遺伝子治療薬用の AEX カラムおよび標準試料

遺伝子治療薬用の AEX カラムおよび標準試料

ウォーターズ製品を用いて、多様な遺伝子治療薬に対応する電荷ベースの分析法を開発します。ウォーターズの AEX カラムは、合成オリゴヌクレオチド、CRISPR 遺伝子編集、mRNA、プラスミド DNA、ウイルスベクターに焦点を当てている医薬品開発者に、汎用性の高い保持および選択性を提供します。

ウォーターズ製品を用いて、多様な遺伝子治療薬に対応する電荷ベースの分析法を開発します。ウォーターズの AEX カラムは、合成オリゴヌクレオチド、CRISPR 遺伝子編集、mRNA、プラスミド DNA、ウイルスベクターに焦点を当てている医薬品開発者に、汎用性の高い保持および選択性を提供します。


概要

AEX は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、siRNA、CRISPR シングルガイド RNA(sgRNA)、リボヌクレオタンパク質複合体、mRNA、DNA プラズミド、ウイルスキャプシドなどの遺伝子治療薬の分離に用いられる基本的な手法です。陰イオン交換のメカニズムは、負に荷電した分析種と正に荷電した固定相の間の静電的相互作用に基づいています。生体分子の負電荷が強いほど、カラムの樹脂によりしっかりと吸着します。移動相の塩濃度または pH が変化すると、電荷密度に基づいて分析種が分離され、溶出します。

ワークフローに最適なウォーターズの AEX カラムと標準試料を選択することで、分析に最適な条件を確保することができます。



弱陰イオン交換カラムによる分離の改善

弱陰イオン交換カラムによる分離の改善

Waters Gen-Pak FAX(4.6 × 100 mm)カラムにより、核酸の陰イオン交換 HPLC で良好な分離が得られます。Gen-Pak FAX Column(Gen-Pak FAX カラム)には DEAE 官能基を含む非多孔質の樹脂をベースにした弱陰イオン交換体が含まれます。粒子径 2.5 μm の粒子が充塡されており、分析アプリケーションおよび微量分取アプリケーションに適しています。

  • 弱陰イオン交換非多孔性ポリマーカラム
  • 合成オリゴヌクレオチドおよび核酸の高分離能分離
  • 特定のアプリケーションで必要な、独自の DEAE の選択性および低保持

短時間で優れた分離を実現する強陰イオン交換カラム

短時間で優れた分離を実現する強陰イオン交換カラム

Waters Protein-Pak Hi Res Q(4.6 × 100 mm)イオン交換(IEX)カラムは、組換えタンパク質、モノクローナル抗体、およびその他の生体化合物の特性解析を支援します。非多孔性かつ高い化合物結合能を有するこの粒子は、多くの従来の多孔性 IEX カラムと比較して短時間で荷電分析種の卓越した分離を実現します。

  • 強陰イオン交換非多孔性ポリマー充塡カラム
  • 第四級アミンリガンド機能による高い結合キャパシティ
  • さまざまな生体分子に適合

Webinar:核酸のイオン交換およびサイズ排除に関する最新情報

mRNA および AAV の分離用の新規 AEX 分析法および SEC 分析法の開発

mRNA ワクチンの成功により、核酸ベースの医薬品の機能が実証されています。安定性、不均一性、薬物設計、構造機能相関関係に関するより多くの情報を得るには、より多くの分析的特性解析ツールが必要です。AEX 分析法およびサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)分析法は、核酸およびそのキャリアの高分離能分離を得るのに適しています。この Webinar では、AAV、mRNA などの複数の原薬およびサンプルの種類に関する、より頑健なプラットフォーム分析法について詳しく説明します。

mRNA および AAV の分離用の新規 AEX 分析法および SEC 分析法の開発

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ソリューション


WAX オン、WAX オフ

WAX オン、WAX オフ

オリゴヌクレオチドおよび長い核酸には、ネイティブ条件下では、負に荷電したポリアニオン性リン酸骨格が含まれます。この官能基のため、核酸には AEX での分離が適しています。Waters Gen-Pak FAX カラムは、合成オリゴヌクレオチドから mRNA までの核酸用に設計された非多孔性の 2.5 µm 弱陰イオン交換樹脂です。

  • Synthetic Oligonucleotide Separations
  • Oligonucleotide Anion Exchange Separations
  • Empty/Full Viral Capsid Analysis

SAX から MAX まで

SAX から MAX まで

Protein-Pak Hi Res Q カラムには、第 4 級アミン官能基を持つ非多孔性ポリマー樹脂が含まれています。その強陰イオン/陽イオン交換(SAX)でのアプリケーションは、mRNA の完全性分析、CRISPR シングルガイド RNA(sgRNA)とリボ核タンパク質複合体の形成、プラスミド DNA のアイソフォームの定量、ウイルスベクター化された遺伝子治療薬の空/完全封入分析など多数あり、広範囲にわたっています。

  • Oligonucleotide Anion Exchange Separations
  • Intact mRNA Analysis
  • Evaluating CRISPR Guide RNA and Ribonucleoprotein Complex Formation
  • Empty/Full Viral Capsid Analysis

アプリケーション

Gen Pak FAX 弱陰イオン交換樹脂の使用例は多数あり、タンパク質、オリゴヌクレオチド、核酸に対して優れた分離能、高回収率、独自の選択性を示します。カラムの保持力が低いため、移動相を調整して分離を改善し、変性移動相条件によって独自の脱アミノ化アイソフォーム分離における選択性が得られます。 

Gen Pak FAX 弱陰イオン交換樹脂の使用例は多数あり、タンパク質、オリゴヌクレオチド、核酸に対して優れた分離能、高回収率、独自の選択性を示します。カラムの保持力が低いため、移動相を調整して分離を改善し、変性移動相条件によって独自の脱アミノ化アイソフォーム分離における選択性が得られます。 




データがすべてを語る

データがすべてを語る
720008364en-f3 Cas9 タンパク質との複合体形成後、sgRNA がわずかに過剰に存在することがわかりました。260 nm(黒)と 280 nm(赤)の両方で、複合体形成をモニターしました。
UV chromatograms (260 nm) obtained for an oligo dT ladder using various AEX columns. Salt gradient separations were performed at 30 ˚C with a 0.72 mL/min flow rate, 20 mM Tris pH 8 buffer mobile phase, and a 10 minute gradient running from 300 to 600 mM NaCl. さまざまな AEX カラムを使用してオリゴ dT ラダーについて取得した UV クロマトグラム(260 nm)。塩グラジエントによる分離を、30 ℃ で流速 0.72 mL/分、20 mM トリス(pH 8)バッファー移動相、10 分間で 300 ~ 600 mM NaCl のグラジエントを使用して行いました。
ΦX174 plasmid isoform (L, O, SC) separation on a Waters Protein-Pak Hi Res Q column. 20 mM Tris pH 7.4, 1.69–1.75 M tetramethylammonium chloride in 10 min. Flow rate: 0.4 mL/min. Waters Protein-Pak Hi Res Q カラムでの φX174 プラスミドアイソフォーム(L、O、SC)の分離20 mM トリス pH 7.4、10 分間で 1.69 ~ 1.75 M のテトラメチル塩化アンモニウム。流速:0.4 mL/分。
Quantification of % empty capsid in various empty and full capsid mix using the optimized AEX method. 最適化された AEX 分析法を使用した、さまざまな空のキャプシドと完全なキャプシドの混合物中の空のキャプシドの割合の定量。
Ion exchange separations of Cas9 mRNA (A) and EPO mRNA (B) using an AEX column, a Tris buffered mobile phase, and sodium chloride gradient combined with a series of different column temperatures ranging from 30 to 60 ° AEX カラム、トリスで緩衝化した移動相、塩化ナトリウムグラジエントを使用し、様々なカラム温度(30 ~ 60 ℃)で行った Cas9 mRNA(A)および EPO mRNA(B)のイオン交換分離。
Separation of an 18-mer oligonucleotide on the Gen-Pak FAX (WAT015490) highlighting efficient separation of N-1, N+1, and suspected deaminated impurities (X) with an optimized high organic method. Nercessian, L., et al. (2024). Robustness evaluation of weak anion exchange chromatography method for the purity analysis of therapeutic oligonucleotides. Journal of Chromatography A, 1736, 465412. AEX カラム、トリスで緩衝化した移動相、塩化ナトリウムグラジエントを使用し、様々なカラム温度(30 ~ 60 ℃)で行った Cas9 mRNA(A)および EPO mRNA(B)のイオン交換分離。

Webinar およびリソース


  • How-to Video

核酸のイオン交換およびサイズ排除に関する最新情報

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遺伝子治療薬用の AEX カラムおよび標準試料の詳細はこちらから。

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