Colonnes et kits pour bioconjugués

Colonnes et kits pour bioconjugués

Faites confiance aux kits et colonnes de chromatographie pour bioconjugués et anticorps conjugués (ADC) de Waters dédiés aux applications de recherche, de développement et de fabrication.

Faites confiance aux kits et colonnes de chromatographie pour bioconjugués et anticorps conjugués (ADC) de Waters dédiés aux applications de recherche, de développement et de fabrication.
Colonnes BioResolve pour l’analyse des protéines intactes, la caractérisation, le suivi et le contrôle qualité des variants de charge des anticorps monoclonaux (mAb) et des anticorps conjugués (ADC).
Colonnes BioResolve pour l’analyse des protéines intactes, la caractérisation, le suivi et le contrôle qualité des variants de charge des anticorps monoclonaux (mAb) et des anticorps conjugués (ADC).

Présentation

Alors que les sociétés biopharmaceutiques explorent l’utilisation de bioconjugués et d’ADC dans les traitements contre le cancer, elles se heurtent à leurs structures complexes et hétérogènes très difficiles à analyser. Waters apporte des solutions à ces problèmes uniques en facilitant l’évaluation de nombreux attributs de qualité critiques (CQA). Par exemple, vous pouvez déterminer le rapport médicament/anticorps (DAR), même à faibles niveaux, à l’aide de colonnes de chromatographie en phase inverse (RP) ou par interaction hydrophobe (HIC), l’agrégation et de la fragmentation à l’aide de colonnes d’exclusion stérique (SEC) et les sites de conjugaison à l’aide des kits de digestion tryptique de protéines PeptideWorks pour la cartographie des peptides.

Notre gamme complète de colonnes inclut :

  • Colonnes de phase inverse
  • Colonnes HIC
  • Colonnes SEC
  • Colonnes d’échange d’ions
  • Colonnes pour glycoprotéines

Que vous analysiez des ADC conjugués par la lysine dans le but de minimiser les interactions secondaires entre les ADC et la colonne, ou que vous cherchiez à résoudre des problèmes de qualité des données, Waters dispose de la technologie de colonne adéquate pour réaliser vos bioséparations de manière constante et fiable.

Réduction des interactions hydrophobes non désirées grâce à la technologie MaxPeak Premier HPS

Réduction des interactions hydrophobes non désirées grâce à la technologie MaxPeak Premier HPS

Les colonnes MaxPeak Premier de Waters permettent aux scientifiques de mieux contrôler leurs séparations chromatographiques grâce à la technologie MaxPeak HPS (High Performance Surfaces). Par exemple, lorsque des protéines sont séparées en solution en fonction de leur taille, des interactions secondaires peuvent se produire, entraînant une perte d’échantillon, un élargissement des pics et des erreurs dans la quantification des agrégats. Développée à partir de particules SEC hybrides à ponts éthane (BEH) avec de l’oxyde de polyéthylène à terminaison hydroxyle (PEO) haute couverture, la technologie MaxPeak HPS offre une bioinertie exceptionnelle pour des données plus exactes. Elle permet de minimiser les interactions hydrophobes à l’origine d’effets secondaires, offrant ainsi une finesse de pics exceptionnelle et une quantification cohérente.

Disponible dans des granulométries de 1,7 µm (colonnes ACQUITY Premier), 2,5 µm (colonnes XBridge Premier et XSelect Premier) et ≤ 3 µm (certaines colonnes BioResolve Premier), elle vous permet de bénéficier des performances chromatographiques, de la flexibilité et de la confiance que l’on peut attendre des technologies de particules éprouvées de Waters.

Solutions

Colonnes de phase inverse pour la détermination du DAR et la distribution de médicaments 

Colonnes de phase inverse pour la détermination du DAR et la distribution de médicaments 
Colonnes de phase inverse

Les colonnes de phase inverse pour bioconjugués et anticorps conjugués dotées de la technologie MaxPeak HPS, telles que les colonnes ACQUITY et XBridge Premier Protein BEH C4, sont spécialement conçues pour minimiser les interactions secondaires entre les ADC et la géométrie de la colonne et conviennent à l’analyse des ADC conjugués par la lysine. Contrairement à ce qui se passe avec les ADC conjugués par la cystéine, les ponts disulfures intrachaînes qui maintiennent les liens entre chaînes lourdes et légères du mAb restent intacts dans les ADC conjugués par la lysine. Par conséquent, la chromatographie en phase inverse convient à l’analyse des ADC conjugués par la lysine lorsque les liaisons chimiques ne sont pas labiles à pH acide. Waters propose également des colonnes de phase inverse garnies de particules superficiellement poreuses, telles que la colonne BioResolve RP mAb Polyphenyl pour l’analyse en masse intacte et de sous-unités afin de localiser les médicaments liés au niveau du domaine. 

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  • Reversed-Phase Analysis

Chromatographie par interaction hydrophobe (HIC) pour la détermination du DAR

Chromatographie par interaction hydrophobe (HIC) pour la détermination du DAR
Colonnes HIC

Garnies de particules non poreuses, les colonnes Protein-Pak Hi Res HIC de Waters contiennent une faible densité de ligands butyle pour une résolution exceptionnelle et plus de rapidité par rapport à de nombreuses colonnes HIC poreuses classiques. Vous bénéficiez ainsi de performances cohérentes d’un lot à l’autre grâce à des tests de contrôle qualité réalisés avec des étalons de protéines définis.

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  • HIC Analysis

Une exactitude d’agrégation cohérente grâce aux colonnes SEC

Une exactitude d’agrégation cohérente grâce aux colonnes SEC
Colonnes SEC

Ne perdez plus de temps à créer plusieurs phases mobiles d’éluant SEC avec différentes protéines grâce à une méthode générique utilisant un tampon phosphate salin (PBS) pour obtenir des données exactes et cohérentes sur les agrégats, les monomères et les fragments avec les colonnes SEC de Waters Par ailleurs, pour les bioconjugués qui peuvent être hydrophobes et créer des interactions secondaires indésirables, il n’est pas nécessaire d’ajouter un solvant organique avec les colonnes MaxPeak Premier Protein SEC et leurs particules BEH à greffage PEO.

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  • SEC Analysis

Caractérisation et suivi des variants de charge avec la chromatographie par échange de cations

Caractérisation et suivi des variants de charge avec la chromatographie par échange de cations
Colonnes SCX

Mesurez avec exactitude les profils de variants de charge des ADC liés à la cystéine et à la lysine avec la colonne BioResolve SCX mAb et les tampons concentrés BioResolve CX pH pour les gradients de salinité ou de pH présentant des interactions secondaires minimales en détection optique. Pour obtenir des informations structurales par spectrométrie de masse avec échange d’ions, nos tampons compatibles MS, les tampons concentrés de pH IonHance CX-MS, rendent possible l’IEX/MS en ligne grâce à des tampons volatils de haute pureté adaptés à la spectrométrie de masse.

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  • Charged Variant Analysis
  • Cation-Exchange Chromatography

Mesure de la conjugaison des oligonucléotides avec des colonnes à échange d’anions

Mesure de la conjugaison des oligonucléotides avec des colonnes à échange d’anions
Colonnes AEX

Les conjugués anticorps-oligonucléotides (AOC) sont couramment utilisés dans le diagnostic par protéine et constituent une thérapie prometteuse pour les thérapies cellulaires ciblées. La charge négative nette d’un AOC augmente à chaque nouveau site de conjugaison, ce qui se traduit par une rétention accrue sur une résine échangeuse d’anions. La colonne GenPak FAX renferme un sorbant échangeur d’anions faible qui présente une rétentivité contrôlée et une sélectivité unique pour les échantillons de protéines et d’oligonucléotides. Des applications récentes démontrent que l’AEX peut être couplé à la détection MALS pour produire des informations sur la masse moléculaire absolue.

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  • AEX OIigonucleotide Conjugate Analysis

Localisation précise des glycanes au sein d’une structure protéinique avec les colonnes pour glycoprotéines

Localisation précise des glycanes au sein d’une structure protéinique avec les colonnes pour glycoprotéines
Colonnes pour glycoprotéines

Couramment utilisée pour la séparation de petits composés polaires, la chromatographie par interaction hydrophile (HILIC) reste encore peu exploitée pour l’analyse des grosses biomolécules, à l’exception des glycanes libérés. Avec les colonnes pour glycoprotéines à pores larges de Waters, vous pouvez désormais analyser des protéines intactes (avec ou sans glycosylation), fragments de protéines et glycanes libérés complexes en mode HILIC et obtenir des informations jusqu’alors inaccessibles.

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  • Hydrophillic Interaction Chromatography (HILIC)
  • Released Glycans

Digestion des protéines rapide, automatisable et robuste

Digestion des protéines rapide, automatisable et robuste
Kits de digestion tryptique de protéines PeptideWorks

Adaptés aux protocoles manuels ou automatiques, les kits de digestion tryptique de protéines PeptideWorks de Waters fournissent à votre laboratoire des cartes peptidiques reproductibles et hautement efficaces en moins de 2,5 heures, soit en moyenne 4 fois plus rapidement que les méthodes traditionnelles. En 30 minutes, réalisez des digestions avec un rapport enzyme/peptide de 1:5, 78 % moins de clivages manqués et 98 % moins de pics d’autolyse contaminés. PeptideWorks est une solution idéale pour la détermination du site de conjugaison des médicaments, la caractérisation structurale des protéines, l’identification des protéines et le suivi des modifications des protéines, y compris les modifications post-traductionnelles.

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  • Peptides
  • Peptide Mapping
  • Protein Digestion

Une analyse des glycanes plus facile et plus sensible

Une analyse des glycanes plus facile et plus sensible
Kits GlycoWorks RapiFluor-MS pour l’analyse des N-glycanes libérés

Avec le kit GlycoWorks, imaginez une méthode simple, rapide et hautement sensible pour établir des profils de N-glycanes sur les ADC. Atteignez des performances inédites en fluorescence et en spectrométrie de masse pour l’analyse des N-glycanes libérés tout en optimisant votre productivité grâce à une solution automatisable sur le robot de pipetage Andrew+ de Waters. En seulement 3 étapes simples et en 30 minutes à peine, le kit GlycoWorks RapiFluor-MS pour l’analyse des N-glycanes réduit la durée et la complexité de la préparation des échantillons.

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  • n-glycan analysis
  • glycosylation

Simplifiez vos procédures de quantification des protéines

Simplifiez vos procédures de quantification des protéines
Kits de préparation des échantillons ProteinWorks

Simplifiez et accélérez la digestion des protéines grâce aux kits de digestion ProteinWorks eXpress. Ils se composent de réactifs prédosés traçables par lots et de protocoles normalisés pour une quantification LC/MS exacte, fidèle et sensible des protéines, y compris des ADC, dans le plasma et le sérum. Bénéficiez de performances et d’une flexibilité inégalées pour une digestion de protéines reproductible grâce à des kits optimisés pour différents protocoles, notamment la pharmacocinétique et la bioanalyse des protéines.

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  • Proteins
  • Protein bioanalysis

Des analyses SEC moins coûteuses sans compromis

Des analyses SEC moins coûteuses sans compromis
Colonnes de garde MaxPeak Premier Protein SEC 250 Å

L’utilisation des colonnes de garde MaxPeak Premier Protein SEC 250 Å constitue une solution rentable capable de prolonger la durée de vie de votre colonne SEC analytique sans altérer la résolution chromatographique ni compromettre les séparations de variants de taille souhaitées.  

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  • SEC Columns
  • Proteins

Applications

Rationalisez l’acquisition et le traitement des données ainsi que la création de rapports pour l’analyse des ADC par LC/UV ou LC/MS. Découvrez-en davantage dans les notes d’application.

Rationalisez l’acquisition et le traitement des données ainsi que la création de rapports pour l’analyse des ADC par LC/UV ou LC/MS. Découvrez-en davantage dans les notes d’application.

Notes d’application

La colonne de chromatographie par interaction hydrophobe (HIC) Protein-Pak Hi Res permet de déterminer de manière fiable et reproductible le rapport DAR en fonction de la distribution de la charge médicamenteuse sur les ADC conjugués par la cystéine grâce à la surface des pics obtenus par détection optique. Découvrez-en davantage dans les notes d’application.

La colonne de chromatographie par interaction hydrophobe (HIC) Protein-Pak Hi Res permet de déterminer de manière fiable et reproductible le rapport DAR en fonction de la distribution de la charge médicamenteuse sur les ADC conjugués par la cystéine grâce à la surface des pics obtenus par détection optique. Découvrez-en davantage dans les notes d’application.

Notes d’application

La chromatographie d’exclusion stérique (SEC) détermine les agrégats, monomères et fragments de peptides et de protéines dans le cadre de la recherche, du développement et de la fabrication d’ADC de masse moléculaire comprise entre 100 000 et 650 000 daltons. Maintenez une productivité élevée dans la caractérisation des ADC grâce à nos colonnes SEC à particules BEH, dont la qualité est contrôlée à l’aide d’étalons de peptides et de protéines MassPrep pour assurer la cohérence des séparations tout au long du protocole SEC/MS. Découvrez-en davantage dans les notes d’application.

La chromatographie d’exclusion stérique (SEC) détermine les agrégats, monomères et fragments de peptides et de protéines dans le cadre de la recherche, du développement et de la fabrication d’ADC de masse moléculaire comprise entre 100 000 et 650 000 daltons. Maintenez une productivité élevée dans la caractérisation des ADC grâce à nos colonnes SEC à particules BEH, dont la qualité est contrôlée à l’aide d’étalons de peptides et de protéines MassPrep pour assurer la cohérence des séparations tout au long du protocole SEC/MS. Découvrez-en davantage dans les notes d’application.

Notes d’application

Les colonnes SCX de Waters permettent de réaliser le suivi en routine des variants de charge des ADC liés à la lysine et à la cystéine, au moyen de mécanismes d’élution à gradient de salinité et de pH. Ces colonnes résistantes à la corrosion se composent de particules polymériques non poreuses, présentant une surface multifonctionnelle hydrophile, greffée de ligands d’acide sulfonique chargés négativement pour des séparations basées sur la charge, reproductibles et hautement résolutives, de mAb et d’autres protéines dans les applications de LC et LC/MS. Découvrez-en davantage dans les notes d’application.

Les colonnes SCX de Waters permettent de réaliser le suivi en routine des variants de charge des ADC liés à la lysine et à la cystéine, au moyen de mécanismes d’élution à gradient de salinité et de pH. Ces colonnes résistantes à la corrosion se composent de particules polymériques non poreuses, présentant une surface multifonctionnelle hydrophile, greffée de ligands d’acide sulfonique chargés négativement pour des séparations basées sur la charge, reproductibles et hautement résolutives, de mAb et d’autres protéines dans les applications de LC et LC/MS. Découvrez-en davantage dans les notes d’application.

Notes d’application

La séparation de glycoprotéines intactes, de fragments de glycoprotéines et de glycopeptides peut s’avérer particulièrement difficile. Les colonnes HILIC peuvent produire un meilleur rendement pour des sous-unités de mAb et d’ADC particulièrement délicats par rapport aux méthodes RPLC courantes, tout en maintenant une bonne séparation. La séparation des sous-unités de mAb par HILIC peut également servir à évaluer les profils de N-glycosylation. Chaque lot de sorbant qui garnit les colonnes Glycoprotein BEH Amide 300 Å, 1,7 µm est soumis à un contrôle qualité à l’aide de l’étalon de test de performance des glycoprotéines de Waters pour assurer la cohérence interlots. Découvrez-en davantage dans les notes d’application.

La séparation de glycoprotéines intactes, de fragments de glycoprotéines et de glycopeptides peut s’avérer particulièrement difficile. Les colonnes HILIC peuvent produire un meilleur rendement pour des sous-unités de mAb et d’ADC particulièrement délicats par rapport aux méthodes RPLC courantes, tout en maintenant une bonne séparation. La séparation des sous-unités de mAb par HILIC peut également servir à évaluer les profils de N-glycosylation. Chaque lot de sorbant qui garnit les colonnes Glycoprotein BEH Amide 300 Å, 1,7 µm est soumis à un contrôle qualité à l’aide de l’étalon de test de performance des glycoprotéines de Waters pour assurer la cohérence interlots. Découvrez-en davantage dans les notes d’application.

Notes d’application

Les données parlent d’elles-mêmes

Les données parlent d’elles-mêmes
Spectres de masse déconvolués pour des ADC conjugués par la cystéine en masse intacte par SEC-LC/MS natif après déglycosylation. La distribution du médicament a été comparée pour trois échantillons différents d’ADC conjugués par la cystéine avec une charge médicamenteuse croissante. 
Profil de variation de charge d’un anticorps conjugué lié à la cystéine de Pfizer, aujourd’hui abandonné, obtenu par chromatographie d’échange d’ions. (A) Chromatogrammes UV obtenus avec une méthode en gradient de salinité de MES 20 mM (pH 5,4) et une augmentation linéaire de la concentration en chlorure de sodium de 140 à 220 mM en 30 minutes à un débit de 0,80 mL/min sur une colonne BioResolve SCX mAb, 4,6 x 100 mm. Chromatogrammes UV obtenus avec des méthodes en gradient de pH sur une colonne BioResolve SCX mAb, 4,6 x 50 mm utilisant des tampons de pH concentrés BioResolve CX et des phases mobiles avec 0 % (B), 5 % (C), ou 10 % d’acétonitrile (D) et une augmentation linéaire de la proportion de phase mobile B de 0 à 100 % en 30 minutes à 1,00 mL/min. (E) Superposition des chromatogrammes UV obtenus avec les méthodes en gradient de pH sur une colonne BioResolve SCX mAb, 4,6 x 50 mm, utilisant des tampons de pH concentrés BioResolve CX et des phases mobiles avec 0 %, 5 % et 10 % d’acétonitrile. La détection UV a été réalisée à 280 nm.
Chromatographie par interaction hydrophile d’un mAb par rapport à son ADC. Les nombres représentent le nombre de lieurs/charges utiles présents dans le conjugué, où a et b désignent les isomères de position. *Indique les produits d’hydrolyse du lieur/de la charge utile. #Dénote une oxydation à l’état de traces. La glycosylation est annotée selon le système Oxford. F désigne le fucose, A2 indique que les structures sont biantennaires et G désigne le galactose (FA2 = G0F, FA2G1 = G1F et FA2G2 = G2F).
Analyse AEX-MALS d’un échantillon d’AOC obtenu avec une colonne FAX Gen-Pak de Waters. Un chromatogramme UV à 280 nm est affiché avec la masse molaire superposée. Les limites des pics sont indiquées par les lignes verticales en pointillés.
Comparaison des cartes peptidiques (chromatogrammes UV) d’un trastuzumab conjugué et non conjugué
. En haut : digestion tryptique d’un biosimilaire du trastuzumab.
En bas : digestion tryptique d’un anticorps conjugué Trastuzumab emtansine (Kadcyla).
Les deux digestions tryptiques utilisaient le kit de digestion de protéine tryptique PeptideWorks et la trypsine RapiZyme avec une injection de 100 µL (~10 µg) sur une colonne XSelect Premier Peptide CSH C18, 2,5 µm, 2,1 × 150 mm. On observe des pics supplémentaires sur le chromatogramme de Kadcyla (en bas) par rapport au trastuzumab non conjugué (en haut). 
Comparaison des performances des interactions secondaires hydrophobes en utilisant l’ADC ado-trastuzumab emtansine. Lorsque la concentration de solvant organique augmente, le degré de variation observé pour la colonne XBridge Premier Protein SEC 250 Å, 2,5 µm est à nouveau négligeable, avec une forme de pic exceptionnelle entre 0 et 15 % de MeCN. Les interactions secondaires hydrophobes ont été largement atténuées par l’utilisation d’une phase stationnaire PEO à terminaison hydroxyle haute couverture.
Analyse HIC d’un ADC conjugué par la cystéine. La distribution du médicament a été déterminée pour trois échantillons différents d’ADC conjugués par la cystéine avec une charge médicamenteuse croissante.

Webinaires et ressources

  • Réimpressions de l’article

Profilage LC/MS haute sensibilité d’anticorps conjugués avec appariements d’ions d’acide difluoroacétique

Profilage LC/MS haute sensibilité d’anticorps conjugués avec appariements d’ions d’acide difluoroacétique
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Amélioration du profil de sous-unités de mAb et d’ADC avec de l’acide difluoroacétique de qualité MS

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Bioconjugués
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Découvrez-en davantage sur les bioconjugués et les anticorps conjugués (ADC).

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