Kits y columnas de bioconjugados

Kits y columnas de bioconjugados

Confíe en Waters como solución de proveedor único para las columnas y kits de bioconjugados y de conjugados anticuerpo-fármaco (ADC) en aplicaciones de descubrimiento, desarrollo y fabricación.

Confíe en Waters como solución de proveedor único para las columnas y kits de bioconjugados y de conjugados anticuerpo-fármaco (ADC) en aplicaciones de descubrimiento, desarrollo y fabricación.
Columnas BioResolve para el análisis de proteínas intactas, la caracterización, la monitorización y el control de calidad de las variantes de carga de mAb y ADC.
Columnas BioResolve para el análisis de proteínas intactas, la caracterización, la monitorización y el control de calidad de las variantes de carga de mAb y ADC.

Descripción general

A medida que las organizaciones biofarmacéuticas exploran el uso de bioconjugados y ADC como una clase de terapias contra el cáncer, se encuentran importantes desafíos al analizar sus estructuras complejas y heterogéneas. Waters proporciona soluciones para estos desafíos analíticos únicos al facilitar la evaluación de muchos atributos de calidad críticos (CQA), incluida la determinación de las relaciones fármaco-anticuerpo (DAR), incluso en niveles bajos, utilizando columnas de fase reversa (RP) o de cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC), la agregación y la fragmentación con columnas de exclusión por tamaños (SEC) y los sitios de conjugación con kits de digestiones tripsínicas de proteínas PeptideWorks para el mapeo de péptidos, entre otros.

Nuestras completas ofertas de columnas incluyen:

  • Columnas de fase reversa
  • Columnas HIC
  • Columnas SEC
  • Columnas de intercambio iónico
  • Columnas de glicoproteínas

Tanto si analiza ADC conjugados con lisina para minimizar las interacciones secundarias entre los ADC y el soporte de la columna, como si busca superar otros desafíos de calidad de los datos, Waters cuenta con la tecnología de columna adecuada para realizar las bioseparaciones de forma uniforme y fiable.

Reducir las interacciones hidrofóbicas no deseadas con las superficies de alto rendimiento (HPS) MaxPeak Premier

Reducir las interacciones hidrofóbicas no deseadas con las superficies de alto rendimiento (HPS) MaxPeak Premier

Las columnas MaxPeak Premier de Waters permiten a los científicos tener más control sobre sus separaciones cromatográficas con la inclusión de la tecnología de superficies de alto rendimiento (HPS) MaxPeak. Por ejemplo, cuando las proteínas se separan por tamaño en solución, pueden producirse interacciones secundarias que provoquen pérdida de muestra, picos más anchos y una cuantificación inexacta de los agregados. La tecnología de superficie de alto rendimiento MaxPeak se desarrolló utilizando partículas SEC híbridas con puentes de etileno (BEH) con óxido de polietileno (PEO) terminado en hidroxi de alta cobertura y son excepcionalmente bioinertes para obtener datos más exactos. Minimizan las interacciones hidrofóbicas que causan interacciones secundarias, lo que proporciona una forma de picos excepcional y una cuantificación uniforme.

Los formatos y tamaños de partícula ≤3 µm, que están disponibles en tamaños de 1,7 µm (columnas ACQUITY Premier), 2,5 µm (columnas XBridge Premier, columnas XSelect Premier) y columnas BioResolve Premier seleccionadas, obtienen el rendimiento cromatográfico, la flexibilidad y la garantía esperados de las tecnologías de partícula de confianza de Waters.

Soluciones

Columnas de fase reversa para la determinación de DAR y la distribución de fármacos

Columnas de fase reversa para la determinación de DAR y la distribución de fármacos
Columnas de fase reversa

Las columnas de fase reversa para bioconjugados y conjugados de anticuerpo-fármaco con HPS MaxPeak, como las columnas ACQUITY y XBridge Premier Protein BEH C4, están diseñadas exclusivamente para minimizar las interacciones secundarias entre los ADC y el soporte de la columna, y son adecuadas para el análisis de ADC conjugados con lisina. A diferencia de los ADC conjugados con cisteína, los puentes disulfuro intracatenarios que mantienen los enlaces entre las cadenas pesadas y ligeras del mAb de los ADC conjugados con lisina están intactos. Por lo tanto, la cromatografía de fase reversa es adecuada para el análisis de los ADC conjugados con lisina cuando la química del conector no es lábil ante el pH ácido. Además, Waters ofrece columnas de fase reversa con tecnología de partículas de núcleo sólido, como BioResolve RP mAb Polyphenyl para el análisis de masa intacta y de subunidades a fin de determinar la localización de fármacos vinculados en el nivel de dominio. 

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  • Reversed-Phase Analysis

Cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC) para la determinación de DAR

Cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC) para la determinación de DAR
Columnas HIC

Las columnas de HIC Protein-Pak Hi Res de Waters con partículas no porosas contienen una baja densidad de ligandos de butilo para una resolución excepcional en menos tiempo en comparación con el uso de muchas ofertas de HIC porosas tradicionales, lo que garantiza un rendimiento uniforme entre lotes mediante pruebas de control de calidad con patrones de proteínas definidos.

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  • HIC Analysis

Logre una exactitud de agregación uniforme con columnas SEC

Logre una exactitud de agregación uniforme con columnas SEC
Columnas SEC

Elimine la necesidad de crear varias fases móviles de eluyente SEC con diferentes proteínas mediante el uso de un método de plataforma con solución salina tamponada con fosfato (es decir, PBS) para obtener datos de agregados, de monómeros y fragmentados siempre exactos con columnas SEC de Waters. Además, para los bioconjugados que pueden ser hidrofóbicos y que crean interacciones secundarias no deseadas, no es necesario añadir eluyente orgánico con las columnas MaxPeak Premier Protein SEC y sus partículas BEH unidas a PEO.

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  • SEC Analysis

Caracterice y controle las variantes de carga con cromatografía de intercambio catiónico

Caracterice y controle las variantes de carga con cromatografía de intercambio catiónico
Columnas SCX

Mida con exactitud los perfiles de variantes de carga de los ADC unidos a cisteína y a lisina con la columna de BioResolve SCX mAb y los tampones concentrados de pH BioResolve CX para gradientes salinos o de pH con interacciones secundarias mínimas en la detección óptica. Para obtener información estructural con espectrometría de masas en intercambio iónico, nuestros tampones compatibles con MS, los tampones concentrados de pH IonHance CX-MS IonHance, hacen realidad la IEX-MS en línea con tampones volátiles de alta pureza adecuados para espectrometría de masas.

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  • Charged Variant Analysis
  • Cation-Exchange Chromatography

Mida la conjugación de oligonucleótidos con columnas de intercambio aniónico

Mida la conjugación de oligonucleótidos con columnas de intercambio aniónico
Columnas AEX

Los conjugados de anticuerpo-oligonucleótido (AOC) se utilizan habitualmente en el diagnóstico de proteínas y son una opción terapéutica prometedora para la terapia celular dirigida. La carga negativa neta de un AOC se expande con cada sitio de conjugación adicional, lo que da como resultado una mayor retención en una resina de intercambio aniónico. La columna GenPak FAX contiene un sorbente de intercambio aniónico débil que muestra una retención controlada y una selectividad única para las muestras de proteínas y oligonucleótidos. El trabajo de las aplicaciones recientes demuestra que AEX se puede acoplar con MALS para generar información de peso molecular absoluto.

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  • AEX OIigonucleotide Conjugate Analysis

Localice con precisión los glicanos dentro de una estructura de proteínas con las columnas de glicoproteínas

Localice con precisión los glicanos dentro de una estructura de proteínas con las columnas de glicoproteínas
Columnas de glicoproteínas

La cromatografía de interacción hidrofílica (HILIC) se ha utilizado ampliamente para separar compuestos polares pequeños, pero su aplicación para biomoléculas grandes, distintas de los glicanos liberados, ha sido sorprendentemente limitada. Con las columnas Glycoprotein de poro grande de Waters, ahora es posible utilizar HILIC para obtener información previamente inalcanzable de proteínas intactas (con o sin glicosilación), fragmentos de proteínas y glicanos liberados complejos.

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  • Hydrophillic Interaction Chromatography (HILIC)
  • Released Glycans

Flujo de trabajo de digestión de proteínas rápido, automatizable y robusto

Flujo de trabajo de digestión de proteínas rápido, automatizable y robusto
Kits de digestiones tripsínicas de proteínas PeptideWorks

Los kits de digestiones tripsínicas de proteínas PeptideWorks de Waters para flujos de trabajo manuales o automatizados proporcionan al laboratorio mapas de péptidos reproducibles de alta eficacia en menos de 2,5 horas (4 veces más rápido que el promedio de los métodos caseros). Logre digestiones de 30 minutos con una relación enzima:péptido de 1:5, una reducción del 78 % en las escisiones omitidas y una reducción del 98 % en los picos de autólisis contaminados. PeptideWorks es ideal para la determinación del sitio de conjugación de fármacos, la caracterización estructural de proteínas, la identificación de proteínas y el control de la modificación de proteínas, incluidas las modificaciones postranslacionales.

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  • Peptides
  • Peptide Mapping
  • Protein Digestion

De ese modo, el análisis de glicanos es más fácil y sensible

De ese modo, el análisis de glicanos es más fácil y sensible
Kits de N-glicanos liberados GlycoWorks RapiFluor-MS

Vuelva a imaginar una forma optimizada, rápida y altamente sensible de crear perfiles de N-glicanos en ADC con el kit GlycoWorks. Alcance un rendimiento sin precedentes de la espectrometría de masas y de la fluorescencia para el análisis de N-glicanos liberados, a la vez que maximiza la productividad con una solución que se puede automatizar en el robot de pipeteo Andrew+ de Waters. Con solo 3 sencillos pasos en tan solo 30 minutos, el kit GlycoWorks RapiFluor-MS N-Glycan reduce la complicada y tediosa preparación de muestras.

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  • n-glycan analysis
  • glycosylation

Elimine la complejidad de la cuantificación de proteínas

Elimine la complejidad de la cuantificación de proteínas
Kits de preparación de muestras ProteinWorks

Simplifique y acelere la digestión de proteínas con los kits de digestión ProteinWorks eXpress. Reactivos predosificados y trazables por lote y protocolos normalizados para una cuantificación LC-MS exacta, precisa y sensible de proteínas, incluidos los ADC, en plasma y suero. Consiga un rendimiento y una flexibilidad inigualables para la digestión de proteínas reproducible con kits optimizados para diversos flujos de trabajo, incluido el bioanálisis de proteínas/DMPK.

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  • Proteins
  • Protein bioanalysis

Reduzca el coste de los análisis SEC sin concesiones

Reduzca el coste de los análisis SEC sin concesiones
Precolumnas MaxPeak Premier Protein SEC de 250 Å

El uso de las precolumnas MaxPeak Premier Protein SEC de 250 Å disponibles y rentables ayuda a prolongar la vida útil de las columnas analíticas SEC sin degradar la resolución deseada de los componentes separados ni comprometer las separaciones requeridas por variantes de tamaño.  

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  • SEC Columns
  • Proteins

Aplicaciones

Optimice la adquisición, el tratamiento y la generación de informes de datos para el análisis de ADC mediante LC-UV o LC-MS. Obtenga más información con estas notas de la aplicación

Optimice la adquisición, el tratamiento y la generación de informes de datos para el análisis de ADC mediante LC-UV o LC-MS. Obtenga más información con estas notas de la aplicación

Notas de aplicación

La determinación fiable y reproducible de DAR basada en la distribución de la concentración del fármaco en los ADC conjugados con cisteína en las áreas de los picos se logra de manera uniforme con la columna de cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC) Protein-Pak de alta resolución utilizando detección óptica. Obtenga más información con estas notas de la aplicación.

La determinación fiable y reproducible de DAR basada en la distribución de la concentración del fármaco en los ADC conjugados con cisteína en las áreas de los picos se logra de manera uniforme con la columna de cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC) Protein-Pak de alta resolución utilizando detección óptica. Obtenga más información con estas notas de la aplicación.

Notas de aplicación

La cromatografía de exclusión por tamaño (SEC) determina agregados, monómeros y fragmentos de péptidos y proteína en la investigación, el desarrollo y la fabricación de ADC con pesos moleculares de 100 000-650 000 daltons. Mantenga una alta productividad en la caracterización de ADC con nuestras columnas SEC basadas en BEH cuya calidad se controla con los patrones de péptidos y proteínas MassPrep para garantizar la uniformidad de la separación en todo el flujo de trabajo de SEC-MS. Obtenga más información con estas notas de la aplicación.

La cromatografía de exclusión por tamaño (SEC) determina agregados, monómeros y fragmentos de péptidos y proteína en la investigación, el desarrollo y la fabricación de ADC con pesos moleculares de 100 000-650 000 daltons. Mantenga una alta productividad en la caracterización de ADC con nuestras columnas SEC basadas en BEH cuya calidad se controla con los patrones de péptidos y proteínas MassPrep para garantizar la uniformidad de la separación en todo el flujo de trabajo de SEC-MS. Obtenga más información con estas notas de la aplicación.

Notas de aplicación

El análisis de variantes de carga para los ADC unidos a lisina y cisteína con mecanismos de elución con gradientes salinos y de pH se puede alcanzar de forma rutinaria con las columnas SCX de Waters. Estas columnas resistentes a la corrosión contienen partículas no porosas de base polimérica a las que se introduce una red multicomponente rigurosamente optimizada de ligandos de ácido sulfónico cargados negativamente, para obtener separaciones reproducibles, de alta resolución y basadas en la carga de mAb y otras proteínas en aplicaciones LC y LC-MS. Obtenga más información con estas notas de la aplicación.

El análisis de variantes de carga para los ADC unidos a lisina y cisteína con mecanismos de elución con gradientes salinos y de pH se puede alcanzar de forma rutinaria con las columnas SCX de Waters. Estas columnas resistentes a la corrosión contienen partículas no porosas de base polimérica a las que se introduce una red multicomponente rigurosamente optimizada de ligandos de ácido sulfónico cargados negativamente, para obtener separaciones reproducibles, de alta resolución y basadas en la carga de mAb y otras proteínas en aplicaciones LC y LC-MS. Obtenga más información con estas notas de la aplicación.

Notas de aplicación

La separación de glicoproteínas intactas, fragmentos de glicoproteínas y glicopéptidos puede ser un desafío. Las columnas HILIC pueden producir una mayor recuperación de las subunidades de mAb y ADC particularmente difíciles en comparación con los métodos de RPLC habituales, al tiempo que mantienen una buena separación. La HILIC de las subunidades de mAb también se puede utilizar para evaluar perfiles de N-glicosilación. Con columnas HILIC de Waters, cada lote de material de glicoproteína BEH amida de 300 Å, 1,7 µm se somete a pruebas de control de calidad con el patrón Waters Glycoprotein Performance Test para garantizar la uniformidad de un lote a otro. Obtenga más información con estas notas de la aplicación.

La separación de glicoproteínas intactas, fragmentos de glicoproteínas y glicopéptidos puede ser un desafío. Las columnas HILIC pueden producir una mayor recuperación de las subunidades de mAb y ADC particularmente difíciles en comparación con los métodos de RPLC habituales, al tiempo que mantienen una buena separación. La HILIC de las subunidades de mAb también se puede utilizar para evaluar perfiles de N-glicosilación. Con columnas HILIC de Waters, cada lote de material de glicoproteína BEH amida de 300 Å, 1,7 µm se somete a pruebas de control de calidad con el patrón Waters Glycoprotein Performance Test para garantizar la uniformidad de un lote a otro. Obtenga más información con estas notas de la aplicación.

Notas de aplicación

Los datos hablan por sí solos

Los datos hablan por sí solos
Espectros de masas intactas deconvolucionados para los ADC conjugados con cisteína a partir de SEC-LC-MS nativos después de la desglicosilación. Se comparó la distribución del fármaco de tres muestras diferentes de ADC conjugado con cisteína con una concentración de fármaco creciente. 
Perfil de variantes de carga de un conjugado de anticuerpo-fármaco unido a cisteína descatalogado de Pfizer, obtenido mediante cromatografía de intercambio iónico. (A) Cromatogramas UV obtenidos con el método de gradiente salino de MES 20 mM (pH 5,4) y un aumento lineal de la concentración de cloruro de sodio de 140-220 mM en 30 minutos a 0,80 ml/min en una BioResolve SCX mAb, 4,6 x 100 mm. Cromatogramas UV obtenidos con métodos de gradiente de pH en una columna BioResolve SCX mAb, 4,6 x 50 mm, utilizando concentrados de pH BioResolve CX y fases móviles sin (B), con un 5 % (C) o con un 10 % de acetonitrilo (D) y un aumento lineal del porcentaje de fase móvil B del 0 al 100 % en 30 minutos a 1,00 ml/min. (E) Superposición de los cromatogramas UV obtenidos con métodos de gradiente de pH en una columna BioResolve SCX mAb de 4,6 x 50 mm utilizando concentrados de pH BioResolve CX y fases móviles, con un 5 % y con un 10 % de acetonitrilo. La detección UV se realizó a 280 nm.
Cromatografía de interacción hidrofílica de un mAb frente a su ADC. Los números representan la cantidad de conectores/cargas presentes en el conjugado, donde a y b indican isómeros posicionales. * indica los productos de hidrólisis del conector/carga. # indica oxidación en el nivel de trazas. La glicosilación se etiqueta según la notación de Oxford. F indica fucosa, A2 representa que las estructuras son biantenarias y G significa galactosa (FA2 = G0F, FA2G1 = G1F y FA2G2 = G2F).
AEX-MALS de una muestra de AOC obtenida con una columna Gen-Pak FAX de Waters. Se muestra un cromatograma UV de 280 nm con la masa molar superpuesta. Los límites de los picos se indican mediante líneas discontinuas verticales.
Comparación del mapeo de péptidos (cromatogramas UV) de un trastuzumab conjugado y no conjugado
Arriba: Digestión tripsínica con un biosimilar de trastuzumab.
Abajo: Trastuzumab emtansina (Kadcyla), digestión tripsínica de conjugado de anticuerpo-fármaco.
En ambas digestiones tripsínicas se utilizó el kit de digestiones tripsínicas de proteínas PeptideWorks y de tripsina RapiZyme con inyección de 100 µl (aprox. 10 µg) en una columna XSelect Premier Peptide CSH C18 de 2,5 µm, 2,1 x 150 mm. Picos adicionales observados en el cromatograma de Kadcyla (abajo) en comparación con trastuzumab no conjugado (arriba). 
Comparación del rendimiento de las interacciones secundarias hidrofóbicas con el ADC ado-trastuzumab emtansina. Al aumentar la concentración orgánica, el grado de cambio observado para la columna XBridge Premier Protein SEC 250 Å, 2,5 µm vuelve a ser insignificante, con una forma de picos excepcional del 0 al 15 % de MeCN. Las interacciones secundarias hidrofóbicas se han mitigado en gran medida mediante el uso de enlaces de material de relleno de PEO terminado en hidroxi de alta cobertura.
Análisis de ADC conjugado con cisteína mediante HIC. Se determinó la distribución del fármaco de tres muestras diferentes de ADC conjugado con cisteína con una concentración de fármaco creciente.

Seminarios web y recursos

  • Reimpresión del artículo

Perfiles de LC-MS de alta sensibilidad de conjugados de anticuerpo-fármaco con par iónico de ácido difluoroacético

Perfiles de LC-MS de alta sensibilidad de conjugados de anticuerpo-fármaco con par iónico de ácido difluoroacético
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  • Póster

Mejora de los perfiles en el nivel de subunidades de mAb y ADC con ácido difluoroacético de calidad MS

Mejora de los perfiles en el nivel de subunidades de mAb y ADC con ácido difluoroacético de calidad MS
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Columnas BioResolve para el análisis de proteínas intactas, la caracterización, la monitorización y el control de calidad de las variantes de carga de mAb y ADC.
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