La cromatografía de fase reversa con par iónico (IPRP) es el método de elección para la caracterización de oligonucleótidos sintéticos y el análisis de impurezas. El método ayuda a los científicos a resolver las impurezas relacionadas con la síntesis y el proceso mejor que cualquier otra técnica cromatográfica, incluido el intercambio aniónico (AEX), HILIC y SEC. La técnica no está exenta de problemas. Varios factores pueden afectar directamente al rendimiento y la reproducibilidad de la separación, como la pureza y la estabilidad de los reactivos de par iónico, la adsorción inespecífica en el hardware cromatográfico y las variaciones entre lotes en el sorbente. IPRP se basa en condiciones de pH y temperatura elevados para lograr separaciones óptimas, lo que requiere que los materiales de la columna tengan una tolerancia elevada al pH y a la temperatura.
Gane confianza en los resultados con las columnas de fase reversa para oligonucleótidos de Waters, que ofrecen:
Los ácidos nucleicos, incluidos los oligonucleótidos, son polianiónicos (carga negativa) y se adsorben fácilmente en las superficies de óxidos metálicos de las columnas de acero inoxidable. Las columnas para oligonucleótidos MaxPeak Premier de Waters tienen una química de superficie híbrida inerte orgánica/inorgánica basada en sílice que casi elimina la NSA de los ácidos nucleicos, lo que permite mejorar la sensibilidad, la reproducibilidad y la productividad. Con Waters, el laboratorio puede eliminar los tediosos pasos de pasivación de la columna y acondicionamiento de las muestras antes del análisis.
La cromatografía IP-RP de oligonucleótidos sintéticos resuelve los componentes de las muestras en función de cambios menores en el tamaño, la carga y la hidrofobicidad. Las columnas ACQUITY (UPLC: tamaño de partícula de 1,7 µm ) y XBridge (HPLC/UHPLC: tamaño de partícula de 2,5 µm ) Premier Oligonucleotide BEH C18 de Waters ofrecen una resolución, sensibilidad y reproducibilidad excepcionales de las muestras de oligonucleótidos.
Las columnas ACQUITY and XBridge Premier Oligonucleotide de Waters se rellenan con partículas de sílice híbridas con puentes de etileno (BEH) C18 de Waters y muestran una notable longevidad de la columna en condiciones de pH y temperatura elevados, a la vez que mantienen un rendimiento de separación excepcional.
Los oligonucleótidos y los ácidos nucleicos más largos muestran un fuerte mecanismo de unión y elución de activación/desactivación, lo que los hace susceptibles a “gradientes balísticos” y separaciones ultrarrápidas que pueden mejorar la productividad en los laboratorios de análisis de alto rendimiento. Las columnas ACQUITY Premier Oligonucleotide BEH C18 de 2,1 × 20 mm de Waters con tamaños de poro de 130 Å y 300 Å permiten separaciones ultrarrápidas de oligonucleótidos con una longitud corta medida en mer (10-40 nt) y una longitud larga medida en mer (>40 nt), respectivamente.
Las columnas ACQUITY (1.7 µm) and XBridge (2.5 µm) Premier Oligonucleotide están disponibles con tamaños de poro de 130 Å y 300 Å que muestran diferencias en la capacidad de retención y la nitidez de los picos en función de la longitud del oligonucleótido. El área de superficie aumentada de las partículas con un tamaño de poro de 130 Å permite una mayor retención y resolución de los oligonucleótidos con una longitud corta medida en mer (< ~40 mer), mientras que las partículas con un tamaño de poro de 300 Å permiten una mayor difusión y una mejor resolución de los oligonucleótidos más largos (> ~40 mer).
Cuatro inyecciones consecutivas de 3 µL de solución dúplex C (0,40 mg/mL) utilizando la columna ACQUITY Premier Oligonucleotide BEH C18, 300 Å.
Determinaciones de la pureza en fracciones para un proceso de purificación de 25 mg.
Cobertura de secuencia completa (100 %), presentada en formato de mapa de puntos, producida por fragmentación no dirigida de MSE de alta energía.
Cromatograma experimental observado con un gradiente cóncavo (logarítmico) de 1,33 minutos en una columna ultracorta ACQUITY Premier Oligonucleotide de 2,1 × 20 mm, a F = 1,5 mL/min y T = 70 °C.
