イオン対逆相(IPRP)クロマトグラフィーは、合成オリゴヌクレオチドの特性解析および不純物分析に最適な分析法です。この分析法は、合成およびプロセス関連の不純物を、陰イオン交換(AEX)、HILIC、SEC などの他のクロマトグラフィー手法よりも良好に分離するのに役立ちます。しかし、この手法に課題がないわけではありません。イオン対試薬の純度と安定性、クロマトグラフィーハードウェアへの非特異的吸着、吸着剤のバッチ間ばらつきなど、複数の要因が分離性能と再現性に直接影響する可能性があります。IPRP は、最適な分離が高 pH および高温度条件に依存しており、カラムの材質が高 pH・高温耐性であることが必要です。
ウォーターズのオリゴヌクレオチド逆相カラムを使用することで、結果に対する信頼性が向上します。
オリゴヌクレオチドなどの核酸は、ポリアニオン性(負に荷電)であり、ステンレススチールカラムの金属酸化物表面にすぐに吸着します。Waters MaxPeak Premier Oligonucleotide カラムには、不活性な有機/無機ハイブリッドシリカベースの表面ケミストリーが使用されており、これによって核酸の NSA がほとんど解消され、感度、再現性、生産性が向上します。 ウォーターズ製品を利用することで、分析前の時間のかかるカラムの不動態化処理およびサンプルのコンディショニングのステップが不要になります。
合成オリゴヌクレオチドの IP-RP クロマトグラフィーでは、サイズ、電荷、疎水性の軽微な変化に基づいて、サンプルの成分が分離されます。Waters ACQUITY(UPLC:粒子径 1.7 µm)および XBridge(HPLC/UHPLC:粒子径 2.5 µm)Premier Oligonucleotide BEH C18 カラムにより、オリゴヌクレオチドサンプルについて卓越した分離能、感度、再現性が得られます。
Waters ACQUITY および XBridge Premier Oligonucleotide カラムには、Waters BEH(エチレン架橋型ハイブリッド)C18 ハイブリッドシリカ粒子が充塡されており、高 pH・高温条件下で著しく長いカラム寿命が得られると同時に卓越した分離性能が維持されます。
ウォーターズは、オリゴヌクレオチド逆相カラムを補完して、システム適合性試験、分析法開発、トラブルシューティングが容易になる、質の高いロット追跡可能な広範な分析用標準試料を提供しています。これには、すべてのウォーターズのオリゴヌクレオチドブランドのカラムを QC 検証するための 15 ~ 35 mer の oligodT ラダーを含む Waters MassPREP オリゴヌクレオチド標準試料、LC-MS/MS フラグメンテーションおよび配列分析のベンチマーク用の 20 mer の ssDNA 標準試料、脂質結合高度修飾アンチセンスオリゴヌクレオチド(ASO)、ssDNA および dsDNA などが含まれています。
すべての ACQUITY および XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 カラムは、VanGuard FIT カラムフォーマットで入手できます。これには、同じ吸着剤が充塡された完全一体型の 5 mm のプレカラムカートリッジが含まれており、分析カラムの汚れを防ぐガードカラムとして機能します。この完全一体型設計は、サンプルの分離にまったく影響しません。このカートリッジは、汚れが発生した場合に簡単に交換でき、これによって分析カラムの寿命が延びます。