生物偶联物色谱柱和试剂盒

生物偶联物色谱柱和试剂盒

让沃特世成为您的生物偶联物和抗体偶联药物(ADC)色谱柱和试剂盒专属供应商,助力您的发现、开发和生产应用。

让沃特世成为您的生物偶联物和抗体偶联药物(ADC)色谱柱和试剂盒专属供应商,助力您的发现、开发和生产应用。

BioResolve色谱柱,适用于mAb和ADC的电荷异构体的完整蛋白分析、表征、监测以及QC。
BioResolve色谱柱,适用于mAb和ADC的电荷异构体的完整蛋白分析、表征、监测以及QC。

概述

随着众多生物制药机构开始研究生物偶联物和抗体偶联药物(ADC)在癌症治疗中的应用,ADC复杂多样的结构成为了分析此类物质的一大挑战。沃特世针对这类特殊的分析挑战推出了协助评估多项重要关键质量属性(CQA)的解决方案,包括使用反相(RP)或疏水作用色谱(HIC)测定药物/抗体比率(DAR)(即使在低浓度下也能精准测定)、使用体积排阻(SEC)色谱柱分离聚集体和碎片,以及在肽图分析中使用PeptideWorks胰蛋白酶酶解试剂盒分析偶联位点,等等。

我们的色谱柱产品十分齐全,包括:

  • 反相色谱柱
  • HIC色谱柱
  • SEC色谱柱
  • 离子交换色谱柱
  • 糖蛋白分析专用柱

无论您是要分析赖氨酸偶联ADC、希望尽可能减少ADC与色谱柱硬件之间的次级相互作用,还是想解决其他数据质量难题,沃特世都有适合您的色谱柱技术,助您实现一致、可靠的生物分离。



利用MaxPeak Premier高性能表面(HPS)技术减少不良的疏水相互作用

利用MaxPeak Premier高性能表面(HPS)技术减少不良的疏水相互作用

Waters MaxPeak Premier色谱柱采用了MaxPeak高性能表面(HPS)技术,能让科研人员更好地掌控色谱分离性能。例如,在根据分子大小分离溶液中的蛋白质时,可能会发生次级相互作用,进而导致样品损失、峰变宽和聚集体定量不准确。MaxPeak高性能表面技术采用具有高覆盖率羟基封端聚环氧乙烷(PEO)表面的亚乙基桥杂化(BEH) SEC颗粒开发,具有出色的生物惰性,可提供更准确的数据。该技术可尽量减少会导致次级相互作用的疏水相互作用,得到出众的峰形和一致的定量结果。

可选规格包括1.7 µm(ACQUITY Premier色谱柱)、2.5 µm(XBridge Premier色谱柱、XSelect Premier色谱柱)以及数款颗粒尺寸和规格≤3 µm的BioResolve Premier色谱柱,沃特世值得信赖的颗粒技术能带给您预期的色谱性能和灵活性。

解决方案


用于测定DAR和药物分布的反相色谱柱

用于测定DAR和药物分布的反相色谱柱

用于分析生物偶联物和抗体偶联药物的沃特世反相色谱柱(例如ACQUITY和XBridge Premier BEH C4蛋白分析专用柱)特别采用了MaxPeak HPS技术,能够尽量减少ADC与色谱柱硬件之间的次级相互作用,是分析赖氨酸偶联ADC的理想之选。与半胱氨酸偶联ADC不同,在赖氨酸偶联ADC中,mAb重链和轻链之间的连接由完整的链内二硫键维持。因此,如果连接子在酸性pH条件下不稳定,更适合采用反相色谱法来分析赖氨酸偶联ADC。此外,沃特世还有采用实心核颗粒技术的反相色谱柱(例如BioResolve RP色谱柱),适合在完整蛋白质和亚基分析中帮助确定结构域水平的连接药物定位。

  • Reversed-Phase Analysis

用于测定DAR的疏水作用色谱(HIC)

用于测定DAR的疏水作用色谱(HIC)

装填无孔颗粒的Waters Protein-Pak高分离度HIC色谱柱含低密度丁基键合相,相较于许多传统的多孔HIC色谱柱,它能在更短的时间内实现出色的分离度,并且使用特定的蛋白质标准品进行了质量测试,可保证不同批次间的性能一致。

  • HIC Analysis

使用SEC色谱柱保证聚集体分析的一致性

使用SEC色谱柱保证聚集体分析的一致性

在磷酸盐缓冲液(即PBS)平台法分析中,无需为不同的蛋白质配制多种SEC洗脱液流动相,使用Waters SEC色谱柱持续获得准确的聚集体、单体和片段数据。此外,由于MaxPeak Premier SEC蛋白分析专用柱填充的是PEO键合BEH颗粒,用它分析可能发生不良次级相互作用的疏水性生物偶联物时无需添加有机溶剂。

  • SEC Analysis

使用阳离子交换色谱表征和监测电荷异构体

使用阳离子交换色谱表征和监测电荷异构体

使用BioResolve SCX mAb色谱柱和BioResolve CX pH浓缩缓冲液运行盐梯度或pH梯度,尽可能减少光学检测中的次级相互作用,从而准确测量半胱氨酸和赖氨酸连接ADC的电荷异构体图谱。如需将离子交换色谱与质谱联用,以探索深层次的结构信息,可选用我们的IonHance CX-MS pH浓缩缓冲液,这款高纯度、挥发性的缓冲液兼容质谱分析,使得在线IEX-MS分析成为现实。

  • Charged Variant Analysis
  • Cation-Exchange Chromatography

使用阴离子交换色谱柱测定寡核苷酸偶联物

使用阴离子交换色谱柱测定寡核苷酸偶联物

抗体寡核苷酸偶联物(AOC)常用于蛋白质诊断,是一种很有前景的靶向细胞疗法。每增加一个偶联位点,AOC的净负电荷就会随之增加,在阴离子交换树脂上的保留性也随之增加。GenPak FAX色谱柱含弱阴离子交换吸附剂,对蛋白质和寡核苷酸样品具有可控的保留性和特殊的选择性。最近的应用研究表明,AEX可与MALS结合使用以获取绝对分子量信息。

  • AEX OIigonucleotide Conjugate Analysis

使用糖蛋白分析专用柱精准定位蛋白质结构中的游离寡糖

使用糖蛋白分析专用柱精准定位蛋白质结构中的游离寡糖

亲水作用色谱(HILIC)被广泛用于分离小分子极性化合物,但除了游离寡糖外,该技术在生物大分子分析中的应用非常有限。有了沃特世大孔径糖蛋白分析专用柱,过去使用HILIC难以获得的完整蛋白质(糖基化或未糖基化)、蛋白质片段和复杂游离寡糖信息现在均可轻松获取。

  • Hydrophillic Interaction Chromatography (HILIC)
  • Released Glycans

快速、自动化且稳定的蛋白酶解工作流程

快速、自动化且稳定的蛋白酶解工作流程

Waters PeptideWorks胰蛋白酶酶解试剂盒适用于手动或自动工作流程,可在2.5小时内为您的实验室提供高效、可重现的肽图,速度是普通自制方法的4倍。采用1:5的酶:肽比,酶解仅需30 min,漏切位点减少78%,受污染的自溶峰减少98%。PeptideWorks非常适合用于测定药物偶联位点、表征蛋白质结构、鉴定蛋白质,以及监测蛋白质修饰(包括翻译后修饰)。

  • Peptides
  • Peptide Mapping
  • Protein Digestion

游离寡糖分析从此变得更轻松、更灵敏

游离寡糖分析从此变得更轻松、更灵敏

使用GlycoWorks试剂盒,重新构建一种精简、快速且高灵敏度的ADC N-糖分析方法。这套解决方案可配合Waters Andrew+移液机器人实现自动化,不仅能在游离N-糖分析中展现出色的荧光和质谱检测性能,还能大幅提高效率。GlycoWorks RapiFluor-MS N-糖分析试剂盒大幅简化了复杂耗时的样品制备环节,只需3个简单步骤,在短短30 min内就能制备好样品。

  • n-glycan analysis
  • glycosylation

蛋白定量不再复杂

蛋白定量不再复杂

ProteinWorks eXpress快速酶解试剂盒可简化和加速蛋白质酶解。利用经过预先检测、具有批次可溯源性的试剂和标准化方案,对血浆和血清中的蛋白质(包括ADC)进行准确、精密且灵敏的LC-MS定量分析。使用针对各种工作流程(包括蛋白质生物分析/DMPK)优化过的试剂盒获得出色的性能和灵活性,实现可重现的蛋白质酶解。

  • Proteins
  • Protein bioanalysis

降低SEC分析成本,性能不打折扣

降低SEC分析成本,性能不打折扣

使用现成可用、经济有效的MaxPeak Premier SEC 250 Å蛋白分析专用保护柱延长SEC分析柱的使用寿命,目标组分的分离度不打折扣,目标大小异构体的分离亦不受影响。  

  • SEC Columns
  • Proteins

应用

简化ADC LC-UV或LC-MS分析的数据采集、处理和报告过程。阅读应用纪要了解更多信息

简化ADC LC-UV或LC-MS分析的数据采集、处理和报告过程。阅读应用纪要了解更多信息


使用Protein-Pak高分离度疏水作用色谱(HIC)柱和光学检测器,基于半胱氨酸偶联ADC上的载药量分布(通过峰面积计算)持续实现可靠、可重现的DAR测定。阅读应用纪要了解更多信息。

使用Protein-Pak高分离度疏水作用色谱(HIC)柱和光学检测器,基于半胱氨酸偶联ADC上的载药量分布(通过峰面积计算)持续实现可靠、可重现的DAR测定。阅读应用纪要了解更多信息。


在ADC的研究、开发和生产中,采用体积排阻色谱法(SEC)测定分子量在100,000-650,000 Da范围内的肽和蛋白质聚集体、单体及碎片。我们基于BEH技术的SEC色谱柱使用MassPrep肽和蛋白质标准品进行质量控制,可确保整个SEC-MS工作流程的分离一致性,有助于ADC表征分析保持高效。阅读应用纪要了解更多信息。

在ADC的研究、开发和生产中,采用体积排阻色谱法(SEC)测定分子量在100,000-650,000 Da范围内的肽和蛋白质聚集体、单体及碎片。我们基于BEH技术的SEC色谱柱使用MassPrep肽和蛋白质标准品进行质量控制,可确保整个SEC-MS工作流程的分离一致性,有助于ADC表征分析保持高效。阅读应用纪要了解更多信息。


使用Waters SCX色谱柱可在常规分析中运行盐梯度和pH洗脱梯度,对赖氨酸和半胱氨酸连接的ADC进行电荷异构体分析。这些耐腐蚀的色谱柱内填充有无孔聚合物颗粒,这些颗粒与经过仔细优化的负电荷磺酸键合相多组分网格接枝 - 在LC和LC-MS应用中可基于电荷分离mAb及其他蛋白质,重现性和分离度俱佳。阅读应用纪要了解更多信息。

使用Waters SCX色谱柱可在常规分析中运行盐梯度和pH洗脱梯度,对赖氨酸和半胱氨酸连接的ADC进行电荷异构体分析。这些耐腐蚀的色谱柱内填充有无孔聚合物颗粒,这些颗粒与经过仔细优化的负电荷磺酸键合相多组分网格接枝 - 在LC和LC-MS应用中可基于电荷分离mAb及其他蛋白质,重现性和分离度俱佳。阅读应用纪要了解更多信息。


完整糖蛋白、糖蛋白片段和糖肽的分离颇有挑战性。与一般的RPLC方法相比,采用HILIC色谱柱分析相当棘手的mAb和ADC亚基可以达到更高的回收率,同时保持良好的分离度。mAb亚基的HILIC分析还可用于评估N-糖基化图谱。Waters HILIC色谱柱中的每一批糖蛋白BEH Amide 300 Å, 1.7 µm填料都采用沃特世糖蛋白性能测试标准品进行了质量控制测试,可确保批间一致性。阅读应用纪要了解更多信息。

完整糖蛋白、糖蛋白片段和糖肽的分离颇有挑战性。与一般的RPLC方法相比,采用HILIC色谱柱分析相当棘手的mAb和ADC亚基可以达到更高的回收率,同时保持良好的分离度。mAb亚基的HILIC分析还可用于评估N-糖基化图谱。Waters HILIC色谱柱中的每一批糖蛋白BEH Amide 300 Å, 1.7 µm填料都采用沃特世糖蛋白性能测试标准品进行了质量控制测试,可确保批间一致性。阅读应用纪要了解更多信息。




数据说明一切

数据说明一切
非变性SEC-LC-MS法分析去糖基化半胱氨酸偶联ADC得到的去卷积完整质量数谱图。比较了三种不同半胱氨酸偶联ADC样品随载药量增加的药物分布。
采用离子交换色谱法分析辉瑞公司(Pfizer)一种已停产的半胱氨酸连接抗体偶联药物的电荷异构体。(A) UV色谱图,采集条件如下:流动相含20 mM MES (pH 5.4),采用氯化钠浓度在30 min内从140 mM线性增加到220 mM的盐梯度,流速0.80 mL/min,色谱柱为BioResolve SCX mAb, 4.6 x 100 mm色谱柱。在BioResolve SCX mAb, 4.6 x 50 mm色谱柱上采用pH梯度法获得的UV色谱图,使用BioResolve CX pH浓缩液和不添加乙腈(B)、添加5%乙腈(C)或添加10%乙腈(D)的流动相,且流动相B在30 min内从0线性增加到100%,流速为1.00 mL/min。(E)使用BioResolve CX pH浓缩液以及不添加乙腈、添加5%乙腈和添加10%乙腈的流动相,在BioResolve SCX mAb, 4.6 × 50 mm色谱柱上通过pH梯度法获得的UV色谱图的叠加图。UV检测波长为280 nm。
mAb及其ADC的亲水作用色谱分析。数字表示偶联药物中存在的连接子/有效负载数量,a和b表示位置异构体。*表示连接子/有效负载的水解产物。#表示痕量氧化。糖基化遵循Oxford Notation方法进行标记。F表示岩藻糖,A2表示双天线结构,G代表半乳糖(FA2 = G0F,FA2G1 = G1F,FA2G2 = G2F)。
使用Waters Gen-Pak FAX色谱对AOC样品进行AEX-MALS分析。280 nm处的UV色谱图与摩尔质量叠加显示。垂直虚线指示峰边界。
偶联与未偶联曲妥珠单抗的肽图分析(UV色谱图)比较
上图:曲妥珠单抗生物类似药的胰蛋白酶酶解。
下图:曲妥珠单抗-美坦新偶联物Kadcyla(抗体偶联药物)的胰蛋白酶酶解。
两种物质的胰蛋白酶酶解均使用RapiZyme胰蛋白酶和PeptideWorks胰蛋白酶酶解试剂盒,在XSelect Premier CSH C18, 2.5 µm, 2.1 x 150 mm肽分析专用柱上进样100 μL(约10 µg)进行分析。与未偶联曲妥珠单抗(上图)相比,在Kadcyla色谱图(下图)中观察到了更多的峰。
使用ADC曲妥珠单抗-美坦新偶联物比较不同色谱柱的疏水次级相互作用性能。随着有机溶剂浓度增加,XBridge Premier SEC蛋白分析专用柱(250 Å, 2.5 µm)所得结果的变化程度仍然可忽略不计,在0%~15%乙腈范围内表现出优异的峰形。高覆盖率羟基封端PEO填料键合颗粒大幅减少了疏水次级相互作用。
使用HIC分析半胱氨酸偶联ADC。测定了三种不同半胱氨酸偶联ADC样品随载药量增加的药物分布。

网络研讨会和资源



  • 文章转载

将二氟乙酸用作离子对试剂,实现高灵敏度的抗体偶联药物LC-MS分析

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使用质谱级二氟乙酸改善mAb和ADC的亚基分析

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