Alors que les sociétés biopharmaceutiques explorent l’utilisation de bioconjugués et d’ADC dans les traitements contre le cancer, elles se heurtent à leurs structures complexes et hétérogènes très difficiles à analyser. Waters apporte des solutions à ces problèmes uniques en facilitant l’évaluation de nombreux attributs de qualité critiques (CQA). Par exemple, vous pouvez déterminer le rapport médicament/anticorps (DAR), même à faibles niveaux, à l’aide de colonnes de chromatographie en phase inverse (RP) ou par interaction hydrophobe (HIC), l’agrégation et de la fragmentation à l’aide de colonnes d’exclusion stérique (SEC) et les sites de conjugaison à l’aide des kits de digestion tryptique de protéines PeptideWorks pour la cartographie des peptides.
Notre gamme complète de colonnes inclut :
Que vous analysiez des ADC conjugués par la lysine dans le but de minimiser les interactions secondaires entre les ADC et la colonne, ou que vous cherchiez à résoudre des problèmes de qualité des données, Waters dispose de la technologie de colonne adéquate pour réaliser vos bioséparations de manière constante et fiable.
Les colonnes MaxPeak Premier de Waters permettent aux scientifiques de mieux contrôler leurs séparations chromatographiques grâce à la technologie MaxPeak HPS (High Performance Surfaces). Par exemple, lorsque des protéines sont séparées en solution en fonction de leur taille, des interactions secondaires peuvent se produire, entraînant une perte d’échantillon, un élargissement des pics et des erreurs dans la quantification des agrégats. Développée à partir de particules SEC hybrides à ponts éthane (BEH) avec de l’oxyde de polyéthylène à terminaison hydroxyle (PEO) haute couverture, la technologie MaxPeak HPS offre une bioinertie exceptionnelle pour des données plus exactes. Elle permet de minimiser les interactions hydrophobes à l’origine d’effets secondaires, offrant ainsi une finesse de pics exceptionnelle et une quantification cohérente.
Disponible dans des granulométries de 1,7 µm (colonnes ACQUITY Premier), 2,5 µm (colonnes XBridge Premier et XSelect Premier) et ≤ 3 µm (certaines colonnes BioResolve Premier), elle vous permet de bénéficier des performances chromatographiques, de la flexibilité et de la confiance que l’on peut attendre des technologies de particules éprouvées de Waters.
Les colonnes de phase inverse pour bioconjugués et anticorps conjugués dotées de la technologie MaxPeak HPS, telles que les colonnes ACQUITY et XBridge Premier Protein BEH C4, sont spécialement conçues pour minimiser les interactions secondaires entre les ADC et la géométrie de la colonne et conviennent à l’analyse des ADC conjugués par la lysine. Contrairement à ce qui se passe avec les ADC conjugués par la cystéine, les ponts disulfures intrachaînes qui maintiennent les liens entre chaînes lourdes et légères du mAb restent intacts dans les ADC conjugués par la lysine. Par conséquent, la chromatographie en phase inverse convient à l’analyse des ADC conjugués par la lysine lorsque les liaisons chimiques ne sont pas labiles à pH acide. Waters propose également des colonnes de phase inverse garnies de particules superficiellement poreuses, telles que la colonne BioResolve RP mAb Polyphenyl pour l’analyse en masse intacte et de sous-unités afin de localiser les médicaments liés au niveau du domaine.
Garnies de particules non poreuses, les colonnes Protein-Pak Hi Res HIC de Waters contiennent une faible densité de ligands butyle pour une résolution exceptionnelle et plus de rapidité par rapport à de nombreuses colonnes HIC poreuses classiques. Vous bénéficiez ainsi de performances cohérentes d’un lot à l’autre grâce à des tests de contrôle qualité réalisés avec des étalons de protéines définis.
Ne perdez plus de temps à créer plusieurs phases mobiles d’éluant SEC avec différentes protéines grâce à une méthode générique utilisant un tampon phosphate salin (PBS) pour obtenir des données exactes et cohérentes sur les agrégats, les monomères et les fragments avec les colonnes SEC de Waters Par ailleurs, pour les bioconjugués qui peuvent être hydrophobes et créer des interactions secondaires indésirables, il n’est pas nécessaire d’ajouter un solvant organique avec les colonnes MaxPeak Premier Protein SEC et leurs particules BEH à greffage PEO.
Mesurez avec exactitude les profils de variants de charge des ADC liés à la cystéine et à la lysine avec la colonne BioResolve SCX mAb et les tampons concentrés BioResolve CX pH pour les gradients de salinité ou de pH présentant des interactions secondaires minimales en détection optique. Pour obtenir des informations structurales par spectrométrie de masse avec échange d’ions, nos tampons compatibles MS, les tampons concentrés de pH IonHance CX-MS, rendent possible l’IEX/MS en ligne grâce à des tampons volatils de haute pureté adaptés à la spectrométrie de masse.
Les conjugués anticorps-oligonucléotides (AOC) sont couramment utilisés dans le diagnostic par protéine et constituent une thérapie prometteuse pour les thérapies cellulaires ciblées. La charge négative nette d’un AOC augmente à chaque nouveau site de conjugaison, ce qui se traduit par une rétention accrue sur une résine échangeuse d’anions. La colonne GenPak FAX renferme un sorbant échangeur d’anions faible qui présente une rétentivité contrôlée et une sélectivité unique pour les échantillons de protéines et d’oligonucléotides. Des applications récentes démontrent que l’AEX peut être couplé à la détection MALS pour produire des informations sur la masse moléculaire absolue.
Couramment utilisée pour la séparation de petits composés polaires, la chromatographie par interaction hydrophile (HILIC) reste encore peu exploitée pour l’analyse des grosses biomolécules, à l’exception des glycanes libérés. Avec les colonnes pour glycoprotéines à pores larges de Waters, vous pouvez désormais analyser des protéines intactes (avec ou sans glycosylation), fragments de protéines et glycanes libérés complexes en mode HILIC et obtenir des informations jusqu’alors inaccessibles.
Spectres de masse déconvolués pour des ADC conjugués par la cystéine en masse intacte par SEC-LC/MS natif après déglycosylation. La distribution du médicament a été comparée pour trois échantillons différents d’ADC conjugués par la cystéine avec une charge médicamenteuse croissante.
Profil de variation de charge d’un anticorps conjugué lié à la cystéine de Pfizer, aujourd’hui abandonné, obtenu par chromatographie d’échange d’ions. (A) Chromatogrammes UV obtenus avec une méthode en gradient de salinité de MES 20 mM (pH 5,4) et une augmentation linéaire de la concentration en chlorure de sodium de 140 à 220 mM en 30 minutes à un débit de 0,80 mL/min sur une colonne BioResolve SCX mAb, 4,6 x 100 mm. Chromatogrammes UV obtenus avec des méthodes en gradient de pH sur une colonne BioResolve SCX mAb, 4,6 x 50 mm utilisant des tampons de pH concentrés BioResolve CX et des phases mobiles avec 0 % (B), 5 % (C), ou 10 % d’acétonitrile (D) et une augmentation linéaire de la proportion de phase mobile B de 0 à 100 % en 30 minutes à 1,00 mL/min. (E) Superposition des chromatogrammes UV obtenus avec les méthodes en gradient de pH sur une colonne BioResolve SCX mAb, 4,6 x 50 mm, utilisant des tampons de pH concentrés BioResolve CX et des phases mobiles avec 0 %, 5 % et 10 % d’acétonitrile. La détection UV a été réalisée à 280 nm.
Chromatographie par interaction hydrophile d’un mAb par rapport à son ADC. Les nombres représentent le nombre de lieurs/charges utiles présents dans le conjugué, où a et b désignent les isomères de position. *Indique les produits d’hydrolyse du lieur/de la charge utile. #Dénote une oxydation à l’état de traces. La glycosylation est annotée selon le système Oxford. F désigne le fucose, A2 indique que les structures sont biantennaires et G désigne le galactose (FA2 = G0F, FA2G1 = G1F et FA2G2 = G2F).
Analyse AEX-MALS d’un échantillon d’AOC obtenu avec une colonne FAX Gen-Pak de Waters. Un chromatogramme UV à 280 nm est affiché avec la masse molaire superposée. Les limites des pics sont indiquées par les lignes verticales en pointillés.
Comparaison des cartes peptidiques (chromatogrammes UV) d’un trastuzumab conjugué et non conjugué
Comparaison des performances des interactions secondaires hydrophobes en utilisant l’ADC ado-trastuzumab emtansine. Lorsque la concentration de solvant organique augmente, le degré de variation observé pour la colonne XBridge Premier Protein SEC 250 Å, 2,5 µm est à nouveau négligeable, avec une forme de pic exceptionnelle entre 0 et 15 % de MeCN. Les interactions secondaires hydrophobes ont été largement atténuées par l’utilisation d’une phase stationnaire PEO à terminaison hydroxyle haute couverture.
Analyse HIC d’un ADC conjugué par la cystéine. La distribution du médicament a été déterminée pour trois échantillons différents d’ADC conjugués par la cystéine avec une charge médicamenteuse croissante.
