent facilement sur la surface d’oxyde métallique des colonnes en acier inoxydable. Les colonnes MaxPeak Premier Oligonucleotide de Waters ont une chimie de surface inerte hybride organique/inorganique à base de silice qui élimine presque totalement l’adsorption non spécifique des acides nucléiques, ce qui permet d’améliorer la sensibilité, la reproductibilité et la productivité.  Avec Waters, votre laboratoire peut gagner un temps précieux en supprimant les étapes de passivation de la colonne et de conditionnement de l’échantillon avant l’analyse.

Résolution exceptionnelle des oligonucléotides de synthèse

Résolution exceptionnelle des oligonucléotides de synthèse

La chromatographie IP-RP des oligonucléotides de synthèse permet de séparer les composés de l’échantillon sur la base de variations mineures de la taille, de la charge et de l’hydrophobicité. Les colonnes ACQUITY (UPLC : granulométrie de 1,7 µm) et XBridge (HPLC/UHPLC : granulométrie de 2,5 µm) Premier Oligonucleotide BEH C18 de Waters offrent une résolution, une sensibilité et une reproductibilité exceptionnelles pour les échantillons d’oligonucléotides.

Excellente durée de vie des colonnes

Excellente durée de vie des colonnes

Garnies de particules de silice hybride C18 BEH (particules hybrides à ponts éthane) de Waters, les colonnes ACQUITY et XBridge Premier Oligonucleotide font preuve d’une longévité remarquable dans des conditions de pH et de température élevés, tout en conservant une performance chromatographique exceptionnelle.

Solutions

Colonnes de 2,1 × 20 mm pour des séparations ultrarapides

Colonnes de 2,1 × 20 mm pour des séparations ultrarapides
Colonnes ACQUITY Premier 2,1 x 20 mm Oligonucleotide BEH C18

Les oligonucléotides et les acides nucléiques plus longs présentent un puissant mécanisme de liaison et d’élution, ce qui se prête parfaitement aux « gradients balistiques » et aux séparations ultrarapides, permettant d’améliorer la productivité dans les laboratoires d’analyse à haute cadence. Disponibles en tailles de pores de 130 Å et 300 Å, les colonnes ACQUITY Premier Oligonucleotide BEH C18 2,1 x 20 mm de Waters permettent des séparations ultrarapides d'oligonucléotides courts (10-40-mères) et longs (> 40-mères), respectivement.

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Colonnes MaxPeak Premier à larges pores (300 Å) pour les oligonucléotides longs

Colonnes MaxPeak Premier à larges pores (300 Å) pour les oligonucléotides longs
Colonnes MaxPeak Premier à larges pores (300 Å)

Les colonnes ACQUITY (1,7 µm) et XBridge (2,5 µm) Premier Oligonucleotide sont disponibles avec des pores de 130 et 300 Å qui offrent différentes capacités de rétention et de finesse des pics selon la longueur de l’oligonucléotide. La surface accrue des particules à pores de 130 Å améliore la rétention et la résolution des oligonucléotides courts (< ~40-mères), tandis que les particules à pores de 300 Å permettent une plus grande diffusion et une meilleure résolution des oligonucléotides plus longs (> ~40-mères).

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Étalons d’oligonucléotides/d’acides nucléiques pour mesurer les performances

Étalons d’oligonucléotides/d’acides nucléiques pour mesurer les performances
Étalons d’oligonucléotides/d’acides nucléiques

Waters propose une gamme d’étalons analytiques de haute qualité, traçables par lots, qui viennent compléter ses colonnes de phase inverse pour oligonucléotides afin de faciliter les tests d’aptitude du système, le développement de méthodes et le dépannage. Cette gamme comprend l’étalon d’oligonucléotides MassPREP de Waters, qui contient une échelle d’oligodT de 15 à 35-mères permettant de procéder au contrôle qualité de toutes les colonnes Waters pour oligonucléotides, un étalon d’ADNsb de 20-mères pour l’analyse comparative de la fragmentation LC-MS/MS et l’analyse de séquences, un oligonucléotide antisens (OAS) fortement modifié et conjugué à un lipide, des échelles d’ADNsb et d’ADNdb, et bien plus encore.

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Colonnes VanGuard FIT, pour une durée de vie prolongée

Colonnes VanGuard FIT, pour une durée de vie prolongée
Colonne VanGuard FIT

Toutes les colonnes ACQUITY et XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 sont disponibles au format VanGuard FIT. Ce format comprend une cartouche précolonne de 5 mm entièrement intégrée, garnie du même sorbant, qui agit comme une protection contre l’encrassement de la colonne analytique. Sa conception entièrement intégrée n’a aucun impact sur la résolution de l’échantillon. La cartouche peut être facilement remplacée en cas d’encrassement, ce qui prolonge la durée de vie de la colonne analytique.

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Applications

Waters a publié plus de 30 notes d’application sur la caractérisation des oligonucléotides et l’analyse des impuretés à l’aide de ses outils avancés de chromatographie liquide et de spectrométrie de masse dans le cadre d’applications thérapeutiques et diagnostiques. Les exemples récents suivants présentent notre expertise en matière d’applications et nos derniers outils de pointe.

Waters a publié plus de 30 notes d’application sur la caractérisation des oligonucléotides et l’analyse des impuretés à l’aide de ses outils avancés de chromatographie liquide et de spectrométrie de masse dans le cadre d’applications thérapeutiques et diagnostiques. Les exemples récents suivants présentent notre expertise en matière d’applications et nos derniers outils de pointe.

Notes d’application

Notes d’application

En tant qu’ARN double brin, les médicaments oligonucléotidiques à petit ARN interférent (siRNA) présentent des problèmes analytiques uniques. Ces notes d’application présentent des séparations chromatographiques avec et sans dénaturation.

En tant qu’ARN double brin, les médicaments oligonucléotidiques à petit ARN interférent (siRNA) présentent des problèmes analytiques uniques. Ces notes d’application présentent des séparations chromatographiques avec et sans dénaturation.

Notes d’application

Notes d’application

La séquence nucléotidique des oligonucléotides diagnostiques et thérapeutiques joue un rôle essentiel dans leur spécificité et leur fonction. Il est donc essentiel de la confirmer avec exactitude. Les workflows LC/MS permettent de déterminer la totalité de la séquence d’oligonucléotides et offrent la possibilité unique de confirmer l’identité et l’emplacement des nucléotides modifiés dans la séquence, qu’il s’agisse d’oligonucléotides synthétiques ou issus de la digestion par une nucléase d’acides nucléiques à chaîne plus longue (par exemple, workflow de cartographie d’oligonucléotides d’ARNm ou d’ADNsb).

La séquence nucléotidique des oligonucléotides diagnostiques et thérapeutiques joue un rôle essentiel dans leur spécificité et leur fonction. Il est donc essentiel de la confirmer avec exactitude. Les workflows LC/MS permettent de déterminer la totalité de la séquence d’oligonucléotides et offrent la possibilité unique de confirmer l’identité et l’emplacement des nucléotides modifiés dans la séquence, qu’il s’agisse d’oligonucléotides synthétiques ou issus de la digestion par une nucléase d’acides nucléiques à chaîne plus longue (par exemple, workflow de cartographie d’oligonucléotides d’ARNm ou d’ADNsb).

Notes d’application

Notes d’application

Les attributs critiques de qualité pour les produits thérapeutiques et les vaccins à base d’ARNm comprennent la confirmation de la longueur et de la polydispersité de la queue polyA ainsi que l’identité de la coiffe 5' et de toute variante de faible niveau éventuellement présente. Ces notes d’application présentent ces analyses par chromatographie de phase inverse avec appariement d’ions.

Les attributs critiques de qualité pour les produits thérapeutiques et les vaccins à base d’ARNm comprennent la confirmation de la longueur et de la polydispersité de la queue polyA ainsi que l’identité de la coiffe 5' et de toute variante de faible niveau éventuellement présente. Ces notes d’application présentent ces analyses par chromatographie de phase inverse avec appariement d’ions.

Notes d’application

Notes d’application

Au cours du développement de médicaments, depuis les premiers stades de la recherche jusqu’au développement avancé, il est nécessaire de disposer d’un matériel d’oligonucléotide purifié adéquat pour pouvoir réaliser différentes études et améliorer les schémas de purification. Cette note d’application présente une approche systématique, rentable et à haute cadence pour les séparations analytiques ainsi qu’un schéma de purification préparative pour un oligonucléotide 20-mère.

Au cours du développement de médicaments, depuis les premiers stades de la recherche jusqu’au développement avancé, il est nécessaire de disposer d’un matériel d’oligonucléotide purifié adéquat pour pouvoir réaliser différentes études et améliorer les schémas de purification. Cette note d’application présente une approche systématique, rentable et à haute cadence pour les séparations analytiques ainsi qu’un schéma de purification préparative pour un oligonucléotide 20-mère.

Notes d’application

Notes d’application

Les données parlent d’elles-mêmes

Les données parlent d’elles-mêmes
Quatre injections consécutives de 3 µL de Duplex C (0,40 mg/mL) sur la colonne ACQUITY Premier Oligonucleotide BEH C18, 300 Å.
Détermination de la pureté des fractions pour un cycle de purification de 25 mg.
Couverture complète (100 %) de la séquence, présentée sous la forme d’une carte de points, produite par fragmentation non ciblée par MSE à haute énergie. 
Chromatogramme expérimental observé avec un gradient concave (logarithmique) de 1,33 minute sur une colonne ACQUITY Premier Oligonucleotide 2,1 x 20 mm ultracourte et fonctionnant à F = 1,5 mL/min et T = 70 °C.

Webinaires et ressources

  • Poster

Consommables LC et LC/MS pour les bioséparations – Affiche

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  • Infographie

Colonnes ACQUITY Premier pour l’analyse des oligonucléotides - Infographie

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  • User Manuals

Manuel d’entretien et d'utilisation des colonnes ACQUITY UPLC et ACQUITY Premier Oligonucleotide BEH C18

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Manuel d’utilisation et d’entretien de l’étalon Oligonucleotide Separation Technology

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  • eBook

purification des oligonucléotides

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Quantification des oligonucléotides

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Découvrez-en davantage sur les colonnes de phase inverse pour oligonucléotides.

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