生物複合體管柱與套組

生物複合體管柱與套組

依靠Waters作為生物複合體與抗體藥物複合體(ADC)管柱及套組的單一來源解決方案，能因應藥物研究、藥物開發和製造等應用。

依靠Waters作為生物複合體與抗體藥物複合體(ADC)管柱及套組的單一來源解決方案，能因應藥物研究、藥物開發和製造等應用。
BioResolve管柱，適用於mAb和ADC電荷異構物的完整蛋白質分析、表徵分析、監測以及品質管控。
BioResolve管柱，適用於mAb和ADC電荷異構物的完整蛋白質分析、表徵分析、監測以及品質管控。

概述

生物製藥組織發現生物複合體和ADC可當作一類癌症治療藥物，不過在分析其複雜的異質結構時卻遇到重重難關。Waters提供的解決方案能協助克服這類特有的分析難題，使用逆相(RP)或疏水性作用層析(HIC)管柱，即使在低水平下也能幫助評估許多重要的關鍵品質屬性(CQA)，包括測定藥物抗體比(DAR)、使用粒徑篩析(SEC)管柱完成聚集和碎裂，以及使用PeptideWorks胰蛋白酶蛋白質分解套組找出複合位點以完成胜肽圖譜分析等等。

我們提供面面俱到的管柱產品，包括：

  • 逆相管柱
  • HIC管柱
  • SEC管柱
  • 離子交換管柱
  • 醣蛋白管柱

無論是分析離氨酸複合型ADC，力求徹底減少ADC與管柱硬體之間的二次交互作用，或是想克服其他數據品質難題，Waters都能提供合適的管柱技術，讓生物分離保持一致可靠。

MaxPeak Premier高效能表面(HPS)減少不必要的疏水性作用

MaxPeak Premier高效能表面(HPS)減少不必要的疏水性作用

Waters MaxPeak Premier管柱採用MaxPeak高效能表面(HPS)技術，能讓科學家更容易掌控層析分離作業。例如，按蛋白質在溶液中的大小分離時，可能會發生二次交互作用，導致樣品損失、波峰變寬，以及聚集體定量不準確。MaxPeak高效能表面技術採用架橋式乙烯混合物(BEH) SEC顆粒，搭配高覆蓋率的端羥基聚氧化乙烯(PEO)開發而成，具有優異的生物惰性，可讓數據更準確。這些技術能徹底降低導致二次交互作用的疏水性作用，提供出色的峰型和一致的定量結果。

可選的管柱有1.7 µm的ACQUITY Premier管柱、2.5 µm的XBridge Premier管柱及XSelect Premier管柱，以及≤3 µm粒徑大小和規格的BioResolve Premier管柱，均可透過Waters值得信賴的顆粒技術，達到期待的層析分離效能、靈活性及品質保證。

解決方案

適合DAR測定與藥物分佈的逆相管柱

適合DAR測定與藥物分佈的逆相管柱
逆相管柱

採用MaxPeak HPS的逆相管柱，適用於生物複合體及抗體藥物複合體，例如ACQUITY及XBridge Premier BEH C4蛋白質分析管柱，其設計獨特，能徹底減少ADC與管柱硬體之間的二次交互作用，適合分析離氨酸複合型ADC。不同於半胱胺酸複合型ADC，離氨酸複合型ADC的mAb重鏈和輕鏈之間的鏈內雙硫鍵保持整體完整。因此，當連接子充填材料在酸性pH條件下不穩定時，就適合用逆相層析來分析離氨酸複合型ADC。此外，Waters還提供採用實心顆粒技術的逆相管柱，例如BioResolve RP mAb Polyphenyl，進行完整分析和次單位分析，確定在結構域水平上連結藥物的範圍定位。

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  • Reversed-Phase Analysis

適合DAR測定的疏水性作用層析(HIC)

適合DAR測定的疏水性作用層析(HIC)
HIC管柱

Waters Protein-Pak高解析度HIC管柱採用非多孔顆粒，含低密度的丁基配位基，解析度出眾，相較於傳統的多種多孔HIC產品，所需時間更短，經過既定的蛋白質標準品品質管控檢測，確保批次間效能一致。

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  • HIC Analysis

SEC管柱能達到一致的聚集準確度

SEC管柱能達到一致的聚集準確度
SEC管柱

Waters SEC管柱採用磷酸鹽緩衝生理食鹽水（即PBS）的平台方法，不用為不同蛋白質製作多種SEC沖提液移動相，也能保有一致準確的聚集體、單體和碎片數據。 此外，對於可能導致不必要二次交互作用的疏水性生物複合體，採用MaxPeak Premier SEC蛋白質分析管柱及其PEO鍵結BEH顆粒，就不必加入有機溶劑。

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  • SEC Analysis

以陽離子交換層析來表徵分析和監測電荷異構物

以陽離子交換層析來表徵分析和監測電荷異構物
SCX管柱

使用BioResolve SCX mAb管柱和BioResolve CX pH緩衝濃縮液，在鹽梯度或pH梯度條件下，可準確量測半胱胺酸連結及離氨酸連結ADC的電荷異構物圖譜，而光學偵測中幾乎不會產生二次交互作用。如需以離子交換質譜分析得出結構見解，可使用與MS相容的緩衝液，也就是IonHance CX-MS pH濃縮緩衝液，提供適合質譜分析的高純度揮發性緩衝液，落實線上IEX-MS效果。

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  • Charged Variant Analysis
  • Cation-Exchange Chromatography

使用陰離子交換管柱量測寡核苷酸的複合物

使用陰離子交換管柱量測寡核苷酸的複合物
AEX管柱

抗體寡核苷酸複合體(AOC)常用於蛋白質診斷，是一種相當有前景的細胞標靶治療藥物。AOC的淨負電荷會隨著每增加一個複合位點而擴大，以致於更容易滯留在陰離子交換樹脂上。GenPak FAX管柱含弱陰離子交換吸附劑，對蛋白質與寡核苷酸樣品具有可控的滯留性，還能發揮獨有的選擇性。最近的應用研究證明，AEX可以與MALS結合使用，產生絕對分子量資訊。

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  • AEX OIigonucleotide Conjugate Analysis

使用醣蛋白管柱在蛋白質結構內精確定位聚醣

使用醣蛋白管柱在蛋白質結構內精確定位聚醣
醣蛋白管柱

親水性作用層析技術(HILIC)廣泛用於分離小分子極性化合物，令人驚訝的是，除用於游離聚醣之外，這項技術在大生物分子方面的應用相當有限。 現在有了 Waters醣蛋白大孔管柱，就能使用HILIC收集以往得不到的資訊，包括完整蛋白質（不論是否經醣基化處理）、蛋白質碎片以及複雜的游離聚醣。

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  • Hydrophillic Interaction Chromatography (HILIC)
  • Released Glycans

快速、可自動處理且穩定的蛋白質分解工作流程

快速、可自動處理且穩定的蛋白質分解工作流程
PeptideWorks胰蛋白酶蛋白質分解套組

Waters PeptideWorks胰蛋白酶蛋白質分解套組不論用於手動或自動工作流程，都能在2.5小時內提供效率高且能再現的胜肽圖譜，速度是一般內部開發方法的4倍。以1:5的酶:胜肽比例實現30分鐘內的分解，漏切比例減少78%，自切污染峰比例減少98%。PeptideWorks非常適合用於藥物複合位點確定、蛋白質結構表徵分析、蛋白質鑑定，以及蛋白質修飾監測（包括轉譯後修飾）。

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  • Peptides
  • Peptide Mapping
  • Protein Digestion

聚醣分析變得更容易、更靈敏

聚醣分析變得更容易、更靈敏
GlycoWorks RapiFluor-MS游離N-聚醣套組

GlycoWorks套組重新改變設想，讓ADC N-聚醣分析變成一種精簡、快速又高靈敏度的方法。讓游離N-聚醣分析發揮前所未見的螢光分析與質譜分析效能，還能在Waters Andrew+移液機械臂上自動執行解決方案，充分發揮生產力。GlycoWorks RapiFluor-MS N-聚醣套組僅需3個簡單的步驟，在短短30分鐘內，就能簡化複雜、耗時的樣品前處理。

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  • n-glycan analysis
  • glycosylation

蛋白質定量化繁為簡

蛋白質定量化繁為簡
ProteinWorks樣品前處理套組

ProteinWorks高速分解套組能簡化並加速蛋白質分解作業。使用預先量測、可追溯批號的試劑和標準化實驗步驟，對血漿和血清中的蛋白質（包括ADC）進行準確、精準和靈敏的LC-MS定量分析。這個套組經過各種工作流程（包括蛋白質生物分析/DMPK）的優化，讓可再現的蛋白質分解達到無可比擬的效能及靈活性。

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  • Proteins
  • Protein bioanalysis

降低SEC分析成本，效能不打折扣

降低SEC分析成本，效能不打折扣
MaxPeak Premier SEC蛋白質分析保護管柱250Å

使用經濟實惠的市售MaxPeak Premier SEC 250 Å蛋白質分析保護管柱，有助於延長SEC分析管柱的使用壽命，同時不會降低分離成分所需的解析度，也不會影響分離不同大小異構物的作業。  

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  • SEC Columns
  • Proteins

應用

讓LC-UV或LC-MS所進行的ADC分析，有更簡單的數據擷取、處理與報告流程。歡迎參閱這些應用手冊，瞭解更多資訊

讓LC-UV或LC-MS所進行的ADC分析，有更簡單的數據擷取、處理與報告流程。歡迎參閱這些應用手冊，瞭解更多資訊

應用手冊

採用Protein-Pak高解析度疏水性作用層析(HIC)管柱，透過光學偵測技術，根據半胱胺酸複合型ADC的峰面積的藥物負荷分佈，可靠、可再現地測定DAR。歡迎參閱這些應用手冊，瞭解更多資訊。

採用Protein-Pak高解析度疏水性作用層析(HIC)管柱，透過光學偵測技術，根據半胱胺酸複合型ADC的峰面積的藥物負荷分佈，可靠、可再現地測定DAR。歡迎參閱這些應用手冊，瞭解更多資訊。

應用手冊

在ADC的研究、開發和製造中，粒徑篩析層析(SEC)以介於100,000~650,000 Da的檢測分子量，可測定出胜肽和蛋白質聚集體、單體和碎片。BEH SEC管柱使用MassPrep胜肽與蛋白質標準品來管控品質，因此整個SEC-MS工作流程都能保持分離一致性，讓ADC表徵分析保持高生產力。歡迎參閱這些應用手冊，瞭解更多資訊。

在ADC的研究、開發和製造中，粒徑篩析層析(SEC)以介於100,000~650,000 Da的檢測分子量，可測定出胜肽和蛋白質聚集體、單體和碎片。BEH SEC管柱使用MassPrep胜肽與蛋白質標準品來管控品質，因此整個SEC-MS工作流程都能保持分離一致性，讓ADC表徵分析保持高生產力。歡迎參閱這些應用手冊，瞭解更多資訊。

應用手冊

對於離氨酸連結和半胱胺酸連結的ADC，以鹽梯度和pH梯度洗脫機制來進行電荷異構物分析，通常可以使用Waters SCX管柱來達成。這些耐腐蝕管柱含非多孔聚合物顆粒，嫁接了經過嚴格優化的多成分負電荷磺酸配位基串連網，可讓LC與LC-MS應用中的mAb和其他蛋白質，完成可再現的高解析度電荷分離處理。歡迎參閱這些應用手冊，瞭解更多資訊。

對於離氨酸連結和半胱胺酸連結的ADC，以鹽梯度和pH梯度洗脫機制來進行電荷異構物分析，通常可以使用Waters SCX管柱來達成。這些耐腐蝕管柱含非多孔聚合物顆粒，嫁接了經過嚴格優化的多成分負電荷磺酸配位基串連網，可讓LC與LC-MS應用中的mAb和其他蛋白質，完成可再現的高解析度電荷分離處理。歡迎參閱這些應用手冊，瞭解更多資訊。

應用手冊

分離完整的醣蛋白、醣蛋白碎片和醣胜肽，可能不是件易事。HILIC管柱比起一般RPLC方法，能讓特別棘手的mAb和ADC次單位達到較高的回收率，同時還能保持良好的分離效果。HILIC還可以用於評估mAb次單位的N-醣基化圖譜。使用Waters HILIC管柱，每批醣蛋白BEH Amide 300 Å, 1.7 µm材料，都會使用Waters醣蛋白效能測試標準品進行品質管控檢驗，確保批次間的一致性。歡迎參閱這些應用手冊，瞭解更多資訊。

分離完整的醣蛋白、醣蛋白碎片和醣胜肽，可能不是件易事。HILIC管柱比起一般RPLC方法，能讓特別棘手的mAb和ADC次單位達到較高的回收率，同時還能保持良好的分離效果。HILIC還可以用於評估mAb次單位的N-醣基化圖譜。使用Waters HILIC管柱，每批醣蛋白BEH Amide 300 Å, 1.7 µm材料，都會使用Waters醣蛋白效能測試標準品進行品質管控檢驗，確保批次間的一致性。歡迎參閱這些應用手冊，瞭解更多資訊。

應用手冊

數據不證自明

數據不證自明
在去醣基化後，透過原生SEC-LC-MS獲得的半胱胺酸複合型ADC的重疊解析完整質譜。比較三種不同的半胱胺酸複合型ADC樣品在藥物負荷逐步增加的情況下的藥物分佈。
使用離子交換層析獲得半胱胺酸連結抗體藥物複合體（輝瑞公司已停產）的電荷異構物圖譜。(A) 在BioResolve SCX mAb，4.6 × 100 mm管柱上，藉著鹽梯度方法，即使用20 mM MES (pH 5.4)，以0.80 mL/min的流速於30分鐘內將氯化鈉濃度從140 mM線性增加到220 mM，所得出的UV層析圖。在BioResolve SCX mAb，4.6 × 50 mm管柱上，使用BioResolve CX pH濃縮液和不含(B)、含5% (C)或含10%乙腈(D)的移動相，藉著pH梯度方法，即以1.00 mL/min的流速於30分鐘內將移動相B的百分比從0%線性增加到100%，所得出的UV層析圖。(E) 在BioResolve SCX mAb，4.6 × 50 mm管柱上，使用BioResolve CX pH濃縮液和移動相（不含、含5%及含10%乙腈），藉著pH梯度方法得出的UV層析疊加圖。UV偵測波長為280 nm。
mAb與其ADC的親水性作用層析分析。數字代表複合體中有多少連接子/活性藥物成分，其中a和b代表位置異構物。*表示連結子/活性藥物成分水解產物。#代表微量氧化。醣基化以牛津標記法標記。F代表岩藻糖，A2代表雙觸角結構，G代表半乳糖（FA2 = G0F、FA2G1 = G1F、FA2G2 = G2F）。
使用Waters Gen-Pak FAX管柱獲得AOC樣品的AEX-MALS分析。圖中顯示疊加莫耳質量的UV 280 nm層析圖。峰邊界由垂直虛線表示。
複合與非複合Trastuzumab的胜肽圖譜分析（UV層析圖）比較
上圖：Trastuzumab生物仿製藥胰蛋白酶分解。
下圖：Trastuzumab emtansine (Kadcyla)，抗體藥物複合體胰蛋白酶分解。
兩種胰蛋白酶分解都使用了RapiZyme胰蛋白酶和PeptideWorks胰蛋白酶蛋白質分解套組，在XSelect Premier CSH C18，2.5 µm，2.1 × 150 mm胜肽分析管柱上的進樣量為100 µL（約10 µg）。相較於未複合的trastuzumab（上圖），Kadcyla層析圖（下圖）中可見到更多峰。
使用ADC ado-trastuzumab emtansine的疏水性二次交互作用效能比較。隨著有機溶劑濃度的增加，XBridge Premier SEC 250 Å，2.5 µm蛋白質分析管柱的變化程度仍可忽略不計，0%到15% MeCN的峰型表現出色。使用高覆蓋率的端羥基PEO填料鍵結，大幅減輕疏水性二次交互作用。
使用HIC分析半胱胺酸複合型ADC。測定三種不同的半胱胺酸複合型ADC樣品在藥物負荷逐步增加的情況下的藥物分佈。

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