Colunas de fase reversa para oligonucleotídeos

Colunas de fase reversa para oligonucleotídeos

Obtenha a tolerância de pH e temperatura líderes do setor e resolução excepcional com as colunas de fase reversa para oligonucleotídeos da Waters para caracterização de oligonucleotídeos e análises de impurezas. Cada lote de sorvente é testado no controle de qualidade (CQ) com padrões de oligonucleotídeos para garantir o desempenho e a reprodutibilidade entre lotes.

Obtenha a tolerância de pH e temperatura líderes do setor e resolução excepcional com as colunas de fase reversa para oligonucleotídeos da Waters para caracterização de oligonucleotídeos e análises de impurezas. Cada lote de sorvente é testado no controle de qualidade (CQ) com padrões de oligonucleotídeos para garantir o desempenho e a reprodutibilidade entre lotes.
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Visão geral

A cromatografia de fase reversa de pareamento iônico (IPRP, Ion Pairing Reversed Phase) é o método preferido para a caracterização de oligonucleotídeos sintéticos e análise de impurezas. O método ajuda os cientistas a resolver a síntese e as impurezas relacionadas ao processo melhor do que qualquer outra técnica cromatográfica, incluindo a troca aniônica (AEX, Anion Exchange), HILIC e SEC. A técnica não está isenta de desafios. Vários fatores podem afetar diretamente o desempenho e a reprodutibilidade da separação, incluindo a pureza e a estabilidade dos reagentes de pareamento iônico, a adsorção não específica ao hardware cromatográfico e as variações entre lotes no sorvente. A IPRP depende de condições de pH e temperatura elevados para separações ideais, o que exige que os materiais da coluna tenham alta tolerância de pH e temperatura.

Ganhe confiança em seus resultados utilizando as Colunas de fase reversa para oligonucleotídeos da Waters que oferecem o seguinte: 

  • Estabilidade de pH e temperatura líder do setor com tecnologia de partículas de sílica híbrida BEH C18 para resolução excepcional e vida útil da coluna.
  • Uma redução drástica da adsorção não específica (NSA, Non-Specific Adsorption) com a tecnologia de Superfícies de alto desempenho (HPS, High Performance Surface) MaxPeak para máxima sensibilidade, reprodutibilidade e produtividade.
  • Testes de CQ baseados em oligonucleotídeos para garantir o desempenho e a reprodutibilidade das separações entre lotes.

Sensibilidade e reprodutibilidade aprimoradas sem condicionamento de coluna

Sensibilidade e reprodutibilidade aprimoradas sem condicionamento de coluna

Os ácidos nucleicos, incluindo os oligonucleotídeos, são polianiônicos (carregados negativamente) e são prontamente adsorvidos a superfícies de óxido metálico em colunas de aço inoxidável. As Colunas Waters MaxPeak Premier para oligonucleotídeos têm uma química de superfície inerte híbrida orgânica/inorgânica à base de sílica que praticamente elimina a NSA dos ácidos nucleicos, permitindo maior sensibilidade, reprodutibilidade e produtividade.  Com a Waters, seu laboratório pode eliminar as etapas demoradas de passivação da coluna e condicionamento de amostra antes da análise.

Resolução excepcional de oligonucleotídeos sintéticos

Resolução excepcional de oligonucleotídeos sintéticos

A cromatografia de IP-RP de oligonucleotídeos sintéticos resolve os componentes da amostra com base em pequenas alterações de tamanho, carga e hidrofobicidade. As Colunas Waters ACQUITY (UPLC: tamanho de partícula de 1,7 µm) e XBridge (HPLC/UHPLC: tamanho de partícula de 2,5 µm) Premier BEH C18 para oligonucleotídeos oferecem resolução de amostra, sensibilidade e reprodutibilidade excepcionais para oligonucleotídeos.

Excelente vida útil da coluna

Excelente vida útil da coluna

As Colunas Waters ACQUITY e XBridge Premier para oligonucleotídeos são preenchidas com partículas BEH (híbridas com pontes de etileno) de sílica C18 da Waters e demonstram uma longevidade notável da coluna sob condições de pH e temperatura elevados, mantendo um desempenho inigualável nas separações.

Soluções

Colunas de 2,1 x 20 mm para separações ultrarrápidas

Colunas de 2,1 x 20 mm para separações ultrarrápidas
Colunas ACQUITY Premier de 2,1 x 20 mm BEH C18 para oligonucleotídeos

Os oligonucleotídeos e os ácidos nucleicos mais longos exibem um forte mecanismo de ligação e eluição ativadas/desativadas, o que os torna passíveis de "gradientes balísticos" e separações ultrarrápidas que podem melhorar a produtividade em laboratórios de testes de alto rendimento. As Colunas Waters ACQUITY Premier BEH C18 de 2,1 x 20 mm para oligonucleotídeos de tamanhos de poros de 130 Å e 300 Å possibilitam separações ultrarrápidas de oligonucleotídeos de curto comprimento em mer (10–40 nt) e longo comprimento em mer (> 40 nt), respectivamente.

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Colunas MaxPeak Premier de poro largo (300 Å) para oligonucleotídeos de longo comprimento em mer

Colunas MaxPeak Premier de poro largo (300 Å) para oligonucleotídeos de longo comprimento em mer
Colunas MaxPeak Premier de poro largo (300 Å)

As Colunas ACQUITY (1,7 µm) e XBridge (2,5 µm) Premier para oligonucleotídeos estão disponíveis em tamanhos de poro de 130 Å e 300 Å, que demonstram diferenças na capacidade de retenção e na nitidez do pico, dependendo do comprimento do oligonucleotídeo. A área de superfície aumentada das partículas com poros de 130 Å permite maior retenção e resolução de oligonucleotídeos de curto comprimento em mer (< ~40 mer), enquanto as partículas com poros de 300 Å permitem maior difusão e resolução aprimorada para oligonucleotídeos mais longos (> ~40 mer).

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Padrões de ácidos nucleicos/oligonucleotídeos para comparação de desempenho

Padrões de ácidos nucleicos/oligonucleotídeos para comparação de desempenho
Padrões de ácidos nucleicos e oligonucleotídeos

A Waters fornece uma variedade de padrões analíticos rastreáveis em lote de alta qualidade que complementam nossas colunas de fase reversa para oligonucleotídeos para facilitar os testes de adequação do sistema, o desenvolvimento de métodos e a solução de problemas. Isso inclui o Padrão Waters MassPREP para oligonucleotídeos, que contém uma escada de oligodT de 15 a 35 mer para verificar o controle de qualidade de todas as colunas para oligonucleotídeos da Waters, um padrão de ssDNA de 20 mer para comparação de fragmentação de LC-MS/MS e análise de sequência, um oligonucleotídeo antissentido conjugado com lipídio (ASO) fortemente modificado, escadas de ssDNA e dsDNA e muito mais.

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Colunas VanGuard FIT para vida útil estendida da coluna

Colunas VanGuard FIT para vida útil estendida da coluna
Coluna VanGuard FIT

Todas as Colunas ACQUITY e XBridge Premier BEH C18 para oligonucleotídeos estão disponíveis no formato da Coluna VanGuard FIT, que inclui um cartucho de pré-coluna de 5 mm totalmente integrado, embalado com o mesmo sorvente e que atua como um protetor para evitar acúmulos na coluna analítica. O design totalmente integrado tem impacto zero na resolução da amostra. O cartucho pode ser facilmente substituído em caso de acúmulo, aumentando a vida útil da sua coluna analítica.

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Aplicações

A Waters produziu mais de 30 notas de aplicação abordando a caracterização de oligonucleotídeos e a análise de impurezas utilizando nossas ferramentas de cromatografia líquida e espectrometria de massas líderes em tecnologia para fins terapêuticos e de diagnóstico. Os exemplos recentes a seguir destacam nossa profunda experiência em aplicações e as ferramentas mais novas e avançadas.

A Waters produziu mais de 30 notas de aplicação abordando a caracterização de oligonucleotídeos e a análise de impurezas utilizando nossas ferramentas de cromatografia líquida e espectrometria de massas líderes em tecnologia para fins terapêuticos e de diagnóstico. Os exemplos recentes a seguir destacam nossa profunda experiência em aplicações e as ferramentas mais novas e avançadas.

Notas de aplicação

Notas de aplicação

Como um RNA de fita dupla, a terapêutica de oligonucleotídeos de RNA de interferência pequena (siRNA, Small Interfering RNA) apresenta desafios analíticos únicos. Estas notas de aplicação demonstram separações cromatográficas não desnaturantes e desnaturantes.

Como um RNA de fita dupla, a terapêutica de oligonucleotídeos de RNA de interferência pequena (siRNA, Small Interfering RNA) apresenta desafios analíticos únicos. Estas notas de aplicação demonstram separações cromatográficas não desnaturantes e desnaturantes.

Notas de aplicação

Notas de aplicação

A sequência de nucleotídeos para oligonucleotídeos terapêuticos e para diagnósticos é fundamental para sua especificidade e função. Portanto, é essencial confirmar com exatidão sua sequência. As rotinas de trabalho de LC-MS possibilitam 100% de confirmação da sequência de oligonucleotídeos e oferecem a capacidade exclusiva de confirmar a identidade e a localização de nucleotídeos modificados na sequência, seja para oligonucleotídeos sintéticos ou para aqueles gerados a partir de uma digestão de nuclease de ácidos nucleicos de cadeia mais longa (por exemplo, rotina de trabalho de mapeamento de oligo mRNA ou ssDNA).

A sequência de nucleotídeos para oligonucleotídeos terapêuticos e para diagnósticos é fundamental para sua especificidade e função. Portanto, é essencial confirmar com exatidão sua sequência. As rotinas de trabalho de LC-MS possibilitam 100% de confirmação da sequência de oligonucleotídeos e oferecem a capacidade exclusiva de confirmar a identidade e a localização de nucleotídeos modificados na sequência, seja para oligonucleotídeos sintéticos ou para aqueles gerados a partir de uma digestão de nuclease de ácidos nucleicos de cadeia mais longa (por exemplo, rotina de trabalho de mapeamento de oligo mRNA ou ssDNA).

Notas de aplicação

Notas de aplicação

Os principais atributos críticos de qualidade para vacinas e terapias baseadas em mRNA incluem a confirmação do comprimento e da polidispersão da cauda poli-A, bem como a identidade do capeamento 5' e quaisquer possíveis variantes de baixo nível presentes. Estas notas de aplicação demonstram essas análises por meio de cromatografia de fase reversa de pareamento iônico.

Os principais atributos críticos de qualidade para vacinas e terapias baseadas em mRNA incluem a confirmação do comprimento e da polidispersão da cauda poli-A, bem como a identidade do capeamento 5' e quaisquer possíveis variantes de baixo nível presentes. Estas notas de aplicação demonstram essas análises por meio de cromatografia de fase reversa de pareamento iônico.

Notas de aplicação

Notas de aplicação

Durante o desenvolvimento de medicamentos, desde a descoberta inicial até o desenvolvimento de estágio avançado, é necessário um material de oligonucleotídeo purificado adequado para facilitar uma série de estudos diferentes e melhorar os esquemas de purificação. Estas notas de aplicação apresentam uma abordagem econômica, de alto rendimento e sistemática para separações analíticas e um esquema de purificação preparativa para um oligonucleotídeo de 20 mer.

Durante o desenvolvimento de medicamentos, desde a descoberta inicial até o desenvolvimento de estágio avançado, é necessário um material de oligonucleotídeo purificado adequado para facilitar uma série de estudos diferentes e melhorar os esquemas de purificação. Estas notas de aplicação apresentam uma abordagem econômica, de alto rendimento e sistemática para separações analíticas e um esquema de purificação preparativa para um oligonucleotídeo de 20 mer.

Notas de aplicação

Notas de aplicação

Os dados falam por si

Os dados falam por si
Quatro injeções consecutivas de 3 µL de duplex C (0,40 mg/mL) utilizando a Coluna ACQUITY Premier BEH C18 para oligonucleotídeos, 300 Å.
Determinações de pureza da fração para uma corrida de purificação de 25 mg.
Cobertura completa (100%) da sequência, apresentada em um formato de mapa de pontos, produzida por fragmentação não direcionada de MSE de alta energia. 
Cromatograma experimental observado com um gradiente côncavo (logarítmico) de 1,33 minuto em uma coluna ultracurta ACQUITY Premier 2,1 x 20 mm para oligonucleotídeos e operada a F = 1,5 mL/min e T = 70 °C.

Webinars e recursos

  • Wall Chart

Wall Chart: Consumíveis de LC e LC-MS para biosseparações

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  • Infographic

Infográfico: Colunas ACQUITY Premier para análise de oligonucleotídeos

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  • User Manuals

ACQUITY UPLC and ACQUITY Premier Oligonucleotide BEH C18 Columns Care and Use Manual (Manual de utilização e cuidados de Colunas ACQUITY UPLC e ACQUITY Premier BEH C18 para oligonucleotídeos)

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Oligonucleotide Separation Technology Standard Care and Use Manual (Manual de utilização e cuidados para padrões da tecnologia de separação de oligonucleotídeos)

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Purificação de oligonucleotídeos

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Quantificação de oligonucleotídeos

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Saiba mais sobre as colunas de fase reversa para oligonucleotídeos.

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