使用Andrew+移液机器人和Xevo TQ-S micro对血清中的甲基丙二酸进行自动制备和LC-MS/MS分析

本文介绍了在Andrew+上采用Ostro样品板进行蛋白沉淀和磷脂去除，从血清中自动萃取MMA的方法。MMA Andrew+方案在开发时利用了现有的MMA工作流程和LC-MS分析方法，能够实现高通量样品制备。利用Andrew+进行MMA样品制备可发挥出色的灵活性、重现性，同时节省分析人员的时间。

样品定量分析采用装配ACQUITY UPLC CSH C₁₈, 1.7 μm色谱柱（部件号：186005297）的ACQUITY UPLC I-Class系统，并通过Waters Xevo TQ-S micro串联四极杆质谱仪进行检测。将成熟的LC-MS/MS方法与Andrew+结合使用，可实现准确、稳定的分析物定量。

优势

• 自动化样品制备，使拥有娴熟技能的分析人员能够更好地利用其时间
• 自动化方法转移
• 改善数据，减少错误
• 采用96孔板，大幅提升通量
• 所得结果与手动制备方法相当

甲基丙二酸(MMA)的分析可用于测定维生素B-12的血清含量。MMA是维生素B12的优选指标，因为即使在缺乏的情况下，维生素B-12血清含量也可能正常或偏高¹。 通过LC-MS/MS分析研究该生物标志物是实现高通量的理想选择。为进一步优化血清样品分析，之前已经简化的MMA工作流程在Andrew+上实现了自动化²。 沃特世甲基丙二酸法利用Ostro蛋白沉淀和磷脂去除96孔板（部件号：186005518），以简化、高通量形式提供了更洁净、可重现的提取物。 

即使采用简化的工作流程，开发自动化方法也是一项艰巨的任务。在用户友好的云端OneLab软件中创建了Andrew+ MMA方案，该软件能够为用户提供有用的提示和拖放功能。MMA方案纳入了当前的手动制备步骤，其中包括在Vacuum+装置上进行样品净化之前，在Ostro样品板内进行试剂转移和充分混合。该方案中存在用户提示，允许在工作台外完成蒸发步骤，使用户能够在样品板准备就绪后，继续执行方案中的最终移液步骤。方案组合过程简单，用户得以专注于准确移液和充分混合所需的参数（例如液体处理）。正确调整这些参数对于确保样品制备的准确度和精密度至关重要。在OneLab中，液体处理参数的调整简单直接，为用户省去了复杂的手动移液步骤。调整自动化制备参数的一个示例是使用移液器混合代替涡旋混合。优化混合速度，确保样品充分混合，从而改善精密度和回收率结果。

自动化可以消除可能由高通量样品制备造成的瓶颈。与LC-MS/MS分析结合使用，可以获得一种高效、稳定且节省分析人员时间的解决方案。此外，用户友好的软件和统一的工作台设置使方法的创建和执行更加容易，尤其是从一个实验室转移至另一个实验室时。

在开发方案时，对移液器的液体处理参数进行了改进，以确保萃取前在Ostro样品板内平稳且一致地转移样品并充分混合。在有关蒸发步骤的方案中添加一条用户提示，该步骤在工作台外部完成，大约需要50 min。另一条建议是此时可将该方案分为两部分，以便在需要时同时使用Andrew+。该方案所用的工作台配置可参见图1。

Andrew+将一组八个Recipe MMA 1级质控样品和2级质控样品等分试样转移至2 mL收集板（部件号：186002482）的前两行中。手动制备相同的样品用于比较。研究对Andrew+与手动制备得到的每个浓度下8份样品制剂的峰面积计数进行了比较。与手动制备方法相比，采用Andrew+使两种QC浓度的8份制剂获得了更高的精密度，结果分别为≤3.5%（自动化制备）和≤5.2%（手动制备）（见图2）。

还计算了采用Andrew+制备与手动制备得到的峰面积计数的%回收率。在两个QC浓度下，手动制备与自动化制备之间的差异小于4%，证明了Andrew+与手动制备方法的可比性。

有关所用MMA UPLC-MS/MS方法和材料的更多信息，可参见沃特世应用纪要720006806。

使用Andrew+成功开发出一种用于MMA的自动化样品制备方法。整个浓度范围内的QC样品分析表现出优异的精密度和回收率，且结果与手动制备结果一致。

1. Vashi, P.; Edwin, P.; Popiel, B.; Lammersfeld, C.; Gupta, D. (2016) Methylmalonic Acid and Homocysteine as Indicators of Vitamin B-12 Deficiency in Cancer.PLoS ONE 11(1): e0147843.doi:10.1371/journal.pone.0147843
2. Foley, D.; Van Hulle, M.; Brown, H. A.; Calton, L. J. Analysis of Methylmalonic Acid in Serum Using the Xevo TQ-S micro for Clinical Research.Waters Application Note, 720006806, 2020.