Columnas de fase reversa para oligonucleótidos

Columnas de fase reversa para oligonucleótidos

Consiga una tolerancia al pH y a la temperatura líder del sector y una resolución excepcional con las columnas de fase reversa para oligonucleótidos de Waters para la caracterización de oligonucleótidos y el análisis de impurezas. Cada lote de sorbente se somete a pruebas de control de calidad (QC) con patrones de oligonucleótidos para garantizar el rendimiento y la reproducibilidad entre lotes.

Consiga una tolerancia al pH y a la temperatura líder del sector y una resolución excepcional con las columnas de fase reversa para oligonucleótidos de Waters para la caracterización de oligonucleótidos y el análisis de impurezas. Cada lote de sorbente se somete a pruebas de control de calidad (QC) con patrones de oligonucleótidos para garantizar el rendimiento y la reproducibilidad entre lotes.


Descripción general

La cromatografía de fase reversa con par iónico (IPRP) es el método de elección para la caracterización de oligonucleótidos sintéticos y el análisis de impurezas. El método ayuda a los científicos a resolver las impurezas relacionadas con la síntesis y el proceso mejor que cualquier otra técnica cromatográfica, incluido el intercambio aniónico (AEX), HILIC y SEC. La técnica no está exenta de problemas. Varios factores pueden afectar directamente al rendimiento y la reproducibilidad de la separación, como la pureza y la estabilidad de los reactivos de par iónico, la adsorción inespecífica en el hardware cromatográfico y las variaciones entre lotes en el sorbente. IPRP se basa en condiciones de pH y temperatura elevados para lograr separaciones óptimas, lo que requiere que los materiales de la columna tengan una tolerancia elevada al pH y a la temperatura.

Gane confianza en los resultados con las columnas de fase reversa para oligonucleótidos de Waters, que ofrecen:

  • Estabilidad de pH y temperatura líder en el sector con la tecnología de partículas de sílice híbridas con puentes de etileno (BEH) C18 para una resolución y una vida útil de la columna excepcionales.
  • Una reducción drástica de la adsorción no específica (NSA) con la tecnología de superficies de alto rendimiento (HPS) MaxPeak Premier para lograr la máxima sensibilidad, reproducibilidad y productividad.
  • Pruebas de control de calidad (QC) basadas en oligonucleótidos para garantizar el rendimiento y la reproducibilidad de las separaciones entre lotes.


Sensibilidad y reproducibilidad mejoradas sin acondicionamiento de la columna

Sensibilidad y reproducibilidad mejoradas sin acondicionamiento de la columna

Los ácidos nucleicos, incluidos los oligonucleótidos, son polianiónicos (carga negativa) y se adsorben fácilmente en las superficies de óxidos metálicos de las columnas de acero inoxidable. Las columnas para oligonucleótidos MaxPeak Premier de Waters tienen una química de superficie híbrida inerte orgánica/inorgánica basada en sílice que casi elimina la NSA de los ácidos nucleicos, lo que permite mejorar la sensibilidad, la reproducibilidad y la productividad.  Con Waters, el laboratorio puede eliminar los tediosos pasos de pasivación de la columna y acondicionamiento de las muestras antes del análisis.

Resolución excepcional de los oligonucleótidos sintéticos

Resolución excepcional de los oligonucleótidos sintéticos

La cromatografía IP-RP de oligonucleótidos sintéticos resuelve los componentes de las muestras en función de cambios menores en el tamaño, la carga y la hidrofobicidad. Las columnas ACQUITY (UPLC: tamaño de partícula de 1,7 µm ) y XBridge (HPLC/UHPLC: tamaño de partícula de 2,5 µm ) Premier Oligonucleotide BEH C18 de Waters ofrecen una resolución, sensibilidad y reproducibilidad excepcionales de las muestras de oligonucleótidos.

Duración de las columnas excepcional

Duración de las columnas excepcional

Las columnas ACQUITY and XBridge Premier Oligonucleotide de Waters se rellenan con partículas de sílice híbridas con puentes de etileno (BEH) C18 de Waters y muestran una notable longevidad de la columna en condiciones de pH y temperatura elevados, a la vez que mantienen un rendimiento de separación excepcional.

Soluciones


Columnas de 2,1 x 20 mm para separaciones ultrarrápidas

Columnas de 2,1 x 20 mm para separaciones ultrarrápidas

Los oligonucleótidos y los ácidos nucleicos más largos muestran un fuerte mecanismo de unión y elución de activación/desactivación, lo que los hace susceptibles a “gradientes balísticos” y separaciones ultrarrápidas que pueden mejorar la productividad en los laboratorios de análisis de alto rendimiento. Las columnas ACQUITY Premier Oligonucleotide BEH C18 de 2,1 × 20 mm de Waters con tamaños de poro de 130 Å y 300 Å permiten separaciones ultrarrápidas de oligonucleótidos con una longitud corta medida en mer (10-40 nt) y una longitud larga medida en mer (>40 nt), respectivamente.

  • Ultrafast Oligonucleotide Separations
  • Reversed-Phase Analysis

Columnas MaxPeak Premier de poro ancho (300 Å) para oligonucleótidos con una longitud larga medida en mer

Columnas MaxPeak Premier de poro ancho (300 Å) para oligonucleótidos con una longitud larga medida en mer

Las columnas ACQUITY (1.7 µm) and XBridge (2.5 µm) Premier Oligonucleotide están disponibles con tamaños de poro de 130 Å y 300 Å que muestran diferencias en la capacidad de retención y la nitidez de los picos en función de la longitud del oligonucleótido. El área de superficie aumentada de las partículas con un tamaño de poro de 130 Å permite una mayor retención y resolución de los oligonucleótidos con una longitud corta medida en mer (< ~40 mer), mientras que las partículas con un tamaño de poro de 300 Å permiten una mayor difusión y una mejor resolución de los oligonucleótidos más largos (> ~40 mer).

  • Long-mer Oligonucleotide Separations
  • Reversed-Phase Analysis

Patrones de oligonucleótidos/ácidos nucleicos para la evaluación comparativa del rendimiento

Patrones de oligonucleótidos/ácidos nucleicos para la evaluación comparativa del rendimiento

Waters ofrece una gama de patrones analíticos de alta calidad con trazabilidad de lotes que complementan nuestras columnas de fase reversa de oligonucleótidos para facilitar las pruebas de idoneidad del sistema, el desarrollo de métodos y la resolución de problemas. Estos incluyen el patrón de oligonucleótidos MassPREP de Waters que contiene un secuencia de oligodT de 15-35 mer para verificar el control de calidad (QC) de todas las columnas de oligonucleótidos de marca de Waters, un patrón de ssDNA de 20 mer para la evaluación comparativa de la fragmentación LC-MS/MS y el análisis de secuencias, un oligonucleótido antisentido (ASO) muy modificado y conjugado con lípidos, secuencias ssDNA y dsDNA, y más.

  • Reversed-Phase Analysis
  • Oligonucleotide Separations

Columnas VanGuard FIT para prolongar la vida útil de las columnas

Columnas VanGuard FIT para prolongar la vida útil de las columnas

Todas las columnas ACQUITY y XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 están disponibles en el formato de columna VanGuard FIT, que incluye un cartucho precolumna de 5 mm completamente integrado lleno del mismo sorbente y actúa como protección para evitar la contaminación de la columna analítica. El diseño totalmente integrado no tiene ningún impacto en la resolución de la muestra. El cartucho se puede sustituir fácilmente en caso de suciedad, lo que prolonga la vida útil de la columna analítica.

  • Reversed-Phase Analysis
  • Oligonucleotide Separations

Aplicaciones

Waters ha producido más de 30 notas de aplicación que abordan la caracterización de oligonucleótidos y el análisis de impurezas utilizando nuestras herramientas de cromatografía líquida y espectrometría de masas, líderes en tecnología, con fines terapéuticos y de diagnóstico. Los siguientes ejemplos recientes resaltan nuestra profunda experiencia en aplicaciones y las herramientas más nuevas y avanzadas.

Waters ha producido más de 30 notas de aplicación que abordan la caracterización de oligonucleótidos y el análisis de impurezas utilizando nuestras herramientas de cromatografía líquida y espectrometría de masas, líderes en tecnología, con fines terapéuticos y de diagnóstico. Los siguientes ejemplos recientes resaltan nuestra profunda experiencia en aplicaciones y las herramientas más nuevas y avanzadas.


Notas de aplicación

Notas de aplicación

Como un ARN bicatenario, los tratamientos con oligonucleótidos para el tratamiento con ARN interferentes de pequeño tamaño (siRNA) presentan desafíos analíticos únicos. Estas notas de aplicación muestran las separaciones cromatográficas desnaturalizantes y no desnaturalizantes.

Como un ARN bicatenario, los tratamientos con oligonucleótidos para el tratamiento con ARN interferentes de pequeño tamaño (siRNA) presentan desafíos analíticos únicos. Estas notas de aplicación muestran las separaciones cromatográficas desnaturalizantes y no desnaturalizantes.


Notas de aplicación

Notas de aplicación

La secuencia de nucleótidos para los oligonucleótidos diagnósticos y terapéuticos es fundamental para su especificidad y función. Por lo tanto, es esencial confirmar con exactitud su secuencia. Los flujos de trabajo de LC-MS permiten una confirmación del 100 % de la secuencia de oligonucleótidos y ofrecen la capacidad única de confirmar la identidad y la ubicación de los nucleótidos modificados en la secuencia, ya sea para oligonucleótidos sintéticos o generados a partir de una digestión con nucleasas de ácidos nucleicos de cadena más larga (p. ej., flujo de trabajo de mapeo de ssDNA o ARNm).

La secuencia de nucleótidos para los oligonucleótidos diagnósticos y terapéuticos es fundamental para su especificidad y función. Por lo tanto, es esencial confirmar con exactitud su secuencia. Los flujos de trabajo de LC-MS permiten una confirmación del 100 % de la secuencia de oligonucleótidos y ofrecen la capacidad única de confirmar la identidad y la ubicación de los nucleótidos modificados en la secuencia, ya sea para oligonucleótidos sintéticos o generados a partir de una digestión con nucleasas de ácidos nucleicos de cadena más larga (p. ej., flujo de trabajo de mapeo de ssDNA o ARNm).


Notas de aplicación

Notas de aplicación

Los atributos de calidad críticos clave para las vacunas y los productos terapéuticos basados en ARNm incluyen la confirmación de la longitud y la polidispersidad de la cola poliA, así como la identidad del capping en 5' y cualquier posible variante de bajo nivel presente. Estas notas de aplicación muestran estos análisis mediante cromatografía de fase reversa de par iónico

Los atributos de calidad críticos clave para las vacunas y los productos terapéuticos basados en ARNm incluyen la confirmación de la longitud y la polidispersidad de la cola poliA, así como la identidad del capping en 5' y cualquier posible variante de bajo nivel presente. Estas notas de aplicación muestran estos análisis mediante cromatografía de fase reversa de par iónico


Notas de aplicación

Notas de aplicación

Durante el desarrollo de fármacos, desde el descubrimiento temprano hasta el desarrollo en etapa tardía, se requiere material de oligonucleótidos purificado adecuado para facilitar una variedad de estudios diferentes y mejorar los esquemas de purificación. Esta nota de aplicación presenta un enfoque sistemático, rentable y de alto rendimiento para las separaciones analíticas y un esquema de purificación preparativa para un oligonucleótido de 20 mer.

Durante el desarrollo de fármacos, desde el descubrimiento temprano hasta el desarrollo en etapa tardía, se requiere material de oligonucleótidos purificado adecuado para facilitar una variedad de estudios diferentes y mejorar los esquemas de purificación. Esta nota de aplicación presenta un enfoque sistemático, rentable y de alto rendimiento para las separaciones analíticas y un esquema de purificación preparativa para un oligonucleótido de 20 mer.


Notas de aplicación

Notas de aplicación


Los datos hablan por sí solos

Los datos hablan por sí solos
Cuatro inyecciones consecutivas de 3 µL de solución dúplex C (0,40 mg/mL) utilizando la columna ACQUITY Premier Oligonucleotide BEH C18, 300 Å.
Determinaciones de la pureza en fracciones para un proceso de purificación de 25 mg.
Cobertura de secuencia completa (100 %), presentada en formato de mapa de puntos, producida por fragmentación no dirigida de MSE de alta energía. 
Cromatograma experimental observado con un gradiente cóncavo (logarítmico) de 1,33 minutos en una columna ultracorta ACQUITY Premier Oligonucleotide de 2,1 × 20 mm, a F = 1,5 mL/min y T = 70 °C.

Seminarios online y recursos


  • Póster

Consumibles de LC y LC-MS para bioseparaciones (póster)

Consumibles de LC y LC-MS para bioseparaciones (póster)
  • Infografía

Columnas ACQUITY Premier para análisis de oligonucleótidos (infografía)

Columnas ACQUITY Premier para análisis de oligonucleótidos (infografía)
  • User Manuals

Manual de uso y mantenimiento de las columnas ACQUITY UPLC y ACQUITY Premier Oligonucleotide BEH C18

Manual de uso y mantenimiento de las columnas ACQUITY UPLC y ACQUITY Premier Oligonucleotide BEH C18
  • User Manuals

Manual de uso y mantenimiento del estándar de tecnología de separaciones de oligonucleótidos

Manual de uso y mantenimiento del estándar de tecnología de separaciones de oligonucleótidos
  • eBook

purificación de oligonucleótidos

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  • eBook

cuantificación de oligonucleótidos

cuantificación de oligonucleótidos

Relacionado

Logre aumentos en la sensibilidad y la recuperación de analitos mientras se reduce el tiempo de pasivación de la columna y se eliminan las interacciones no deseadas entre el analito y la superficie con las columnas ACQUITY Premier.

Analice productos de terapia génica para obtener información sobre la potencia y la seguridad de la muestra con las columnas para cromatografía de exclusión por tamaño (SEC) con terapia génica (GTx) de Waters, diseñadas para proporcionar datos exactos de alto rendimiento.

Logre una recuperación aumentada hasta 2 veces, un flujo de trabajo optimizado y una mayor sensibilidad y repetibilidad de LC-MS para el bioanálisis de oligonucleótidos.

Logre una purificación de oligonucleótidos de alto rendimiento y alta recuperación con consumibles y columnas de preparación de densidad de lecho óptima (OBD) de oligonucleótidos Waters XBridge que se prueban por lotes.

Obtenga más información sobre las columnas de fase reversa para oligonucleótidos.

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