바이오의약품 조직이 바이오 접합체 및 ADC를 암 치료법의 한 부류로 사용하는 방법을 연구함에 따라 복잡한 이종 구조를 분석하는 데에 상당한 어려움이 따릅니다. Waters는 역상(RP) 또는 소수성 상호 작용 크로마토그래피(HIC) 컬럼을 사용한 낮은 농도의 약물 대 항체 비율(DAR) 측정, 크기 배제(SEC) 컬럼을 사용한 응집 및 조각화, 그리고 펩타이드 매핑용 PeptideWorks Tryptic Protein Digestion 키트를 사용한 접합 부위 측정을 포함하여 많은 중요 품질 속성(CQA)의 원활한 평가를 지원함으로써 이러한 고유한 분석 과제에 솔루션을 제공합니다.
당사의 포괄적인 컬럼 제품은 다음과 같습니다.
라이신 접합 ADC를 분석하여 ADC와 컬럼 하드웨어 간의 2차 상호 작용을 줄이거나, 기타 데이터 품질 문제를 해결하고자 하는 고객 모두에게 Waters는 바이오 분리를 일관되고 안정적으로 수행하는 데 적합한 컬럼 기술을 보유하고 있습니다.
Waters MaxPeak Premier 컬럼에 MaxPeak HPS(High Performance Surfaces) 기술을 적용함으로써 과학자들은 크로마토그래피 분리를 더 효과적으로 제어할 수 있습니다. 예를 들어, 용액에서 크기별로 단백질을 분리하는 경우 2차 상호 작용이 발생하여 샘플 손실, 피크 확장 및 부정확한 접합체 정량을 유발할 수 있습니다. MaxPeak HPS 기술은 적용 범위가 넓은 하이드록시-말단 폴리에틸렌 옥사이드(PEO)를 포함한 Ethylene Bridged Hybrid(BEH) SEC 입자를 사용하여 개발되었으며 생체 불활성이 우수해 정확한 데이터를 제공합니다. 이는 2차 상호 작용을 일으키는 소수성 상호 작용을 줄임으로써 뛰어난 피크 모양과 일관된 정량화를 제공합니다.
1.7µm(ACQUITY Premier 컬럼), 2.5µm(XBridge Premier 컬럼, XSelect Premier 컬럼) 및 일부 BioResolve Premier 컬럼 ≤ 3µm 입자 크기 및 형식으로 제공되어 Waters의 신뢰할 수 있는 입자 기술에서 기대되는 크로마토그래피 성능, 유연성 및 성능이 보장됩니다.
ACQUITY 및 XBridge Premier Protein BEH C4 컬럼과 같은 MaxPeak HPS 적용 바이오 접합체 및 항체 약물 접합체용 역상 컬럼은 ADC와 컬럼 하드웨어 간의 2차 상호 작용을 최소화하도록 고유하게 설계되었으며 라이신 결합 ADC의 분석에 적합합니다. 시스테인 접합 ADC와 달리, 라이신 접합 ADC에 대한 mAb의 중쇄 및 경쇄 간 연결을 유지하는 사슬 내 이황화 결합은 손상되지 않습니다. 따라서 링커 화학성이 산성 pH에서 불안정하지 않은 경우 역상 크로마토그래피는 라이신 접합 ADC의 분석에 적합합니다. 또한 Waters는 도메인 수준에서 연결된 약물의 국부화를 판단하기 위한 intact 및 subunit 분석용 BioResolve RP mAb Polyphenyl과 같은 고체 코어 입자 기술을 갖춘 역상 컬럼을 제공합니다.
비다공성 입자가 포함된 Waters Protein-Pak Hi Res HIC 컬럼은 저밀도의 부틸 리간드를 포함하여 기존의 많은 다공성 HIC 제품에 비해 짧은 시간에 뛰어난 분리능을 제공하므로, 정의된 단백질 표준물질을 이용한 품질 관리 테스트를 통해 배치 간 일관성을 보장합니다.
Waters SEC 컬럼에서 인산염 버퍼 식염수(즉, PBS)가 포함된 플랫폼 분석법을 사용하면 여러 단백질을 위해 여러 SEC Eluent 이동상을 준비할 필요가 없어 응집체, 단량체 및 조각화된 데이터를 일관성 있게 측정할 수 있습니다. 또한 원치 않는 2차 상호 작용을 생성할 수 있는 소수성의 바이오 접합체의 경우, MaxPeak Premier Protein SEC 컬럼 및 그 PEO 결합 BEH 입자를 사용하면 유기 용매를 추가할 필요가 없습니다.
BioResolve SCX mAb 컬럼 및 BioResolve CX pH 버퍼 농축액을 사용하여 시스테인 연결 ADC 및 라이신 연결 ADC의 전하 변이체(Charge Variant) 프로파일을 정확하게 측정하고 광학 검출의 2차 상호 작용을 줄이면서 염 또는 pH 기울기를 측정합니다. 이온 교환에서 질량분석에 대한 구조적 통찰력을 제공하기 위한 Waters의 MS 호환 버퍼인 IonHance CX- MS pH 버퍼 농축액은 질량분석에 적합한 고순도, 휘발성 버퍼를 갖춘 온라인 IEX-MS를 가능하게 합니다.
항체 올리고뉴클레오타이드 접합체(AOC)는 단백질 진단에 일반적으로 사용되며 표적 세포 치료를 위한 유망한 치료법입니다. AOC의 순 음전하는 접합 부위가 추가될 때마다 확장되어 음이온 교환 수지에서 머무름이 증가합니다. GenPak FAX 컬럼에는 단백질 및 올리고뉴클레오타이드 샘플에 대해 제어된 머무름과 고유한 선택성을 나타내는 약한 음이온 교환 흡착제가 포함되어 있습니다. 최근 응용 연구에서는 AEX가 MALS와 결합되어 절대 분자량 정보를 생성할 수 있음을 보여주었습니다.
HILIC(Hydrophillic Interaction Chromatography)는 작은 극성 화합물 분리에 널리 사용되었지만, 놀랍게도 Released 글라이칸 이외의 거대 바이오 분자에 대한 적용은 제한적이었습니다. Waters의 넓은 기공 Glycoprotein 컬럼을 사용하면 이제 HILIC를 통해 인텍프로테인(글리코실화 유무와 상관 없이), 단백질 조각, 복잡한 Released 글라이칸으로부터 이전에는 얻을 수 없었던 정보를 수집할 수 있습니다.
탈당분해 후 네이티브 SEC-LC-MS로부터 시스테인 접합 ADC에 대해 얻은 디콘볼루션된 Intact Mass 스펙트럼. 약물 부하가 증가함에 따라 세 가지 서로 다른 시스테인 접합 ADC 샘플에 대해 약물 분포를 비교했습니다.
이온 교환 크로마토그래피를 통해 얻은 Pfizer의 단종된 시스테인 연결 항체 약물 접합체의 전하 변이체(Charge Variant) 프로파일. (A) 20mM MES(pH 5.4)의 염 구배 분석법과 BioResolve SCX mAb, 4.6 x 100mm 컬럼에서 0.80mL/min의 속도로 30분 동안 140~220mM에서 염화나트륨 농도를 선형 증가시켜 얻은 UV 크로마토그램. BioResolve SCX mAb, 4.6 x 50mm 컬럼에서 BioResolve CX pH 농축액과 아세토니트릴 0% (B), 5% (C) 또는 10% (D)를 포함한 이동상, 및 1.00mL/min으로 30분 동안 이동상 B 비율을 0~100%로 선형 증가시켜 pH 기울기 방법으로 얻은 UV 크로마토그램. (E) BioResolve CX pH 농축액과 아세토니트릴 0%, 5% 및 10% 포함/불포함 이동상을 사용하여 BioResolve SCX mAb, 4.6 x 50mm 컬럼에서 pH 기울기 방법으로 얻은 UV 크로마토그램의 오버레이. UV 검출은 280nm에서 이루어졌습니다.
mAb와 ADC의 친수성 상호작용 크로마토그래피 비교. 숫자는 접합체에 존재하는 링커/페이로드 수를 나타내며, 여기서 a와 b는 위치 이성질체를 나타냅니다. *링커/페이로드 가수분해 생성물을 나타냅니다. #미량 수준의 산화를 나타냅니다. 글리코실화는 옥스포드 표기법에 따라 표시됩니다. F는 fucose를 나타내고, A2는 구조가 biantennary임을 나타내고, G는 galactose를 나타냅니다(FA2 = G0F, FA2G1 = G1F, FA2G2 = G2F).
Waters Gen-Pak FAX 컬럼을 사용하여 얻은 AOC 샘플의 AEX-MALS. UV 280nm 크로마토그램이 몰 질량이 겹쳐져 표시됩니다. 피크 경계는 수직 점선으로 표시됩니다.
접합 및 비접합 트라스투주맙의 펩타이드 매핑(UV 크로마토그램) 비교
ADC ado-trastuzumab emtansine을 사용한 소수성 2차 상호작용 성능 비교. 유기 농도가 증가하면 XBridge Premier Protein SEC 250Å, 2.5μm 컬럼에서 관찰된 변화 정도는 다시 무시할 수 있으며 0~15% MeCN 범위에서 탁월한 피크 모양을 나타냅니다. 소수성 2차 상호작용은 높은 적용 범위의 하이드록시 말단 PEO 패킹 재료 결합을 통해 크게 완화되었습니다.
HIC를 이용한 시스테인 접합 ADC 분석. 약물 부하가 증가함에 따라 세 가지 서로 다른 시스테인 접합 ADC 샘플에 대해 약물 분포를 평가했습니다.
